油茶总RNA及mRNA的分离与纯化.pdf
http://www.100md.com
2006年2月23日
| 第1页 |
参见附件(130KB，3页)。
第 2 3卷 第 2期
·
2 0 0 3年 4月
中 南 林 学 院 学 报
J OURNAL OF CENTRAL S OUTH F ORESTRY UNI VERS I TY
Vo l 23 No.2
Apr . 2003
[ 文章_号]1 0 0 0 —2 5 0 2 ( 2 0 0 3 ) 0 2 - -0 0 7 6 —0 3
油茶总 RNA及 mRNA的分离与纯化
张 智俊 ， 谭 晓风 ， 陈永忠。
( 1 .中膏林 学 冀经济 韩膏 种 与藏培 国采林 业局 重点 实验室 ，湖南 株洲 4 1 2 0 0 6t 2 .湖南 省林 科院 ，湖南 长抄 4 1 2 0 0 0 )
[ 摘 要] 利用馥良的C TA B法· 从富含酚类糖类等次生物质油茶叶片中分离出总R N A· 并从总R NA中， 通过两次过O l i g o ( d T)
柱 分离纯 化得 剜 mRNA· 实 验结果 证 明 z 所 提取 的 R NA和 mRNA完 整 ， 质量较 高 ， 并 应用 到 油茶 c DNA 文库 的构 建·
[ 关奠词] 经浙林· 油茶I R NAl mR N A}分离与纯化
[ 中田分类号] 7 9 4 . 4 [ 文献标识码] A
I s o l a t i o n a n d Pu r i f i c a t i o n o f To t a l RNA a n d mRNA f r o m Ca me l l i a o l e i f e r a
ZHANG Z h i — j u n ，TAN Xi a o — f e n g ，CHENG Yo n g — z h o n g 。
( 1 .Th e Ke y La bo r a t o r y of No n - t i mbe r For e s t Tr e e B r e e di n g a nd Cu l t i v a t i o n of Na t i o n a l For e s t r y Mi n i s t r y.
Ce n t r a l S ou t h For e s t r y Uni v e r s i t y·Zh uz ho u 4 1 2 0 0 6，Hun a n·Chi n a；2.For e s t r y Ac ad e my o f Hun a n·Ch a ng s h a，Hu n a o.Chi n a)
Ab s t r a c t ；B y u s i n g t h e mo d i f i e d CTAB me t h o d ·t o t a l RNA wa s i s o l a t e d f r o m C a me l l i a o l e i f e r a l e a v e s r i c h i n s u c h s e c o n d a r y
p r o du c t s a s po l yp h on e s a n d p ol yme r i c c a r bo h yd r a t e 3a n d t h e n mRNA wa s i s ol a t e d a nd p u r i f i e d t hr o ug h d ou b l e 3 e l e c t i on s us i ng ol i g o
( dT)c e I l u l o s e .The r e s ul t s s h o w t h a t t he o bt a i ne d RNA a nd mRNA ar e of h i g h qu a l i t y a n d c a n b e us e d f or t h e c o ns t r u c t i o n of a
c DNA l i br a r y.
Ke y wo r d s ：n o n - t l mb er f o r e s t s Ca me l l i a o [ e i f e r a t o t a l RNA；mRNA~i s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n
植 物 RNA提 取技术 是一项植 物分子生物 学基本实 验技术 ， 是 RT— P C R、 c DNA 文库 构建 等进 一步 的分子
克隆- rC g的前提.目前 已建 立 了很 多 RNA 提取 方法D .常规提取 总 RNA 最常 用的是 Ch o mc z y n s k i 等提 出
的异硫氰酸 胍一 酚一 氯仿一 步法[ 1 ] ， 从总 RNA 中分 离 mRNA 经典 的方法 是 Ol i g o ( d t ) 纤维 素柱 法. 虽 然对 大多
数 的植 物异硫 氰酸胍一 酚一 氯仿 一步 法都能得到质 量很好 的 RNA样 品， 但 对某些 富含多 酚、 多糖等 次生物 质 的
植物结果 并不很 理想. 另外 ， 在获得 总 RNA 后 ， 由于 mRNA 仅 占总 RNA 量 的 1 一5 ， 加之 半衰 期短 易降
解， 往往导致要 分离纯化得 到高质量 mR NA 难度相对较大 ， 其 成功 与否也关系到下一 步工作的成 败.
油茶 C a me l l i a o l e i f e r a是世界上四大木本油料树种之一， 同其它山茶属植物一样， 体内含有蛋白质、 酚类、多 糖、 单 宁 、 茶皂 甙、 鞣 质 、 生 物 碱 等 复 杂 物质[ 6 ] ， 造 成 RNA 提 取 的 困难. 针 对 此 问 题 ， 本 研 究 采 用 改 良 的
C TA Bt 法除去多糖 、 多 酚， 成功地从 富含次生物 质的油茶 叶片 中提取 了总 RNA， 并通过 Ol i g o ( d t ) 纤 维素柱
分离得 到 了油茶 的 mRNA.
1 材料与方法
1 . 1 材 料
实验材料是中南林 学院经济林育种与栽培 国家林业局重点实验室培育的普通油茶湘林 4号的组 培苗叶 片.
1 . 2 方 法
1 . 2 . 1 油茶总 RNA的分离
称取组培苗叶片 0 . 2 g ， 液氮中研磨成粉末 ， 加入 0 . 8 mI ，抽提液缓 冲液 S o l u t i o n l ( 2 % C TAB， 2 P VP， I O O
[ 收疆 日期]2 0 0 3 - 0 1 — 0 3
[ 基盒项 目]教育部骨干教师资助课题。 油茶c D N A文库构建及探针筛选” 项目的部分内容.
[ 作者简介]张智俊( 1 9 7 4 一) . 男. 甘肃武戚人. 博士研究生. 现主要从事林木分子生物学研究.
维普资讯 http:www.cqvip.com 第 2期 张智 俊等 ： 油茶 总 RNA 及 mRNA 的分 离 与纯 化 7 7
mmo [ Tr i s HCl ， 2 5 mmo [EDTA ......
·
2 0 0 3年 4月
中 南 林 学 院 学 报
J OURNAL OF CENTRAL S OUTH F ORESTRY UNI VERS I TY
Vo l 23 No.2
Apr . 2003
[ 文章_号]1 0 0 0 —2 5 0 2 ( 2 0 0 3 ) 0 2 - -0 0 7 6 —0 3
油茶总 RNA及 mRNA的分离与纯化
张 智俊 ， 谭 晓风 ， 陈永忠。
( 1 .中膏林 学 冀经济 韩膏 种 与藏培 国采林 业局 重点 实验室 ，湖南 株洲 4 1 2 0 0 6t 2 .湖南 省林 科院 ，湖南 长抄 4 1 2 0 0 0 )
[ 摘 要] 利用馥良的C TA B法· 从富含酚类糖类等次生物质油茶叶片中分离出总R N A· 并从总R NA中， 通过两次过O l i g o ( d T)
柱 分离纯 化得 剜 mRNA· 实 验结果 证 明 z 所 提取 的 R NA和 mRNA完 整 ， 质量较 高 ， 并 应用 到 油茶 c DNA 文库 的构 建·
[ 关奠词] 经浙林· 油茶I R NAl mR N A}分离与纯化
[ 中田分类号] 7 9 4 . 4 [ 文献标识码] A
I s o l a t i o n a n d Pu r i f i c a t i o n o f To t a l RNA a n d mRNA f r o m Ca me l l i a o l e i f e r a
ZHANG Z h i — j u n ，TAN Xi a o — f e n g ，CHENG Yo n g — z h o n g 。
( 1 .Th e Ke y La bo r a t o r y of No n - t i mbe r For e s t Tr e e B r e e di n g a nd Cu l t i v a t i o n of Na t i o n a l For e s t r y Mi n i s t r y.
Ce n t r a l S ou t h For e s t r y Uni v e r s i t y·Zh uz ho u 4 1 2 0 0 6，Hun a n·Chi n a；2.For e s t r y Ac ad e my o f Hun a n·Ch a ng s h a，Hu n a o.Chi n a)
Ab s t r a c t ；B y u s i n g t h e mo d i f i e d CTAB me t h o d ·t o t a l RNA wa s i s o l a t e d f r o m C a me l l i a o l e i f e r a l e a v e s r i c h i n s u c h s e c o n d a r y
p r o du c t s a s po l yp h on e s a n d p ol yme r i c c a r bo h yd r a t e 3a n d t h e n mRNA wa s i s ol a t e d a nd p u r i f i e d t hr o ug h d ou b l e 3 e l e c t i on s us i ng ol i g o
( dT)c e I l u l o s e .The r e s ul t s s h o w t h a t t he o bt a i ne d RNA a nd mRNA ar e of h i g h qu a l i t y a n d c a n b e us e d f or t h e c o ns t r u c t i o n of a
c DNA l i br a r y.
Ke y wo r d s ：n o n - t l mb er f o r e s t s Ca me l l i a o [ e i f e r a t o t a l RNA；mRNA~i s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n
植 物 RNA提 取技术 是一项植 物分子生物 学基本实 验技术 ， 是 RT— P C R、 c DNA 文库 构建 等进 一步 的分子
克隆- rC g的前提.目前 已建 立 了很 多 RNA 提取 方法D .常规提取 总 RNA 最常 用的是 Ch o mc z y n s k i 等提 出
的异硫氰酸 胍一 酚一 氯仿一 步法[ 1 ] ， 从总 RNA 中分 离 mRNA 经典 的方法 是 Ol i g o ( d t ) 纤维 素柱 法. 虽 然对 大多
数 的植 物异硫 氰酸胍一 酚一 氯仿 一步 法都能得到质 量很好 的 RNA样 品， 但 对某些 富含多 酚、 多糖等 次生物 质 的
植物结果 并不很 理想. 另外 ， 在获得 总 RNA 后 ， 由于 mRNA 仅 占总 RNA 量 的 1 一5 ， 加之 半衰 期短 易降
解， 往往导致要 分离纯化得 到高质量 mR NA 难度相对较大 ， 其 成功 与否也关系到下一 步工作的成 败.
油茶 C a me l l i a o l e i f e r a是世界上四大木本油料树种之一， 同其它山茶属植物一样， 体内含有蛋白质、 酚类、多 糖、 单 宁 、 茶皂 甙、 鞣 质 、 生 物 碱 等 复 杂 物质[ 6 ] ， 造 成 RNA 提 取 的 困难. 针 对 此 问 题 ， 本 研 究 采 用 改 良 的
C TA Bt 法除去多糖 、 多 酚， 成功地从 富含次生物 质的油茶 叶片 中提取 了总 RNA， 并通过 Ol i g o ( d t ) 纤 维素柱
分离得 到 了油茶 的 mRNA.
1 材料与方法
1 . 1 材 料
实验材料是中南林 学院经济林育种与栽培 国家林业局重点实验室培育的普通油茶湘林 4号的组 培苗叶 片.
1 . 2 方 法
1 . 2 . 1 油茶总 RNA的分离
称取组培苗叶片 0 . 2 g ， 液氮中研磨成粉末 ， 加入 0 . 8 mI ，抽提液缓 冲液 S o l u t i o n l ( 2 % C TAB， 2 P VP， I O O
[ 收疆 日期]2 0 0 3 - 0 1 — 0 3
[ 基盒项 目]教育部骨干教师资助课题。 油茶c D N A文库构建及探针筛选” 项目的部分内容.
[ 作者简介]张智俊( 1 9 7 4 一) . 男. 甘肃武戚人. 博士研究生. 现主要从事林木分子生物学研究.
维普资讯 http:www.cqvip.com 第 2期 张智 俊等 ： 油茶 总 RNA 及 mRNA 的分 离 与纯 化 7 7
mmo [ Tr i s HCl ， 2 5 mmo [EDTA ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(130KB，3页)。