第29卷

    2001年7月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第7期

    771～774

    研 究 简 报

    低压液相色谱法分离、制备西红花甙

    张 宏3

    张新申 颜 钫 曾宇红 陈 放

    (四川大学轻工与食品学院 ,成都 610065) (四川大学生命科学院 ,成都 610064)

    摘 要 采用低压液相色谱法制备西红花有效成分西红花甙。最佳分离、制备条件:填料为键合正丁烷

    的苯乙烯2二乙烯苯聚合物 ,其粒度为57～76μm;制备柱为50 cm× 1. 5 cm;纯化柱为60 cm× 0. 80 cm;流

    动相为甲醇2水溶液 ,梯度洗脱范围是50 50～95 5( V V) ;样品量为20 mL (100 g L) ;工作压力为 2 ×105

    Pa。在上述条件下 ,制备了 5种西红花甙 ,经过高效液相色谱法测定 ,其纯度均在97 %以上。其中 ,西红

    花甙21 和西红花甙25的纯度在99 %以上。此方法具有操作简便 ,制备纯度高且运行成本低等优点 ,在

    西红花对照品的制备中具有广泛的应用前景。

    关键词 低压液相色谱法 ,西红花 ,西红花甙 ,分离 ,制备

    2000208214收稿;2001201209接受

    1 引 言

    西红花为鸢尾科植物( Crocus sativs L. )的干燥柱头 ,又名藏红花或番红花。由于其提取物具有亮丽

    的黄色和特殊的香味 ,常用于食品添加剂、香料和丝绸及羊毛染料〔 1〕。在我国传统中医学中 ,西红花具

    有活血化瘀 ,跌打伤后消肿止痛等疗效〔 2〕。西红花还有对小鼠实体瘤生长的抑制作用和抗肿瘤作

    用〔 3 ,4〕。西红花有效成份为西红花酸和西红花甙 ,即西红花酸(crocetin)与不同糖基结合而形成的一系

    列甙酯(crocins) ,其结构式如下:

    当 R1 = R2 = X为西红花甙21 ;R1 = X ,R2 = Y为西红花甙22 ;R1 = X ,R2 = H为西红花甙25 ,其中 ,西红花甙2

    1 (crocin21)含量最大。因此 ,它常作为标准品 ,起着评价西红花药物质量的重要作用。西红花甙的分离

    方法有柱色谱法〔 5〕、薄层色谱法〔 6 ,7〕、高效液相色谱法(HPLC)

    〔 8 ,9〕。一般采用柱色谱法或薄层色谱法初

    分西红花甙后 ,再用 HPLC法纯化 ,得到高纯度的西红花甙。本文采用低压LC法 ,用自制的键合正丁烷

    的苯乙烯 - 二乙烯苯粉末做为填料进行分离、纯化制备5种西红花甙。此方法操作简便 ,运行成本低。

    2 实验部分

    211 仪器与药品

    制备仪自制 ,由低压泵、制备柱(50 × 1. 5 cm ,填料粒度57～76μm) ,纯化柱(60 × 0. 8cm ,填料粒度57

    ～76μm)和收集瓶组成。UV22100紫外可见分光光度仪(UV2Vis ,日本岛津公司) ;2485 型高效液相色谱

    仪(Waters公司) ,紫外可见双波长检测器(Waters 公司) ,联想计算机配有大连化学物理研究所提供的WDL295色谱工作站。

    所用试剂均为分析纯 ,用于 HPLC的甲醇为色谱纯 ,水为二次重蒸馏水。伊朗进口的西红花柱头由

    四川大学生物系提供 ,柱填料∶键合正丁烷的苯乙烯2二乙烯苯聚合物 ,由实验室合成。

    2. 2 西红花的处理

    称取20 g西红花干燥柱头 ,用石油醚、乙醚进行索氏提取 ,除尽油酯 ,再以 70 30 ( V V) 乙醇2水溶

    液在黑暗处连续提取24 h ,得到西红花提取液 ,用旋转蒸发器在 40 ℃将提取液浓缩至一定体积后定容

    于200 mL 棕色瓶中 ,放置于 - 18 ℃的冰箱中保存备用。

    2. 3 制备柱的装填

    将自制填料(直径大于180μm)在球磨机上碾磨 5 min ,用分样筛筛选出 57～76μm的粉末 ,将此粉

    末用乙醇湿法装于玻璃柱中 ,装填 50 cm后 ,用 50 50 ( V V)甲醇2水溶液平衡制备柱 ,待用。装柱压力

    为2 × 105

    Pa。

    214 西红花甙的制备

    将西红花提取液20 mL (100 g L)加于制备柱中 ,用不同体积比的甲醇2水溶液进行梯度洗脱:0～3 h

    甲醇水(50 50) ;3～6 h甲醇水(60 40) ;6～8 h甲醇水(65 35) ;8～12 h甲醇水(75 25) ;12～16 h甲

    醇水(80 20) ;16～18 h甲醇水(85 15) ;18～20 h甲醇水(95 5) 。将分离得到的5种西红花甙分别浓

    缩除去甲醇后 ,在纯化柱上进一步纯化。西红花甙21 用 50 50 的甲醇2水 ,西红花甙22 用 60 40 的甲醇2

    水 ,西红花甙23用65 35 的甲醇2水 ,西红花甙24 用 70 30 的甲醇2水 ,西红花甙25 用 75 25 的甲醇2水作

    流动相进行纯化。收集纯化后的西红花甙 ,冷冻干燥后得80. 0 mg西红花21 , 32. 0 mg西红花22 ,15. 0 mg

    西红花25 ,3. 0 mg西红花23 ,1. 0 mg西红花24。

    2. 5 西红花甙的 UV 2Vis及 HPLC测定

    将5种西红花甙及西红花提取液在UV - Vis分光光度仪上作扫描图 ,扫描范围为200～800 nm ......