菌物研究 2004 , 2 (2) :42 - 46

    Journal of Fungal Research Vol12 ,No12 , 2004 ISSN 1672 - 3538

    人工培养冬虫夏草研究X

    俞永信X X

    成都思摩纳米生物科技有限公司 , 四川 成都 611731

    摘 要: 冬虫夏草[ Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc. ] 是名贵中药和珍稀滋补品 ,是由其无性型中国被毛孢( Hir2

    sutella sinensis X. J . Liu , Y.L. Guo , Y. X. Yu W. Zeng )侵染蝠蛾属( Hepialus spp. )幼虫形成的菌虫复合体 ,分

    布在我国青海、西藏、四川、云南和甘肃等地的海拨3 500～5 000 m高寒灌丛草甸。自1980年至今持续进行冬

    虫夏草的人工培养研究 ,分离获得了冬虫夏草的无性型菌株 ,经鉴定为中国被毛孢新种 ,并对其进行了一系列

    培养试验:在培养基上能产生子座;低海拔环境下规模化室内饲养寄主昆虫成功 ,人工条件下1年可完成寄主

    昆虫一个生活周期 ,且幼虫个体大;室内人工培养冬虫夏草取得成功。

    关键词: 冬虫夏草; 中国被毛孢; 蝠蛾属

    中图分类号: R282 文献标识码: A 文章编号: 167223538 (2004) 0220042205

    1 材料与方法

    1. 1 标本的采集

    冬虫夏草[ Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc. ]标

    本采自四川康定地区海拔 4 000～4 500 m的高寒

    灌丛草甸。

    1. 2 菌种分离

    1. 2. 1 分离用的基本培养基 马铃薯、葡萄糖、琼脂 ,加蛋白胨(简称 PDA +胨) ;马铃薯、葡萄糖、琼脂 ,加家蚕蛹汁。

    1. 2. 2 分离方法 ①菌核(虫体)及子座分离:菌

    核及子座用 0. 1 %升汞液进行表面消毒、无菌水

    清洗后切成小段或薄片 ,置于有培养基的培养皿

    中 ,15～18 ℃培养。②子囊孢子分离:取子座头

    部 ,用 0. 1 %升汞液经表面消毒、无菌水清洗后 ,置于有培养基的三角瓶或培养皿中。成熟子囊孢

    子弹射到三角瓶和培养皿内进行培养 ,也可取成

    熟的子座在显微镜下挑取子囊孢子进行培养。

    1. 3 培养基筛选

    用于冬虫夏草无性型培养基的碳源为单糖、双糖和多糖及含碳的化合物 ,均市售;氮源均为有

    机氮;生长素、细胞生长激素等均购于化学试剂商

    店。

    培养基筛选均采用正交试验方法。

    1. 4 寄主昆虫的采集与饲养

    寄主幼虫采自海拔4 000～4 500 m的草原。

    在海拔2 600 m的四川省自然保护区内建立

    了人工培养冬虫夏草实验室 ,向上可通达海拔

    4 900 m的虫草坪。实验室基本上达到自动化程

    度 ,可以自动设定并调节温度和湿度等指标 ,自动

    记录 ,有100 m3

    的封闭式空间可供人工饲养蝠蛾

    幼虫 ,1次可饲养 30 万头幼虫。幼虫饲料购自农

    贸市场。

    1. 5 侵染试验

    用无菌水洗下冬虫夏草无性型菌丝和分生孢

    子制成悬液 ,经镜检含有一定的孢子量。用孢子

    悬液接种及孢子悬液添加于饲料等多种方式进行

    X

    X X 通讯作者: 俞永信, E - mail : yyx9895 @vip. sina. com.

    基金项目:“七五”国家重点科技攻关项目“生物技术”—“全人工培养冬虫夏草研究” (75 - 71 - 07 - 08)

    作者简介: 俞永信(19392)男,高工,主要从事药用菌开发新药的研究。

    收稿日期: 2004204226

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.侵染幼虫研究。

    2 试验结果

    2. 1 分离获得冬虫夏草的无性型

    经进行菌核、子座和子囊孢子分离 ,分离产物

    90 %以上是同一种真菌 ,该菌菌落坚硬 ,隆起 ,棕

    黄色或黑褐色 ,菌丝短而稀疏 ,有黑色色素渗入培

    养基。在更换培养基后可以在菌落上形成稀疏的

    菌丝及分生孢子(图版 Ⅰ ) 。

    图版 Ⅰ 中国被毛孢菌落

    Plate Ⅰ. Colony of Hirsutella sinensis

    分离菌经中国科学院微生物研究所刘锡王进、郭英兰研究员的进一步研究 ,鉴定为中国被毛孢

    新种: Hirsutella sinensis X. J . Liu , Y.L. Guo , Y. X.

    Yu W. Zeng

    [1 ]。

    2. 2 筛选出适合中国被毛孢生长的培养基

    试验证明 ,适宜的碳源为葡萄糖、蔗糖、玉米

    汁;氮源是蛋白胨、酵母膏、家蚕蛹汁、牛肉汁。

    玉米汁、蔗糖、蛋白胨、家蚕蛹汁和维生素再

    加硫酸镁、磷酸二氢钾组成的培养基 ,气生菌丝生

    长茂密 ,产生的分生孢子较多。

    2. 3 添加生长因子有促进生长作用

    生长因子试验的基础培养基是蛋白胨、酵母

    膏和葡萄糖。通过进行不同浓度的梯度试验 ,得

    知 ,添加一定浓度的生长因子对其生长都有明显

    的促进作用。

    2. 4 产生子实体的培养基及培养条件

    产生子实体的培养基经筛选 ,由玉米汁、牛肉

    汁、酵母膏、家蚕蛹汁、水和琼脂等成分组成 ,并添

    加微量生长因子。

    在培养基上的菌落经低温和光照处理 ,产生

    的子实体初呈牛角状 ,继续生长可长达 5 cm多 ,色泽同天然冬虫夏草的子实体。一个菌落可形成

    一个子实体(图版 Ⅱ ) 。

    图版 Ⅱ 中国被毛孢在培养基上形成子实体

    Plate Ⅱ. Hirsutella sinensis forming stroma on medium

    2. 5 中国被毛孢生长的适宜温度

    根据试验 ,中国被毛孢生长的最适温度是

    15～18 ℃,超过25 ℃死亡 ,温度过低生长缓慢。

    2. 6 中国被毛孢是冬虫夏草的无性型

    用中国被毛孢菌丝体、分生孢子侵染完全在

    人工条件下低海拔饲养的寄主昆虫 ,形成与天然

    冬虫夏草一样的子实体 ,证明中国被毛孢是冬虫

    夏草的无性型(图版 Ⅲ ) ......