降钙素原在新生儿感染性疾病早期诊断中的应用
Expression of CTGF in pulmonary vessels of hypoxemic pulmonary hypertensive mouse
ZHANG Qiang，LIN Yong
(Department of Respiratory，Zhongda Hospital，Southeast University，Nanjing210009，China)
Abstract:Objective To establish a model of hypoxemic pulmonary hypertensive mouse and to explore the expression of connective tissue growth factor(CTGF)in the pulmonary arteriole from pulmonary hypertensive mouse.Methods The model of hypoxemic pulmonary hypertensive mouse was constructed by a method of interval ordinary pressure hypoxia.Right cardia catheterization was employed for mPAP detection，and RV.(LV+S)was determined by weight.Lung tissue section staining and image processing were performed to detect the morphologic change of pulmonary arteriole.CTGF levels in the pulmonary arteriole were determined by immunohistochemistry，and the concentration was measured by image pattern analysis and semi-quantitative technique.Results Three weeks later，the results of mPAP，RV.(LV+S)，and the levels of WT%and WA%indicating the proliferation of vessel wall in the group of hypoxemic group were higher than those in normal group(P<0.01).There was no expression of CTGF protein in the pulmonary arteriole of the normal group，whereas，it was highly expressed in the tunica adventitia，slightly expressed in the endangium and rarely expressed in the tunica media of pulmonary arteriole in the hypoxemic group.Conclusion Method of interval ordinary pressure hypoxia can successfully construct hypoxemic pulmo-nary hypertensive mouse model.CTGF may play an important role in hypoxia pulmonary vascular remodeling.
Key words:hypoxia;pulmonary vascular remodeling;connective tissue growth factor
[摘要]目的: 探讨新生儿感染性疾病早期诊断的方法和降钙素原(PCT)在新生儿感染性疾病诊断中的临床意义。 方法: 对76例疑似新生儿感染患儿，在应用抗生素前测定PCT、C反应蛋白(CRP)、血常规及行血培养，比较它们对细菌感染诊断的敏感性、特异性。 结果: (1)血清PCT检测对细菌感染诊断的敏感性为81.36%，特异性为64.71%。(2)CRP对细菌感染诊断敏感性为47.46%，特异性为70.59%;与血清PCT检测结果比较，敏感性有显著差异(P<0.01)，特异性无显著差异(P>0.05)。(3)白细胞计数或(和)分类异常升高对细菌感染诊断敏感性为52.54%，特异性为52.94%，与血清PCT检测结果比较有显著差异(P<0.05)。 结论: 血清PCT可作为新生儿感染的早期检测指标，其作用优于CRP测定和外周血白细胞计数及分类。通过对PCT水平的动态观察，既可早期诊断、及时治疗新生儿感染性疾病，又可判断感染是否被控制。
[关键词] 降钙素原;新生儿感染;早期诊断
目前，在我国新生儿危重症监护病房中，细菌感染性疾病尤其是全身性细菌感染性疾病仍占相当比例，而且病死率较高。此类疾病的早期诊断和及时治疗对降低新生儿病死率具有积极意义，但目前尚缺少一种快速可靠的实验室诊断方法，以致患儿在重症细菌感染时，实验室指标未出现阳性结果，病情已有恶化，丧失抢救的最佳时机。新近发现，血清降钙素原(PCT)的升高与细菌感染密切相关[1] ，PCT被认为是诊断全身细菌感染性疾病的重要标志物。有鉴于此，作者对76例疑似新生儿感染患儿进行血清PCT的检测，并与C反应蛋白(CRP)、外周血白细胞检测结果进行比较，以探讨PCT在新生儿感染性疾病中的诊断价值。
1 对象与方法
1.1 研究对象
2003年3月～2004年8月，在本院新生儿科住院怀疑有全身感染性疾病的新生儿76例，男45例，女31例，平均年龄13.24d(0～28d)。76例患儿按出院(或死亡)诊断分为两组:细菌感染组59例，其中败血症13例，肺炎19例，腹膜炎2例，脐炎15例，脓疱病4例，4S综合征1例，肠炎5例;非细菌感染组17例，其中缺氧缺血性脑病8例，母乳性黄疸6例，ABO溶血症3例。
1.2 血清PCT、CRP检测方法
新生儿入院后，在应用抗生素前采集静脉血，测定PCT、CRP及血常规，同时进行细菌培养。血清PCT检测采用半定量固相免疫测定法，PCT.Q检测卡为德国BRAHMS公司产品(由上海欧典生物技术有限公司提供)，按说明书操作，检测结果分为<0.5ng·ml-1 ，0.5～2.0ng·ml-1 ，2.1～10.0ng·ml-1 ，和>10.0ng·ml-1 4个等级，正常值为<0.1ng·ml-1 ，按文献报道，PCT≥0.5ng·ml-1 为阳性阈值。CRP采用免疫比浊法(芬兰Orion Diagnostica公司生产的CRP.Quickread仪)，≥8mg·L-1 为阳性，<8mg·L-1 为阴性。
1.3 分析方法
比较细菌感染和非细菌感染两组患儿血清PCT的检测结果，并按文献提供的方法[2] 计算出该试验对细菌感染诊断的敏感性和特异性，同时与CRP、外周血白细胞计数和分类结果进行比较。组间差异采用χ2 检验或u检验。
2 结 果
2.1 血清PCT检测结果 见表1。表1 两组患儿血清PCT检测结果比(略)
2.2 CRP检测结果
细菌感染组59例中，CRP阳性28例，占47.46%;非细菌感染组17例中，CRP阳性5例，占29.41%。CRP对细菌感染诊断敏感性为47.46%(28.59)，特异性为70.59%(12.17);与血清PCT检测结果比较，对细菌感染诊断敏感性有显著差异(P<0.01)，特异性无显著差异(P>0.05)。
2.3 外周血白细胞计数和分类检测结果
细菌感染组59例中，有31例白细胞异常升高，28例正常或下降;非细菌感染组17例中，有8例白细胞异常升高，9例正常或下降。白细胞计数或(和)分类异常升高对细菌感染诊断敏感性为52.54%(31.59)， 特异性为52.94%(9.17)，与血清PCT检测结果比较差异均有显著性(均为P<0.05)。
3 讨 论
PCT是降钙素的前肽，是一种无激素活性的糖蛋白，由116个氨基酸组成，相对分子质量为13000，半衰期为25～30h。生理情况下，甲状腺C细胞可产生极少量的PCT，健康人群的血清PCT水平通常测不到(<0.1ng·ml-1 )，但在细菌感染特别是重症感染时，除甲状腺外，肝脏的巨噬细胞和单核细胞，肺、肠道组织的淋巴细胞以及内分泌细胞都能合成分泌PCT，此时血清PCT水平会明显升高，且随感染进展或控制而持续在高水平或逐渐下降。
目前在我国新生儿病房中，细菌感染性疾病特别是全身性细菌感染性疾病仍然占相当比例，而且病死率较高。因此，此类疾病的早期诊断和及时治疗对降低新生儿病死率具有积极的意义。自1993年Assicot等[1] 报道了严重细菌感染患者血清PCT水平升高后，近几年国外已将PCT的检测广泛应用于各种感染性疾病的诊断，认为它是一种有潜在诊断价值的敏感的全新指标
[3，4] 。
动物实验[5] 发现，狒狒发生脓血症后4h，血清PCT水平明显升高，6～32h达高峰，72h左右基本回落到正常值水平。临床试验结果类似，注射细菌内毒素后4h，人血清中PCT水平开始上升，持续高水平时间≥24h。PCT诱导产生具有早期、迅速的特点，因而可作为早期细菌感染的诊断指标[6] 。
本研究对76例疑有全身感染性疾病新生儿进行了PCT、CRP测定及外周血白细胞计数、分类，若以血清PCT≥0.5ng·ml-1 为阳性阈值，其对细菌感染诊断的敏感性、特异性均明显高于外周血白细胞计数和分类;与血清CRP比较，其对细菌感染诊断的敏感性明显高于CRP测定，但特异性无显著差异。说明PCT的升高要早于CRP的上升，PCT的测定更能早期反映机体全身性感染，其原因可能与细菌感染的早期CRP水平较低有关，与Monneret等[7] 报道的PCT增高和恢复比CRP更快相符合。
在本组中，败血症、腹膜炎患儿因全身中毒症状较重，血清PCT明显升高，并且与感染的严重程度相关。在伴有多脏器功能损害的患儿，其PCT值>10ng·ml-1 ，在治疗过程中动态观察，如明显下降则预后好，如无明显下降或进行性上升则预后差。本组中2例死亡，1例自动出院。CRP是一种急性时相蛋白，作为感染检测手段目前已广泛应用于临床，对协助诊断新生儿感染有一定意义，特别是重症感染，但与PCT相比，其对新生儿早期感染诊断的敏感性较差。基于急性时相蛋白的特点，CRP在体内受较多因素影响，在感染与非感染间特异性不强。
而PCT在非感染性疾病患者血清中无明显升高，所以其测定对鉴别细菌或非细菌感染有很大帮助，尤其是对新生儿感染的早期诊断及判断预后有很大帮助。
通过研究作者认为，PCT是人体一种敏感的细菌感染标志物，在患者细菌感染时血清PCT升高，特别是全身性重症细菌感染时升高尤为明显，可作为新生儿感染的早期检测指标。新生儿败血症由于临床症状不典型、诊断金标准中的血培养阳性率低，早期诊断困难，故PCT对诊断新生儿败血症更有临床价值，其作用优于CRP测定和外周血白细胞计数及分类。临床上对诊断原因不明的危重新生儿，可根据血清PCT水平的高低判断是否存在细菌感染，对高度怀疑细菌感染者，应尽早足量使用抗生素，严防滥用抗生素。对重症细菌感染患儿，通过对PCT水平的观察，既可早期 诊断、及时治疗，又可判断感染是否控制。
[参考文献]
[1]ASSICOTM，GENDREL D，CARSINH，et al.High serum procalci-tonin concentrations in patients with sepsis and infection[J].Lan-
cet，1993，341:515.518.
[2]彭道泉.诊断性试验研究及评论[A].赵水平，彭道泉.现代临床科研方法学[M].长沙:中南大学出版社，2001.35.59.
[3]HAUSFATER P，GARRIC S.Usefulness of procalcitonin as a mak-er of systemic infection in emergency department patients:a pro-spective study[J].Clin Infect Dis，2003，34:895.901.
[4]van LEEUWEN H J，VOORBIJ H A.Procalcitonin concentrations in the diagnosis of acute inflammatory reactions[J].Ned Tijdschr
Genesskd，2002，146:55.59.
[5]REDL H，SCHLAG G，TOGEL E，et al.Procalcitonin release pat-terns in a baboon model of trauma and sepsis:relationship to cyto-kines and neopterin[J].Crit Care Med，2000，28(11):3659.3663.
[6]李翠萍，钱素云.降钙素原在危重症监护中的研究进展[J].国外医学儿科学分册，2002，31:85.86.
[7]MONNERET G，LABAUNE J M，ISAAC C，et al.Procalcitonin and C-reaction protein leves in neonatal infections[J].Acta Paediatr，1997，86(2):209.212.
(江苏省苏北人民医院新生儿科 江苏扬州 225001), http://www.100md.com(朱玲玲，舒桂华，严语，徐翔)
ZHANG Qiang，LIN Yong
(Department of Respiratory，Zhongda Hospital，Southeast University，Nanjing210009，China)
Abstract:Objective To establish a model of hypoxemic pulmonary hypertensive mouse and to explore the expression of connective tissue growth factor(CTGF)in the pulmonary arteriole from pulmonary hypertensive mouse.Methods The model of hypoxemic pulmonary hypertensive mouse was constructed by a method of interval ordinary pressure hypoxia.Right cardia catheterization was employed for mPAP detection，and RV.(LV+S)was determined by weight.Lung tissue section staining and image processing were performed to detect the morphologic change of pulmonary arteriole.CTGF levels in the pulmonary arteriole were determined by immunohistochemistry，and the concentration was measured by image pattern analysis and semi-quantitative technique.Results Three weeks later，the results of mPAP，RV.(LV+S)，and the levels of WT%and WA%indicating the proliferation of vessel wall in the group of hypoxemic group were higher than those in normal group(P<0.01).There was no expression of CTGF protein in the pulmonary arteriole of the normal group，whereas，it was highly expressed in the tunica adventitia，slightly expressed in the endangium and rarely expressed in the tunica media of pulmonary arteriole in the hypoxemic group.Conclusion Method of interval ordinary pressure hypoxia can successfully construct hypoxemic pulmo-nary hypertensive mouse model.CTGF may play an important role in hypoxia pulmonary vascular remodeling.
Key words:hypoxia;pulmonary vascular remodeling;connective tissue growth factor
[摘要]目的: 探讨新生儿感染性疾病早期诊断的方法和降钙素原(PCT)在新生儿感染性疾病诊断中的临床意义。 方法: 对76例疑似新生儿感染患儿，在应用抗生素前测定PCT、C反应蛋白(CRP)、血常规及行血培养，比较它们对细菌感染诊断的敏感性、特异性。 结果: (1)血清PCT检测对细菌感染诊断的敏感性为81.36%，特异性为64.71%。(2)CRP对细菌感染诊断敏感性为47.46%，特异性为70.59%;与血清PCT检测结果比较，敏感性有显著差异(P<0.01)，特异性无显著差异(P>0.05)。(3)白细胞计数或(和)分类异常升高对细菌感染诊断敏感性为52.54%，特异性为52.94%，与血清PCT检测结果比较有显著差异(P<0.05)。 结论: 血清PCT可作为新生儿感染的早期检测指标，其作用优于CRP测定和外周血白细胞计数及分类。通过对PCT水平的动态观察，既可早期诊断、及时治疗新生儿感染性疾病，又可判断感染是否被控制。
[关键词] 降钙素原;新生儿感染;早期诊断
目前，在我国新生儿危重症监护病房中，细菌感染性疾病尤其是全身性细菌感染性疾病仍占相当比例，而且病死率较高。此类疾病的早期诊断和及时治疗对降低新生儿病死率具有积极意义，但目前尚缺少一种快速可靠的实验室诊断方法，以致患儿在重症细菌感染时，实验室指标未出现阳性结果，病情已有恶化，丧失抢救的最佳时机。新近发现，血清降钙素原(PCT)的升高与细菌感染密切相关[1] ，PCT被认为是诊断全身细菌感染性疾病的重要标志物。有鉴于此，作者对76例疑似新生儿感染患儿进行血清PCT的检测，并与C反应蛋白(CRP)、外周血白细胞检测结果进行比较，以探讨PCT在新生儿感染性疾病中的诊断价值。
1 对象与方法
1.1 研究对象
2003年3月～2004年8月，在本院新生儿科住院怀疑有全身感染性疾病的新生儿76例，男45例，女31例，平均年龄13.24d(0～28d)。76例患儿按出院(或死亡)诊断分为两组:细菌感染组59例，其中败血症13例，肺炎19例，腹膜炎2例，脐炎15例，脓疱病4例，4S综合征1例，肠炎5例;非细菌感染组17例，其中缺氧缺血性脑病8例，母乳性黄疸6例，ABO溶血症3例。
1.2 血清PCT、CRP检测方法
新生儿入院后，在应用抗生素前采集静脉血，测定PCT、CRP及血常规，同时进行细菌培养。血清PCT检测采用半定量固相免疫测定法，PCT.Q检测卡为德国BRAHMS公司产品(由上海欧典生物技术有限公司提供)，按说明书操作，检测结果分为<0.5ng·ml-1 ，0.5～2.0ng·ml-1 ，2.1～10.0ng·ml-1 ，和>10.0ng·ml-1 4个等级，正常值为<0.1ng·ml-1 ，按文献报道，PCT≥0.5ng·ml-1 为阳性阈值。CRP采用免疫比浊法(芬兰Orion Diagnostica公司生产的CRP.Quickread仪)，≥8mg·L-1 为阳性，<8mg·L-1 为阴性。
1.3 分析方法
比较细菌感染和非细菌感染两组患儿血清PCT的检测结果，并按文献提供的方法[2] 计算出该试验对细菌感染诊断的敏感性和特异性，同时与CRP、外周血白细胞计数和分类结果进行比较。组间差异采用χ2 检验或u检验。
2 结 果
2.1 血清PCT检测结果 见表1。表1 两组患儿血清PCT检测结果比(略)
2.2 CRP检测结果
细菌感染组59例中，CRP阳性28例，占47.46%;非细菌感染组17例中，CRP阳性5例，占29.41%。CRP对细菌感染诊断敏感性为47.46%(28.59)，特异性为70.59%(12.17);与血清PCT检测结果比较，对细菌感染诊断敏感性有显著差异(P<0.01)，特异性无显著差异(P>0.05)。
2.3 外周血白细胞计数和分类检测结果
细菌感染组59例中，有31例白细胞异常升高，28例正常或下降;非细菌感染组17例中，有8例白细胞异常升高，9例正常或下降。白细胞计数或(和)分类异常升高对细菌感染诊断敏感性为52.54%(31.59)， 特异性为52.94%(9.17)，与血清PCT检测结果比较差异均有显著性(均为P<0.05)。
3 讨 论
PCT是降钙素的前肽，是一种无激素活性的糖蛋白，由116个氨基酸组成，相对分子质量为13000，半衰期为25～30h。生理情况下，甲状腺C细胞可产生极少量的PCT，健康人群的血清PCT水平通常测不到(<0.1ng·ml-1 )，但在细菌感染特别是重症感染时，除甲状腺外，肝脏的巨噬细胞和单核细胞，肺、肠道组织的淋巴细胞以及内分泌细胞都能合成分泌PCT，此时血清PCT水平会明显升高，且随感染进展或控制而持续在高水平或逐渐下降。
目前在我国新生儿病房中，细菌感染性疾病特别是全身性细菌感染性疾病仍然占相当比例，而且病死率较高。因此，此类疾病的早期诊断和及时治疗对降低新生儿病死率具有积极的意义。自1993年Assicot等[1] 报道了严重细菌感染患者血清PCT水平升高后，近几年国外已将PCT的检测广泛应用于各种感染性疾病的诊断，认为它是一种有潜在诊断价值的敏感的全新指标
[3，4] 。
动物实验[5] 发现，狒狒发生脓血症后4h，血清PCT水平明显升高，6～32h达高峰，72h左右基本回落到正常值水平。临床试验结果类似，注射细菌内毒素后4h，人血清中PCT水平开始上升，持续高水平时间≥24h。PCT诱导产生具有早期、迅速的特点，因而可作为早期细菌感染的诊断指标[6] 。
本研究对76例疑有全身感染性疾病新生儿进行了PCT、CRP测定及外周血白细胞计数、分类，若以血清PCT≥0.5ng·ml-1 为阳性阈值，其对细菌感染诊断的敏感性、特异性均明显高于外周血白细胞计数和分类;与血清CRP比较，其对细菌感染诊断的敏感性明显高于CRP测定，但特异性无显著差异。说明PCT的升高要早于CRP的上升，PCT的测定更能早期反映机体全身性感染，其原因可能与细菌感染的早期CRP水平较低有关，与Monneret等[7] 报道的PCT增高和恢复比CRP更快相符合。
在本组中，败血症、腹膜炎患儿因全身中毒症状较重，血清PCT明显升高，并且与感染的严重程度相关。在伴有多脏器功能损害的患儿，其PCT值>10ng·ml-1 ，在治疗过程中动态观察，如明显下降则预后好，如无明显下降或进行性上升则预后差。本组中2例死亡，1例自动出院。CRP是一种急性时相蛋白，作为感染检测手段目前已广泛应用于临床，对协助诊断新生儿感染有一定意义，特别是重症感染，但与PCT相比，其对新生儿早期感染诊断的敏感性较差。基于急性时相蛋白的特点，CRP在体内受较多因素影响，在感染与非感染间特异性不强。
而PCT在非感染性疾病患者血清中无明显升高，所以其测定对鉴别细菌或非细菌感染有很大帮助，尤其是对新生儿感染的早期诊断及判断预后有很大帮助。
通过研究作者认为，PCT是人体一种敏感的细菌感染标志物，在患者细菌感染时血清PCT升高，特别是全身性重症细菌感染时升高尤为明显，可作为新生儿感染的早期检测指标。新生儿败血症由于临床症状不典型、诊断金标准中的血培养阳性率低，早期诊断困难，故PCT对诊断新生儿败血症更有临床价值，其作用优于CRP测定和外周血白细胞计数及分类。临床上对诊断原因不明的危重新生儿，可根据血清PCT水平的高低判断是否存在细菌感染，对高度怀疑细菌感染者，应尽早足量使用抗生素，严防滥用抗生素。对重症细菌感染患儿，通过对PCT水平的观察，既可早期 诊断、及时治疗，又可判断感染是否控制。
[参考文献]
[1]ASSICOTM，GENDREL D，CARSINH，et al.High serum procalci-tonin concentrations in patients with sepsis and infection[J].Lan-
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[2]彭道泉.诊断性试验研究及评论[A].赵水平，彭道泉.现代临床科研方法学[M].长沙:中南大学出版社，2001.35.59.
[3]HAUSFATER P，GARRIC S.Usefulness of procalcitonin as a mak-er of systemic infection in emergency department patients:a pro-spective study[J].Clin Infect Dis，2003，34:895.901.
[4]van LEEUWEN H J，VOORBIJ H A.Procalcitonin concentrations in the diagnosis of acute inflammatory reactions[J].Ned Tijdschr
Genesskd，2002，146:55.59.
[5]REDL H，SCHLAG G，TOGEL E，et al.Procalcitonin release pat-terns in a baboon model of trauma and sepsis:relationship to cyto-kines and neopterin[J].Crit Care Med，2000，28(11):3659.3663.
[6]李翠萍，钱素云.降钙素原在危重症监护中的研究进展[J].国外医学儿科学分册，2002，31:85.86.
[7]MONNERET G，LABAUNE J M，ISAAC C，et al.Procalcitonin and C-reaction protein leves in neonatal infections[J].Acta Paediatr，1997，86(2):209.212.
(江苏省苏北人民医院新生儿科 江苏扬州 225001), http://www.100md.com(朱玲玲，舒桂华，严语，徐翔)