杜仲中京尼平苷酸的提取工艺研究及应用

    彭密军1 ,2

    , 周春山1 3

    , 雷启福1

    , 陈龙胜1

    (1.中南大学 化学化工新技术研究所 , 湖南 长沙 410083 ;

    2.吉首大学 , 湖南 张家界 427000)

    [摘要] 目的:用正交试验法对杜仲中的活性成分京尼平苷酸的提取工艺进行了优选研究。方法:采用正交

    表L16 (45) ,以提取时间、提取温度、提取次数、料液比以及提取有机溶剂乙醇含量为因素 ,以京尼平苷酸提取率为指

    标进行试验。采用反相高效液相色谱法(RP 2HPLC)测定京尼平苷酸提取率。 结果:最佳提取参数为 ,温度为 50 ℃,时间1 h ,提取1次 ,80 %的乙醇 ,料液比为1∶ 12。应用最佳提取工艺对杜仲原料进行了筛选。 结论:该工艺为杜仲

    中京尼平苷酸的大规模提取提供理论依据。

    [关键词] 杜仲;京尼平苷酸;正交试验;高效液相色谱法;原料筛选

    [中图分类号] R 283 [文献标识码] A [文章编号] 100125302 (2004) 0320229203

    杜仲 Eucommia Ulmiodes 是我国特有的木本植

    物 ,传统上以皮入药。其药理活性的化学基础主要

    为环烯醚萜类的京尼平苷酸(geniposidic acid) 、京尼

    平苷(geniposide ) ,木脂素类的松脂醇二葡萄糖苷

    (pinoresino2diglucoside ) 等[126 ]

    , 特别是京尼平苷

    酸[7 ]。

    由于京尼平苷酸具有多种活性 ,特别是其优良

    的降低血压和调节血压的功效 ,引起了国内外的广

    泛重视。但关于京尼平苷酸提取方法的研究鲜有报

    道。本研究对京尼平苷酸的提取工艺进行优化研

    究 ,为该活性成分的批量生产提供理论依据。

    1 实验部分

    1. 1 仪器 Biotronik BT8100 高效液相色谱仪 ,BT8200 UV - vis检测器 ,C - R6A chromatopac 自动积

    分仪 ,电子天平 ,烘箱。

    1. 2 试剂与材料 氯仿、甲醇、丙酮、乙醇等均为分

    析纯;京尼平苷酸标准品由日本 Dr. Takeshi Deyama

    赠送。

    1. 3 样品处理 实验所用原料杜仲新干皮、杜仲陈

    干皮、杜仲陈枝皮、杜仲叶等均来自湖南省张家界市

    永定区 ,杜仲炮制皮购于中药店。样品均用烘箱于

    55 ℃烘干、粉碎、过20目筛 ,备用。

    [收稿日期] 2003205208

    [基金项目] 湖南省科技厅攻关计划(03NKY2019) ;湖南省教

    育厅青年重点项目 (02B028)

    [通讯作者] 3

    周春山, Tel : ( 0731) 8830833 , Fax : ( 0731)

    8879672 , E 2mail : mijunp @sina. com

    1. 4 原料筛选 由于杜仲在生长发育过程中其化

    学成分的含量不断地发生变化。所以选择原料显得

    十分重要。杜仲叶和皮中京尼平苷酸含量差异很

    大 ,而且京尼平苷酸的含量随产地和季节变化而变

    化。在此 ,作者对几种不同的杜仲原料进行对比 ,它

    们分别是杜仲新干皮、杜仲陈干皮、杜仲陈枝皮、杜

    仲炮制皮及杜仲叶。此外 ,作者对15年树龄的杜仲

    皮及同一株树上的叶子进行分析 ,比较了不同采摘

    时间样品中京尼平苷酸的含量 ,以确定最佳提取原

    料。

    作者用不同干燥方法对杜仲皮进行处理 ,然后

    分别对其中京尼平苷酸含量进行了的测定 ,为杜仲

    原料的干燥处理提供科学依据。

    1. 5 提取方法 称取适量杜仲样品 ,按照工艺设计

    加入一定量的提取溶剂 ,在一定温度下提取一定的

    时间 ,滤过 ,合并滤液 ,定容 ,进行京尼平苷酸含量测

    定。

    1. 6 色谱分析方法 选取 Polygosil - C18 (4. 6 mm×

    250 mm ,5μm)色谱柱;甲醇2水溶液为流动相;辅以

    适量醋酸作调节剂。

    2 结果与讨论

    2. 1 原料筛选结果

    2. 1. 1 不同杜仲样品中京尼平苷酸含量 由表 1

    可知 ,杜仲新皮中京尼平苷酸的含量最高 ,是最合适

    原料 ,与文献报道一致[8 ]。杜仲陈干皮和陈枝皮 ,由

    于放置过久 ,植物体内的生化反应使有效成分京尼

    平苷酸含量大大降低。杜仲叶中也含有京尼平苷

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    第29卷第3期

    2004年3月 中 国 中 药 杂 志

    China Journal of Chinese Materia Medica

    Vol . 29 , Issue 3

    March , 2004

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.酸 ,虽比皮少 2 倍多 ,但资源丰富 ,而且杜仲叶的采

    摘不影响树的生长 ,符合生态环保的要求 ,是很有利

    用价值和开发前景的。关于杜仲叶的利用 ,见另文

    报道。

    表1 各种杜仲样品中京尼平苷酸含量

    样品 样品重 g 含量 %

    新干皮 5. 001 2 0. 57

    陈干皮 4. 996 5 0. 23

    陈枝皮 5. 005 8 0. 11

    炮制皮 5. 012 3 0. 05

    杜仲叶 4. 968 5 0. 21

    2. 1. 2 杜仲皮中京尼平苷酸含量随采收季节的变

    化 不同季节 ,京尼平苷酸的含量变化很大。杜仲

    皮中京尼平苷酸的含量以 5 月最高 ,落叶前后的

    10 ,11 和 12 月含量较高。结果见图 1。经综合分

    析 ,提取京尼平苷酸以 5 月及落叶前后剥取的杜仲

    皮作原料最好 ,但对树的生长发育有不利影响 ,其次

    为10 ,11及12月采剥的杜仲皮。

    图1 杜仲皮中京尼平苷酸含量的变化

    1.蒸烘皮 2.阴干皮

    2. 1. 3 干燥方法对原料中京尼平苷酸含量的影响

    采摘后的样品必须进行适当的处理 ,首先是干燥。

    中药材干燥的目的是除去新鲜药材中的大量水分 ,避免发霉、变色、虫蛀以及有效成分的分解和破坏 ,保证药材质量 ,并利于贮藏。不同的处理方式杜仲

    皮中京尼平苷酸含量的影响情况如表2。

    表2 不同干燥方法

    对杜仲皮中京尼平苷酸含量的影响

    编号 干燥方法 含量 % 损失率 %

    1 烘干1)

    0. 497 12. 8

    2 避光阴干2)

    0. 502 11. 9

    3 晒干3)

    0. 360 36. 8

    4 熏干4)

    0. 399 30. 1

    5 先蒸再烘(蒸烘)

    5)

    0. 562 1. 9

    注:

    1)

    50 ℃在恒温干燥箱中烘2. 5 h ;

    2)

    阴凉干燥处自然风干;

    3)

    直接置于阳光下晒干;

    4)

    烟火熏干;

    5)

    先在水蒸气蒸馏装置中蒸约

    10 min ,而后取出烘干

    实验表明 ,原料晒干、阴干、蒸烘、熏干、烘干等

    不同干燥方法对京尼平苷酸含量的影响较大 ,杜仲

    原料以蒸烘干最好 ,避光阴干次之 ,50 ℃烘干又次

    之 ,晒干最差 ......