莪术的质量研究.PDF
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2006年2月23日
| 第1页 |
参见附件(168KB，5页)。
莪术的质量研究
王 琰3
, 王慕邹
(中国医学科学院、中国协和医科大学药物研究所 ,北京 100050)
摘要: 目的 研究莪术的化学成分及其药理作用 ,寻找与中医用药功能主治相吻合的有效成分 ,并比较不同品
种及产地的莪术在质量上的差异。方法 用柱色谱的方法分离提取单体化合物 ,确定结构 ,并分别进行药效学实
验 ,确定有效成分 ,通过 HPLC比较不同品种中有效成分含量 ,评价莪术的质量。结果 从中提取分离了 7 个单体化
合物 ,姜黄素显出较强的药理活性 ,但在广西莪术中未检出;吉马酮的含量较高 ,有一定的活性 ,在3种莪术中均有分
布;挥发油作为一个提取部位 ,显出较强的药理活性。结论 莪术中姜黄素是主要有效成分之一 ,吉马酮可选作特
征成分 ,挥发油可为有效部位。莪术不同品种所含成分有显著差异 ,以此3个指标作为莪术质量评价指标。
关键词: 中药莪术; 有效成分; 药理活性; 质量研究; 高效液相色谱法
中图分类号: R917 ; R927. 11 文献标识码: A 文章编号: 0513 - 4870(2001) 11 - 0849 - 05
中药莪术是姜科姜黄属植物的根茎 ,是常用传
统中药。《中国药典》 2000 年版一部共收载了 3 种莪
术,即蓬莪术(莪术) Curcuma phaeocaulis Valeton ,广
西莪术(桂莪术) Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C.
F.Liang 和温郁金(温莪术) Curcuma wenyujin Y. H.
Chen et C. Ling。中医认为莪术有破淤、行气、消积
和止痛的功效[1 ]。近年来 ,还发现它有抗癌、抗早
孕、抗凝血、抗氧化和保肝等活性[2 ]。但报道大多是
药材总提取物的药理活性及其在临床上的应用 ,而
对其物质基础 化学成分和药效、作用机理及二
者的相关性的研究却少有报道。寻找与中医用药功
能主治基本吻合的有效成分来控制药材的品质是研
究的关键。我们从温莪术中分离提取了7个单体化
合物即姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄
素、莪术醇、莪术二酮、异莪术烯醇和吉马酮 ,并将它
们和挥发油提取物分别进行了体外抗人卵巢癌
A2780、结肠癌 HCT、鼻咽癌 KB 的药效学及体内对大
鼠和小鼠角叉菜胶性关节肿的抑制作用实验 ,进一
步比较了化合物之间的药效作用 ,为确定有效成分
提供依据;同时 ,建立了 HPLC方法对莪术的成分进
行了研究 ,测定了各成分在不同品种莪术中的含量 ,并结合药效学试验结果 ,选用姜黄素、吉马酮和挥发
油3个指标共同控制药材质量 ,为评价不同品种及
产地的莪术提供了线索。
收稿日期: 2001203226.
基金项目: 国家九五攻关专项基金资助项目(969030202) .
作者简介: 王 琰(1970 - ) ,女,助理研究员.
3
Tel : (010) 63165238 , Fax : (010) 63017757 ,E 2mail :wangyan @imm. ac. cn
材 料 与 方 法
材料与仪器 莪术样品由本所植物室陈毓亨研
究员提供并鉴定;人卵巢癌 A2780 ,结肠癌 HCT ,鼻咽
癌 KB 瘤株由本所药理室陈毓亨研究员提供并鉴
定;Wistar大鼠( ♂,170 - 180 g)和昆明种小鼠( ♂,18 - 22 g)由中国医学科学院实验动物中心提供。
HP1100 高效液相色谱:二极管阵列检测器
(HPLC2DAD) 系统 , HPRev. A. 04. 01 化学工作站;
Waters 510 型和 501 型高压泵串联(Waters ,美国) ;
Rheodyne 7125 进样阀(美国) ; SPD22A 分光检测器
(岛津 ,日本) ; Waters Baseline 810 型色谱工作站
(Waters ,美国) ;伯乐450酶标仪(伯乐公司) 。
姜黄素提取分离 取莪术的干燥根茎 ,粉碎 ,过
40目筛 ,用石油醚(30 - 60 ℃)提取除去挥发油。残
渣用甲醇提取 ,得棕黄色膏状物 ,膏状物用硅胶进行
柱色谱。氯仿洗脱 ,得3种姜黄素单体。
挥发油提取分离 用水蒸汽法从温莪术中提取
总挥发油 ,用硅胶柱层析 ,依次以石油醚及石油醚2
乙酸乙酯洗脱 ,得4种挥发油单体。
体外抗肿瘤试验 用MTT法[3 ]
,测定 7 个化合
物以及 3 种莪术的挥发油、乙醇提取物对 3 种癌细
胞的杀伤作用的选择性。
姜黄素对大鼠和小鼠角叉菜胶性关节肿的抑制
作用 实验方法参见文献[4 ]。
3 种姜黄素成分的反相 HPLC分析 用 HPLC2
DAD系统进行分析。色谱柱: Inertsil ODS 23 (C18 ,5
μm ,250 mm×416 mm ,GL Science Cop. ,Japan) ;流动
相:甲醇2异丙醇2水2冰乙酸(20∶ 27∶ 48∶ 5) ;流速:015
· 948 · 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2001 ,36(11) :849 - 853
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.mL· min
- 1;检测波长P 波宽:420 nmP 16 nm;参比波长P
波宽:550 nmP 100 nm;色谱峰光谱采集范围: 190 -
500 nm;柱温:25℃。
4种挥发油成分的反相 HPLC分析 用 Waters
510型和501 型高压泵串联组装 HPLC系统进行分
析。色谱柱: Inertsil ODS 23 (C18 ,5μm ,250 mm ×416
mm ,GL Science Cop. ,Japan) 。以不同比例的甲醇2水
梯度洗脱:85∶ 15 ,保持15 min ,流速018 mL· min
- 1; (85
∶ 15 →90∶ 10)P 1 min ,保持 9 min ,流速 110 mL· min
- 1;
(90∶ 10 →85∶ 15)P 1 min ,保持 9 min ,流速 018 mL·
min
- 1。检测波长:210 nm;检测器量程:0108 AUFS。
结 果
1 7种单体化合物的结构确证
经柱色谱 ,得到7种单体化合物 ,经熔点、紫外、红外、质谱、核磁共振等光谱测定 ,分别确证为姜黄
素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素、莪术醇、莪
术二酮、吉马酮和异莪术烯醇 ,其中姜黄素、莪术醇、异莪术烯醇和吉马酮经 X单晶衍射 ,其化学结构式
如下。经 TLC ,HPLC方法检查 ,纯度均在98 %以上。
2 体外抗肿瘤实验
3种莪术的乙醇提取物及挥发油均呈现一定的
抗肿瘤活性 ,其中广西莪术活性相对较差。3 种姜
黄素 IC50 < 15μg· mL - 1
,显示对3种癌细胞有明显的
抑制作用; 吉马酮 ,异莪术烯醇 IC50 在 15 - 50
μg· mL - 1
,证明对癌细胞有一定的抑制作用;而莪术
醇和莪术二酮 IC50 > 76μg· mL - 1
,对癌细胞的抑制作
用不明显 ......
王 琰3
, 王慕邹
(中国医学科学院、中国协和医科大学药物研究所 ,北京 100050)
摘要: 目的 研究莪术的化学成分及其药理作用 ,寻找与中医用药功能主治相吻合的有效成分 ,并比较不同品
种及产地的莪术在质量上的差异。方法 用柱色谱的方法分离提取单体化合物 ,确定结构 ,并分别进行药效学实
验 ,确定有效成分 ,通过 HPLC比较不同品种中有效成分含量 ,评价莪术的质量。结果 从中提取分离了 7 个单体化
合物 ,姜黄素显出较强的药理活性 ,但在广西莪术中未检出;吉马酮的含量较高 ,有一定的活性 ,在3种莪术中均有分
布;挥发油作为一个提取部位 ,显出较强的药理活性。结论 莪术中姜黄素是主要有效成分之一 ,吉马酮可选作特
征成分 ,挥发油可为有效部位。莪术不同品种所含成分有显著差异 ,以此3个指标作为莪术质量评价指标。
关键词: 中药莪术; 有效成分; 药理活性; 质量研究; 高效液相色谱法
中图分类号: R917 ; R927. 11 文献标识码: A 文章编号: 0513 - 4870(2001) 11 - 0849 - 05
中药莪术是姜科姜黄属植物的根茎 ,是常用传
统中药。《中国药典》 2000 年版一部共收载了 3 种莪
术,即蓬莪术(莪术) Curcuma phaeocaulis Valeton ,广
西莪术(桂莪术) Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C.
F.Liang 和温郁金(温莪术) Curcuma wenyujin Y. H.
Chen et C. Ling。中医认为莪术有破淤、行气、消积
和止痛的功效[1 ]。近年来 ,还发现它有抗癌、抗早
孕、抗凝血、抗氧化和保肝等活性[2 ]。但报道大多是
药材总提取物的药理活性及其在临床上的应用 ,而
对其物质基础 化学成分和药效、作用机理及二
者的相关性的研究却少有报道。寻找与中医用药功
能主治基本吻合的有效成分来控制药材的品质是研
究的关键。我们从温莪术中分离提取了7个单体化
合物即姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄
素、莪术醇、莪术二酮、异莪术烯醇和吉马酮 ,并将它
们和挥发油提取物分别进行了体外抗人卵巢癌
A2780、结肠癌 HCT、鼻咽癌 KB 的药效学及体内对大
鼠和小鼠角叉菜胶性关节肿的抑制作用实验 ,进一
步比较了化合物之间的药效作用 ,为确定有效成分
提供依据;同时 ,建立了 HPLC方法对莪术的成分进
行了研究 ,测定了各成分在不同品种莪术中的含量 ,并结合药效学试验结果 ,选用姜黄素、吉马酮和挥发
油3个指标共同控制药材质量 ,为评价不同品种及
产地的莪术提供了线索。
收稿日期: 2001203226.
基金项目: 国家九五攻关专项基金资助项目(969030202) .
作者简介: 王 琰(1970 - ) ,女,助理研究员.
3
Tel : (010) 63165238 , Fax : (010) 63017757 ,E 2mail :wangyan @imm. ac. cn
材 料 与 方 法
材料与仪器 莪术样品由本所植物室陈毓亨研
究员提供并鉴定;人卵巢癌 A2780 ,结肠癌 HCT ,鼻咽
癌 KB 瘤株由本所药理室陈毓亨研究员提供并鉴
定;Wistar大鼠( ♂,170 - 180 g)和昆明种小鼠( ♂,18 - 22 g)由中国医学科学院实验动物中心提供。
HP1100 高效液相色谱:二极管阵列检测器
(HPLC2DAD) 系统 , HPRev. A. 04. 01 化学工作站;
Waters 510 型和 501 型高压泵串联(Waters ,美国) ;
Rheodyne 7125 进样阀(美国) ; SPD22A 分光检测器
(岛津 ,日本) ; Waters Baseline 810 型色谱工作站
(Waters ,美国) ;伯乐450酶标仪(伯乐公司) 。
姜黄素提取分离 取莪术的干燥根茎 ,粉碎 ,过
40目筛 ,用石油醚(30 - 60 ℃)提取除去挥发油。残
渣用甲醇提取 ,得棕黄色膏状物 ,膏状物用硅胶进行
柱色谱。氯仿洗脱 ,得3种姜黄素单体。
挥发油提取分离 用水蒸汽法从温莪术中提取
总挥发油 ,用硅胶柱层析 ,依次以石油醚及石油醚2
乙酸乙酯洗脱 ,得4种挥发油单体。
体外抗肿瘤试验 用MTT法[3 ]
,测定 7 个化合
物以及 3 种莪术的挥发油、乙醇提取物对 3 种癌细
胞的杀伤作用的选择性。
姜黄素对大鼠和小鼠角叉菜胶性关节肿的抑制
作用 实验方法参见文献[4 ]。
3 种姜黄素成分的反相 HPLC分析 用 HPLC2
DAD系统进行分析。色谱柱: Inertsil ODS 23 (C18 ,5
μm ,250 mm×416 mm ,GL Science Cop. ,Japan) ;流动
相:甲醇2异丙醇2水2冰乙酸(20∶ 27∶ 48∶ 5) ;流速:015
· 948 · 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2001 ,36(11) :849 - 853
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.mL· min
- 1;检测波长P 波宽:420 nmP 16 nm;参比波长P
波宽:550 nmP 100 nm;色谱峰光谱采集范围: 190 -
500 nm;柱温:25℃。
4种挥发油成分的反相 HPLC分析 用 Waters
510型和501 型高压泵串联组装 HPLC系统进行分
析。色谱柱: Inertsil ODS 23 (C18 ,5μm ,250 mm ×416
mm ,GL Science Cop. ,Japan) 。以不同比例的甲醇2水
梯度洗脱:85∶ 15 ,保持15 min ,流速018 mL· min
- 1; (85
∶ 15 →90∶ 10)P 1 min ,保持 9 min ,流速 110 mL· min
- 1;
(90∶ 10 →85∶ 15)P 1 min ,保持 9 min ,流速 018 mL·
min
- 1。检测波长:210 nm;检测器量程:0108 AUFS。
结 果
1 7种单体化合物的结构确证
经柱色谱 ,得到7种单体化合物 ,经熔点、紫外、红外、质谱、核磁共振等光谱测定 ,分别确证为姜黄
素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素、莪术醇、莪
术二酮、吉马酮和异莪术烯醇 ,其中姜黄素、莪术醇、异莪术烯醇和吉马酮经 X单晶衍射 ,其化学结构式
如下。经 TLC ,HPLC方法检查 ,纯度均在98 %以上。
2 体外抗肿瘤实验
3种莪术的乙醇提取物及挥发油均呈现一定的
抗肿瘤活性 ,其中广西莪术活性相对较差。3 种姜
黄素 IC50 < 15μg· mL - 1
,显示对3种癌细胞有明显的
抑制作用; 吉马酮 ,异莪术烯醇 IC50 在 15 - 50
μg· mL - 1
,证明对癌细胞有一定的抑制作用;而莪术
醇和莪术二酮 IC50 > 76μg· mL - 1
,对癌细胞的抑制作
用不明显 ......
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