油桐根腐病病原菌的研究.pdf
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2006年2月23日
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‘
靴 5 卷 第 2期
l 9 8 9年 3月
林 业 科 学
SCI ENTI A SI LVAE SI NI CA E
Vo1 . 2 5. No. 2
M a r. ，l 9 8 9
油桐根腐病病原菌的研究
陈守常 肖育贵
‘ 鸡 I I l 省林 业科 学暂f 究所
摘 要
油桐根腐痛是油桐林的一种燕 灭性病害。形态学和培养性状研究表明，致
嫡 菌为腐 皮诔袍 ( Fu s a r i u m s o l a n i( Ma r t . )S a t e . ) 将 谈 茵与国 内供试 8个
腐皮镰袍专化型菌株比较可看出， 菌落生长较快， 大型分生抱子短而粗，是一种
短粗类型。其次， ^I接种试验得知， 此菌不侵染 6科 7属 7种供试的专化型寄
主 植 物}又控 8个 专化型 菌株接 种油桐试 验，也不 发生 侵染关 系。此 茵仅 侵 害
大戟科 油桐扁 的油桐 ， 是 一种 专化性 病 菌。再次 ， 采 用聚丙 烯酰胺 凝胶 电泳分 析
表 明， 此茵 与供 试菌株 曲脂酶 同I酶 曲谱 带特征 和相对 迁移率均 有明 显 的差异 。
由此， 将油桐根腐病鉴定为腐 皮镰孢一新的专化型， 命名为油桐腐皮诔孢( Fu s a -
~i u m s ol an i ( M ar t . ) Sac c. f . sp.al eur i t i d~ s Che n e t Xi a 0 f .s p.noY. )
关锗词 油桐，油桐振庸病j油桐腐皮镰抱
以往3 O 年，油桐根腐病寤困不明， 常与油桐枯萎病混淆。近2 0 年来 ， 随着分子生物学
豹 迅速发展， 同功酶成为真菌分类的辅助手段。国外学者 - ” 已先后提出和研究了
少数尖镰孢和腐皮镰孢专化型同工酶。我们于1 9 8 2 —1 9 8 7 年对油桐根腐病株根系多次分
离 培养，并进行了室内外接种试验和酯酶同工酶分析， 观察菌体形态特征和培养性状， 以
确 定 此菌 的分类地 位 。
一
、 材 料 和 方 法
( 一)鉴定癀菌的培养基 基本采用Wo l l e n we b e r 镰孢分类培 养 基，但 怍部 分 更
换 ， 详见表 1。
( =)寄主范围的致痨力蔫定
1 . 供试菌株；详见表 5。
2 · 菌液制备 为避免菌株致病力下降， 将待复壮盼菌株在P DAj = 2 5 ~ 7 天，再
移入Ps A斜面上培养 7天。随之， 将供试菌袜接入Ps c培养基附加 蛋白胨… ( 产毒紊)
《 三角瓶5 O O ml ， 盛液1 O O mI ) ， 在2 5 ℃下间歇振荡( 2次日) 培养 8天供接种用。
( 三)接种斌验
i - 油桐根腐病菌对已知腐皮镰孢专牝型寄主植物的接种试验。
2 - 国内发生的 8个腐皮镰孢专化型菌株对油桐接种试验。供试油桐苗1 D 5 株，共 8- 1
车戈子l 9 8 7 年l 2 月 ●日收蓦.
二 苎 妻 轩 苎 差 ： . . 苎 ! 重 大 学 赋 冉 t 授 青 寝 业 拳 豫 戈_ 唠摄 事 辟 譬 I l ， . ■ 蠡 重膏. 泰 盒 钟 同 意 参 加 鲁 西 工 作 ·
抽橱 摄庸 茸最 四 川万县 { . 橱压 井 膏.纯 { 匕 蓑 蒋. 为 8 5 3 . i . … 一 一'’
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处 理，见表 4。
3 . 蛭石瓶裁接种试验：蛭石经1 6 O ℃消毒 2小时， 装于】 O 。 o m1 烧瓶( 高锰酸钾预 消毒’
内，每瓶植 1株。待植株生长正常后 1周将培莽菌液住人蛭石瓶 内·E2 5 - -2 8 ~ cy 栽培
观察 、记录 植株 病变状 况 。
( 四)酯酶 同工商 分 析
1 . 酶藏制备；将上述振荡培养 8天的供试菌液移至离心管 ，以 2 0 0 0 转 分离心 1 0分
钟， 收集后经蒸馏水漂 洗 2次， 用滤纸吸干水分， 菌体秤重届置于 0— 4℃暂存备用。
每一菌株秤取菌体 4 g ， 加入蒸馏水2 ml 和少许金剐砂 ( 1 8 0 0 目) ， 在水溶中研磨均 浆，0℃下离心1 0 分钟( 1 2 0 0 0 转 分) ， 取上清液， 备电泳上样用o
2 . 电泳分离，采用策丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法 。 朋， p H连续缓冲凝胶的 三羟
甲基氨基甲烷( T r i s ) ——柠檬酸系统。电极缓冲液为Tr i s —— 甘氨酸，p H8 . 7 ·分 离胶
浓度1 0 %， p H8 . 9 ， 交联度 2%，浓缩腔浓度 5%，p H6 . 3 。电泳前 ， 在上槽缓冲掖中加入
0 . 2 溴酚兰一滴作为指示剂。 点样后( 每样品l O O g 1 ) ，电泳在O 一4 ℃下进行。电流 强度 ，l O mA c m， 随后加大电流为2 5 mA 2 5 0 V。电泳在 4—5 小时完成。
3 . 染色定位 将胶板取出， 缓冲液漂洗后， 置于染液[ g l 中， 3 O ℃下染色 . 酶带显示清晰
后， 流水冲洗( 约半小时) ， 放入 7 醋酸中。
4 . 酶带确定，将所有祥品酶带出现的位置，按向正极泳动的速度顺 序 编 号 ( E ，E -……) ， 求其酶带相对迁移率( 月， ) 。
( 一)培孽 I 特性
二、研 究 结 果
1 . 该菌在鉴定培养基上的培养性状( 表 1) 。
表{ 油捐报 病菌在鉴定培养基上的培养性状( 5 夭)
苗 落 苗 丝 分生于 甘于 大型 小型
培养 基种类 甘生 甘 生 厚 垣孢 寻
I 生 长遘 度 基 部色素 颜 色 形状 生长 庄颤 色 孢 子 孢 子 ( c 加) 状 况0
马斡薯块斜面培养基 一 一 白色 i 棉城状 米色 ( 6 O 天)
D A i · 无 《 白 色l 棉 城 状 乳 酪 齐 色 C ' 0 夭 )
P S A f 8 . 5 I 无 白色 l 棉城状 旦黄色 ( 5天)
C ~ p e k ； 0 4 . 1 8 无 j 无 色1 放 射 状 l j
油桐根组织捷培莽基 j 4 . 1 7 无 『 无色 。 放射状 乳米色 ( 3 O 。 天)
抽捐根组筝{ 藏 +2 营萄糖培养基 4 . 1 B 拇色 J白色 l 棉城状 且黄色 ( 2 天)
燕 米 培 养 基 0 { 一 兰 薰 曩 色 l 一 一 白 色 ' C I 8 ) 毒芽糖琼脂培养基 l 3 .
0 1 1 一 l一 卑 色 十 f + ( 2 天 )
玉 米 椅 培 养 基 一 绿 色l —j 羊 毛 状 ( 2 5 )
西气生苗耸生长状况I +步t， 十十稀薄， +十十密厚I@培养基成分I I v i e S 0. 、 7 H 卜口 q, E , HPO, ,1 . o g .
KC1 0 . . F~ S Oi · H1 0 0 . o l g . Na NO·2 . O g ，蔗糖3 0 g ，巍磨2 n g ，蠢僖木1 0 O n Ⅲ1毋 培养蔷虞丹I玉木暑l 0 O “
■●2 0 蠢曩木¨O O I国培养置壁2 2 s .
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2 . 大型 分 生孢子 形态特征 ：见表 2 ......
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摘 要
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表 明， 此茵 与供 试菌株 曲脂酶 同I酶 曲谱 带特征 和相对 迁移率均 有明 显 的差异 。
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一
、 材 料 和 方 法
( 一)鉴定癀菌的培养基 基本采用Wo l l e n we b e r 镰孢分类培 养 基，但 怍部 分 更
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1 . 供试菌株；详见表 5。
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( 三)接种斌验
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1 . 酶藏制备；将上述振荡培养 8天的供试菌液移至离心管 ，以 2 0 0 0 转 分离心 1 0分
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