离子色谱2积分安培检测法测定气溶胶中的氨基酸
第32 卷
2004 年9 月
分析化学(FENXI HUAXUE) 来稿摘登
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第9 期
1267
来稿摘登
离子色谱2积分安培检测法测定气溶胶中的氨基酸
凌艳艳1 朱 岩
3 1 施青红2 朱京平1 陈建芳3
1 (浙江大学西溪校区化学系,杭州310028) 2 (杭州商学院食品系,杭州310012)
3 (国家海洋局海洋二所海化室,杭州310012)
2003206219 收稿;2003212222 接受
本文系国家自然科学基金(No. 20375035) 、浙江省自然科学基金、分析测试基金及国家海洋局海底科学开放实验室资助项目
1 引 言
离子色谱直接测定氨基酸方法采用的是氢氧化钠/ 醋酸钠梯度淋洗,金电极为工作电极, pH 电极为参比电极,积分
脉冲安培检测,同时测定17 种α2氨基酸及部分糖类和糖胺。该方法测定氨基酸灵敏度高,但由于梯度而造成的漂移较
大,且高浓度的醋酸钠,使色谱的系统压力较高,在梯度过程中的系统压力有很大的差异。因此,本实验对该方法进行了
改进,采用NaCl 代替醋酸钠,由于氯离子的洗脱能力大于醋酸根离子,较低浓度的NaCl 就能满足分离的需要,因此可降
低柱压,梯度变化所造成的漂移也随之减少。
2 实验部分
2. 1 仪器和试剂 KB2120 型空气采集泵;Dionex2500 离子色谱仪(美国戴安公司) ; GP50 梯度泵;25 μL 气动进样阀;
Dionex公司AminoPacTMPA10 预柱和分析柱;工作电极为Au 电极,pH2Ag/ AgCl 电极为参比电极,ED40 积分安培检测器。实
验所用各种氨基酸均为生物试剂,其它分析所用试剂均为分析纯。NaOH 储备液为50 %( m/ V) ,所有储备液都用去离子
水配制。淋洗液NaOH采用加热煮沸的去离子水稀释NaOH储备液配制。
2. 2 样品处理 使用KB2120 型空气采集泵,直径为4. 6 cm 微孔玻璃纤维膜(4. 5μm) 。采样点分别为杭州市区及太平
洋上空。用打孔器(Φ 0. 8 cm) 于玻璃纤维膜上取一份(占总面积的15. 43 %) ,放入安培瓶中,取5 mL 浓度为6 mol/ L
HCl ,在100～150 ℃,水解24 h ,然后过滤,取滤液100μL 在60 ℃下用N2 吹干以除去HCl ,然后用100μL 水溶解,就可直接
进样,进行离子色谱分析。
2. 3 实验方法 AminoPacTMPA10 预柱(2 mm×50 mm) + AminoPacTM PA10(2 mm×250 mm) 分离柱;流速:0. 25 mL/ min。流
动相:NaOH/ NaCl 梯度淋洗:0～10 min ,50 % NaOH(0. 25 mol/ L) , 50 % NaCl (0. 20 mol/ L) ; 10～30 min , 100 % NaOH; 30. 1
～52. 5 min 20 % NaOH , 80 % H2O; 52. 6～65 min , 52 %～40 % NaOH , 40 % H2O; 8 %～20 % NaCl ; 65～73 min , 40 % NaOH ,40 % H2O; 20 % NaCl ; 73. 1～90 min , 10 % H2O , 90 % NaCl。40. 1 min 进样。积分安培检测电位波形按标准条件设定。
3 结果与讨论
3. 1 梯度条件的优化 对不同淋洗液的洗脱能力比较,对氨基酸的淋洗强度由大到小分别为:NaNO3 、Na2SO4 、Na2CO3 、NaCl 、NaAc。为选择适合的洗脱强度,选择NaCl 与NaOH梯度进行氨基酸分析。比较以往采用的1 mol/ L NaAc 时,漂移
范围为30～50 nC , 最大系统压力约为22048 kPa ; 而类似的分离采用0. 2 mol/ L NaCl 时,漂移范围在10～20 nC 之间,最
大系统压力为17. 2 MPa。对不同类型的氨基酸特别是较强保留能力的一些氨基酸分离条件进行优化,最终得到2. 3 中
的梯度分离条件。
3. 2 工作曲线、检出限与重现性 用设定的方法分别不同浓度的氨基酸,得到精氨酸、赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、丝氨酸、膊氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和色氨酸等17 种
氨基酸的线性相关系数均大于0. 99 ,保留时间的重现性(RSD , n = 7) 小于0. 70 % ,而峰高和峰面积的RSD 小于5 %。检出
限除谷氨酸为0. 22μmol/ L 外,其余氨基酸均低于0. 06μmol/ L。
3. 3 样品测定和回收率 分别对3 个海洋气溶胶样品和2 个陆地气溶胶样品进行测定,各种氨基酸的回收率结果在
66. 52 %～119. 7 %之间。, http://www.100md.com(凌艳艳1 朱 岩 施青红2 朱京平1 陈建芳3)
2004 年9 月
分析化学(FENXI HUAXUE) 来稿摘登
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第9 期
1267
来稿摘登
离子色谱2积分安培检测法测定气溶胶中的氨基酸
凌艳艳1 朱 岩
3 1 施青红2 朱京平1 陈建芳3
1 (浙江大学西溪校区化学系,杭州310028) 2 (杭州商学院食品系,杭州310012)
3 (国家海洋局海洋二所海化室,杭州310012)
2003206219 收稿;2003212222 接受
本文系国家自然科学基金(No. 20375035) 、浙江省自然科学基金、分析测试基金及国家海洋局海底科学开放实验室资助项目
1 引 言
离子色谱直接测定氨基酸方法采用的是氢氧化钠/ 醋酸钠梯度淋洗,金电极为工作电极, pH 电极为参比电极,积分
脉冲安培检测,同时测定17 种α2氨基酸及部分糖类和糖胺。该方法测定氨基酸灵敏度高,但由于梯度而造成的漂移较
大,且高浓度的醋酸钠,使色谱的系统压力较高,在梯度过程中的系统压力有很大的差异。因此,本实验对该方法进行了
改进,采用NaCl 代替醋酸钠,由于氯离子的洗脱能力大于醋酸根离子,较低浓度的NaCl 就能满足分离的需要,因此可降
低柱压,梯度变化所造成的漂移也随之减少。
2 实验部分
2. 1 仪器和试剂 KB2120 型空气采集泵;Dionex2500 离子色谱仪(美国戴安公司) ; GP50 梯度泵;25 μL 气动进样阀;
Dionex公司AminoPacTMPA10 预柱和分析柱;工作电极为Au 电极,pH2Ag/ AgCl 电极为参比电极,ED40 积分安培检测器。实
验所用各种氨基酸均为生物试剂,其它分析所用试剂均为分析纯。NaOH 储备液为50 %( m/ V) ,所有储备液都用去离子
水配制。淋洗液NaOH采用加热煮沸的去离子水稀释NaOH储备液配制。
2. 2 样品处理 使用KB2120 型空气采集泵,直径为4. 6 cm 微孔玻璃纤维膜(4. 5μm) 。采样点分别为杭州市区及太平
洋上空。用打孔器(Φ 0. 8 cm) 于玻璃纤维膜上取一份(占总面积的15. 43 %) ,放入安培瓶中,取5 mL 浓度为6 mol/ L
HCl ,在100～150 ℃,水解24 h ,然后过滤,取滤液100μL 在60 ℃下用N2 吹干以除去HCl ,然后用100μL 水溶解,就可直接
进样,进行离子色谱分析。
2. 3 实验方法 AminoPacTMPA10 预柱(2 mm×50 mm) + AminoPacTM PA10(2 mm×250 mm) 分离柱;流速:0. 25 mL/ min。流
动相:NaOH/ NaCl 梯度淋洗:0～10 min ,50 % NaOH(0. 25 mol/ L) , 50 % NaCl (0. 20 mol/ L) ; 10～30 min , 100 % NaOH; 30. 1
～52. 5 min 20 % NaOH , 80 % H2O; 52. 6～65 min , 52 %～40 % NaOH , 40 % H2O; 8 %～20 % NaCl ; 65～73 min , 40 % NaOH ,40 % H2O; 20 % NaCl ; 73. 1～90 min , 10 % H2O , 90 % NaCl。40. 1 min 进样。积分安培检测电位波形按标准条件设定。
3 结果与讨论
3. 1 梯度条件的优化 对不同淋洗液的洗脱能力比较,对氨基酸的淋洗强度由大到小分别为:NaNO3 、Na2SO4 、Na2CO3 、NaCl 、NaAc。为选择适合的洗脱强度,选择NaCl 与NaOH梯度进行氨基酸分析。比较以往采用的1 mol/ L NaAc 时,漂移
范围为30～50 nC , 最大系统压力约为22048 kPa ; 而类似的分离采用0. 2 mol/ L NaCl 时,漂移范围在10～20 nC 之间,最
大系统压力为17. 2 MPa。对不同类型的氨基酸特别是较强保留能力的一些氨基酸分离条件进行优化,最终得到2. 3 中
的梯度分离条件。
3. 2 工作曲线、检出限与重现性 用设定的方法分别不同浓度的氨基酸,得到精氨酸、赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、丝氨酸、膊氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸和色氨酸等17 种
氨基酸的线性相关系数均大于0. 99 ,保留时间的重现性(RSD , n = 7) 小于0. 70 % ,而峰高和峰面积的RSD 小于5 %。检出
限除谷氨酸为0. 22μmol/ L 外,其余氨基酸均低于0. 06μmol/ L。
3. 3 样品测定和回收率 分别对3 个海洋气溶胶样品和2 个陆地气溶胶样品进行测定,各种氨基酸的回收率结果在
66. 52 %～119. 7 %之间。, http://www.100md.com(凌艳艳1 朱 岩 施青红2 朱京平1 陈建芳3)