作者：柏邵春

    肿瘤是一种进行性的多基因紊乱疾病。恶性肿瘤的死亡率极高。在我国，恶性肿瘤更是各种人类疾病中的头号杀手。探清这一疾病发生的分子生物学基础无论是对肿瘤的早期诊断还是有效治疗，都将带来彻底的改观。自本世纪50年代以来，世界各国就展开了对肿瘤发生机制的探讨，在较长的一段时间内，并未取得大的进展。这与当时技术和研究手段的局限性是分不开的。70年代末，分子生物学尤其是分子遗传学的兴起为肿瘤的研究带来了新的曙光。各种分子生物学手段发明和介入使得肿瘤的研究日新月异。自80年代末期开始，人类基因组计划的实施和遗传学的进步更是大大推动了肿瘤生物学的研究，迄今，已有多种肿瘤的致病基因被相继克隆，如神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤等，数个抑癌基因亦被发现和克隆，如p53,Rb,p16等。所有这些发展与许多先进技术的应用是分不开的。本文就近年来开发的在肿瘤分子遗传学研究领域的新兴技术作一扼要综述。

    一、DNA水平的研究

    1. 定位克隆癌基因和抑癌基因

    利用各种DNA多态性标记对癌基因或抑癌基因进行染色体定位进而克隆该基因。定位克隆目前主要有两种策略；一是对遗传性肿瘤家系进行连锁分析，将癌基因定位于染色体某一位置再进行克隆。其二，进行染色体杂合缺失的研究，找出某种肿瘤共同缺失的片段，再克隆包含在该片段中的抑癌基因。这两者的共同之处在于首先葡萄肿瘤相关基因的染色体位置信息，再利用物理克隆的手段获得癌基因或抑癌基因。其不同在于前者主要是针对遗传性肿瘤，需要分析携带肿瘤的高发家系；后者则是针对散发性肿瘤。目前常用的DNA多态性标记是遍布基因组的各种微、小卫星DNA标记。

    对于某种遗传病相关的基因，可通过以上标记物的连锁分析方法确定它在染色体上的位置。目前利用300-400个高度多态性的微卫星标记可以在一个高发的遗传病家系中进行全基因组的扫描，将致病基因定位于10cM以下。乳腺癌基因BRCA1就是利用连锁分析的方法定位克隆的。1990年美国的研究者利用连锁分析将乳腺癌基因定位于17号染色体上，并发现更准确的位置在遗传标记D17S579附近。通过对该区域的DNA片段进行测序后克隆了该基因[1]。

    对于散发性肿瘤来说，人们只能得到肿瘤患者的群体样本。长期的细胞遗传学的研究证实，几乎所有的肿瘤细胞都存在染色体片段的非随机性丢失。这意味着这些丢失的片段中必然包含着某些与肿瘤相关的基因，这就是杂合性缺失(loss of heterozygosity)的概念。所谓杂合性缺失即一个位点上两个多态性的等位基因中的一个出现初恋或缺失。杂合性缺失在肿瘤细胞中是一种非常常见的DNA变异 ......