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编号:10796080
流式细胞技术在肿瘤研究中的应用
http://www.100md.com 《中华医学实践杂志》 2005年第8期
流式细胞技术,1流式细胞仪工作原理,2流式细胞术在肿瘤细胞凋亡中的应用,3流式细胞术在肿瘤多药耐药研究中的应用,4流式细胞术检测肿瘤细胞周期
     流式细胞术(FCM)是利用流式细胞仪对微小生物颗粒物的多种物理、生物学特性进行定量、分析检测的技术。是当代激光、液体力学、光学和电子等学科技术高度发展的产物,是生命科学研究领域中先进的仪器之一。具有检测速度快,测量指标多,采集数据量大,分析全面,方法灵活等特点。其在肿瘤研究中已广泛应用,新试剂的不断发现使实验费用日益降低,不仅为临床提供重要的诊断依据,也使中心实验室的研究水平、实验技术提高到一个新的高度。

    1 流式细胞仪工作原理

    流式细胞术是近年来荧光分析技术的创举,开创了生物细胞研究的新领域。工作原理是待测细胞被制成单细胞悬液,经特异性荧光染料染色后加入样品管中,在气体压力推动下进入流动室,流动室内充满鞘液,利用同轴流动的设计,使得样品流和鞘液流形成的流束始终保持着一种分层鞘流的状态,鞘液和样品流组成一个圆形的流束,一起自喷嘴的圆形宝石孔喷射出来,进入流动室,与水平方向的激光光束垂直相交,该区称为测量区。细胞依次排列成单行,每个细胞以均等的时间依次通过测量区,被荧光染料染色的细胞受到强烈的激光照射后发出荧光,同时产生散射光。产生的光散射信号基本上反映了细胞体积大小,细胞发出的荧光信号和散射光信号,同时被呈90°角方向的荧光光电倍增管和前向光电二极管接收,被积分放大后转换为电子信号输入电子信息接收器,在多道脉冲高度分析仪的荧光屏上,以一维组方图或二级点阵图及数据表或三维图形显示出,计算机快速而精确地将所测数据计算出来,结合多参数分析,实现了细胞的定量分析。流式细胞术可检测细胞的很多参数,分为结构参数和功能参数,结构参数描述细胞的形态特征和化学组成,功能参数是描述细胞的理化特性。

    2 流式细胞术在肿瘤细胞凋亡中的应用

    2.1 细胞凋亡的检测 按凋亡检测试剂盒Annexin V(美国PharMingen公司)说明书操作,所检测的是凋亡细胞质膜改变 ......

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