关键词: cDNA合成;逆转录酶;温度;时间

     0 引言

    建立cDNA文库并从中筛选出目的基因是一种十分有效的寻找未知基因的手段.cDNA文库的构建过程可粗分为总RNA的提取，mRNA的纯化，cDNA的合成以及将cDNA克隆入载体等几个主要步骤，其中cDNA的合成是其中最复杂也是文库建立成败的关键步骤.我们在建立肝癌细胞cDNA文库时经历了多次cDNA的合成过程，对其中的某些条件作了比较研究，得到了一些有益的经验.

    1 材料和方法

    1.1 材料 合成cDNA所用mRNA是从肝癌细胞系HHCC提取;禽源反转录酶AMV系Promega公司产品;基因工程反转录酶ExpandTM Reverse Transcriptase系宝灵曼公司产品;[α32 P]-dCTP系北京亚辉生物医学工程公司产品;紫外分光光度计Spectrometer lambda14系Perkin Elmer公司产品;放射性计数仪Radiation Monitor系美国SE公司产品.

    1.2 合成cDNA时反转录酶的选择 mRNA经过紫外分光光度计验证其纯度并准确定量后分成2份 ......