第 卷

    2 0 01越

    第 3 期

    9月

    四 川 林 业 科 技

    J o u ma l 0 f S ~ e h t u m F o t e s t ~ S e i e t m e a n d T e c h n o l o g y

    Vo 1. 2 2. No. 3

    S e p t . ， 2 0 01

    水分胁迫下华山松抗腐烂病的研究

    陈玉惠 ， 翟志军 ， 胡海燕 ， 周彤粟 ， 谢开立

    ( 1西南林学院基础都， 云南 昆明 6 5 0 2 2 A~ 2西南林学院赘繇学院， 云南 昆明 6 5 0 4 )

    摘 要： 用不同浓度的聚乙二醇( P E C , O ~ 0 O ) 对华山松幼苗进行谤导水分胁迫， 树皮的相对膨胀度( 砌’ 值) 随

    P E G隶度的增大而下降； 且树皮内的酚类物质台量、 多酚氧化醇( P P O ) m· 陆和苯丙氨酸解氨酶( P ^ L ) 活性均有

    所降低， 过氧化物酶( P 叩 ) 活· 陆升高。说明水分状况直接影响看单山松的抗病性。

    4种酚类物质抑茵试验表明， 一定浓度下酚类轴质对腐拦病痛原茵松黑腐皮壳( V a s a p F r . ) 茸苤体生

    长有抑制作用， 阻香苹醛和邻苯二酹却 茵能力最强

    关键词 ： 水分胁迫； 相对膨胀度； 酚类物质； 抗病能力； 单山松

    中用分类号： 7 6 3 文献标识码： A

    文章编号： 1 0 0 3 —5 5 0 8 { 2 0 0 1 ) 0 3 —0 0 0 1 —0 5

    华山松( P n u s 。 — ) 是我国特有的用材树种。近年来， 作为长江中上游防护林体系建设中的重

    要造林树种， 在云南大面积营造。但随着人工纯林面积的迅速扩大， 病虫害问题 日趋突出。

    华山松腐烂病是云南省华山松人工林中、 幼林内普遍发生的一种枝干病害， 发病率可以从 5 %到

    1 0 0 %u J ， 已对局部地区华山松中、 幼林的正常生长造成了危害。野外观察. 该病在不同地区、 不同季节

    发病率有较大差异。目前. 国内对华山松腐烂病的研究主要为病原( V a I s a P i r d F r . ) 的研究报导【 2 】 。然

    而一种病害的发生发展是与寄主的抗病性、 病原物的致病性及环境条件密切相关的。寄主的抗病性又

    与多种因素有关， 水分状况是重要因子之一u. 4 J . 它通过影响植物体内一系列代谢括动， 改变植株在 自

    然状况下的抗逆性； 酚类物质是重要的抗菌物质之一， 苯丙烷代谢途径是植物形成抗菌物质的重要途

    径。许多研究表明. 该途径的限速酶苯丙氨酸解氨酶( P A L ) 以及参与酚类物质氧化或缩舍的多酚氧化

    酶( P r o ) 、 过氧化物酶( P O D ) 括性都与植物的抗病性密切相关。本文研究了四种酚类物质对华山松腐烂

    病菌菌丝体生长的抑制作用， 报道了水分胁迫下华山松幼苗树皮的相对膨胀度( R T值) 与酚含量、 P A L 、P P O和 P O D三种酶活性的关系， 探讨华山松抗病的生化基础， 以便为华山松种植地的选择、 抗病选育、病害预测和治理提供理论依据。

    1 材料与方法

    1 . 1 实验材料

    将生势基本一致、 生长2年的健康华山松幼苗， 在浇水量一致的条件下经盆栽 1 5天后， 移至完全营

    养液中培养， 4 8 小时后移人用完全营养液配制的浓度分别为2 %、 4 %、 6 %、 8 %的聚乙二醇( P E G 6 O 0 0 )

    溶液中， 水分胁迫船 小时后， 取树皮分析， 以不加聚乙二醇的营养液中的植株为对照， 每种处理 3个重

    复 ， 6 株苗。

    供试菌种为发病华山松枝条上分离纯化获得的松黑腐皮壳( V a s a P n F r . ) 。

    收祷 日期： 2 O O l - O 6 . 1 O

    基金项 目 大面积人工纯林病虫害发生发展规律及综合治理研究， 云南省重点基金项 目。

    作者简介： 陈玉惠( 1 9 6 1 . ) ， 女. 尉教授， 博士. 从事生物化学与植物病理学科研教学工作。

    维普资讯 http:www.cqvip.com 2 四 川 林 业 科 技 2 2 卷

    1 . 2树皮含水量的测定

    按 B i e r 氏的方法[ 测定树皮的相对膨胀度( R T )

    即 ： a T ( %) = ×1 o 0

    1 . 3 酚含量的测定

    采用 4 . 氨基氨替 比林 比色法 J 测定酚含量。以邻苯二酚为标准酚， 反应显色后在分光光度计

    4 9 0- n 赴铡定 O. D值， 并与标准曲线比较后， 计算出每克组织中酚的含量。酚提取液为 9 5 %乙醇。

    1 . 4 多酚氧化酶( P P O】 的提取及活性测定

    称取鲜树皮 1 . O 0 g ， 加冰冷的磷酸缓冲液( p a 6 . 4 ) 少许， 研磨成匀浆， 加缓冲液2 5 I n l ， 室温提取3 O

    分钟后过滤， 取滤液 1 0 m l 按波饮诺克的方法¨ 】 测定酶活性， 以每克鲜重组织每分钟氧化抗坏血酸的

    数表示酶活力( v c I 1 分I 1 ) 。

    1 . 5 苯丙氨酸解氨酶( P A L 】 的提取及活性测定

    参照薛应龙等的方法_ 8 J 。提取液为O . 2m o l L 硼酸缓冲液( p H 8 . 8 ) ， 含8m o l L 疏基乙醇) 。反应

    液的组成为硼酸缓冲液( O . 2 m o l L ～， p H 8 . 8 ) 3 m l +1 ml L - 苯丙氨酸溶液( 8 0 t o o l L ) +O . 5 I n l 酶液。

    3 7 ℃反应 6 0 分钟后在分光光度计 2 9 0I L r n 处测定消光值变化. 以每克鲜重组织每小时 0 . D 枷值变化O _ o l

    为一个酶活力单位。

    1 . 6 过氧化物酶( P O D ) 的提取及活性测定

    参照朱广廉等的方法_ 9 J 。提取液为0 . 1 m o l L 磷酸缓冲液( 口 H 5 . 8 ， 含 O . 0 0 6 m o l L 半胱氨酸) 。

    测定反应液的组成为磷酸缓冲数( O . 1 m o l L ～， 口 H 5 . 8 ) 3 m l +1 m l 愈创术酚溶液( 5 0 m o l L ) +2 m l 酶

    液。3 7 ℃下保温 1 5分钟后迅速加 2 %H 2 0 2 1 m l ， 立即在分光光度计 4 7 0 m 处读取0—3分钟的消光值变

    化， 以每克鲜重组织每分钟 O. D 埘值变化O . O 1 为一个酶活力单位。

    1 . 7 四种酚类物质对腐烂病病原菌菌丝生长的影响

    在P D A培养基中分别加人水杨酸、 邻苯=酚、 香草醛、 焦性没食子酸4种酚类物质， 并使其最终浓

    度分别为 1 0 p p m、 1 0 0 p p m、 7 , 0 0 p p m、 3 0 0 p p m、 5 0 0 p p m和7 0 0 p p m， 以不含酚的同样培养基做对照， 培养基

    在 1 2 1 C 下灭菌 1 5分钟， 分别接种病菌菌块( 直径 O . 3一 的园形菌块， 取 白培养一周的病原菌菌落边

    缘) 。2 5 ℃下培养 7天， 每 2 4小时观察测量一次菌落直径， 每处理设三个重复。

    2 结果与分析

    2 . 1 水分胁迫对树皮 R T值的影响

    华山松幼苗在水分胁迫前( 正常供水条件下) 树皮的 R T值较高( 为 B 2 . o 6 %) ......