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编号:11123892
双歧杆菌定量分析技术研究进展
http://www.100md.com 陈津津, 蔡 威
双歧杆菌;定量分析;计数;杂交陈津津,蔡威.双歧杆菌定量分析技术研究进展.世界华人消化杂志2006;14(11)1077-1080,陈津津,蔡威,通讯作者:,电话:,收
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     陈津津, 蔡威, 上海交通大学医学院附属新华医院临床营养中心 上海市 200092

    陈津津, 2004年上海交通大学医学院博士生, 主治医师, 主要从事胃肠道微生态的研究.

    国家自然科学基金资助项目, No. 30271350

    通讯作者: 陈津津, 200092, 上海市控江路1665号, 上海交通大学医学院附属新华医院临床营养中心. jjvoo@163.com

    电话: 021-65790000

    收稿日期: 2006-02-06 接受日期: 2006-02-21

    摘要

    传统细菌培养计数法是依据细菌表型特征来对双歧杆菌进行鉴别计数的, MTPY和BSM培养基是经常使用的双歧杆菌培养基. 近年来包括点杂交、荧光原位杂交、荧光原位杂交结合流式细胞计数和荧光实时定量PCR技术在内的以核糖体及其编码基因核酸序列为鉴别基础的分子生物学技术被广泛用于双歧杆菌的定量定性分析, 其中荧光原位杂交结合流式细胞计数和荧光实时定量PCR技术是目前较为理想的方法.

    关键词: 双歧杆菌; 定量分析; 计数; 杂交

    陈津津, 蔡威. 双歧杆菌定量分析技术研究进展. 世界华人消化杂志 2006;14(11):1077-1080

    0 引言

    双歧杆菌(Bifidobacterium)是1899年由法国巴斯德研究所的Tissier首次从母乳喂养的婴儿粪便中分离发现的, 作为恒温动物肠道内重要的原籍菌群, 他与其他生理性细菌成员一起构成了一个微生物群落, 并与宿主构成一个微生态系统, 发挥维持微生态平衡、生物拮抗、免疫调节、营养等多方面的生理作用. 对人类而言, 他不仅能维持肠道的微生态平衡, 还能提高人体对乳糖的耐受性, 具有降血脂、抗肿瘤的作用, 并能合成多种维生素, 促进机体免疫机能, 是最重要的益生菌之一, 其在肠道内的总数量反应了机体肠道微生态状况和机体的健康状况. 因此对肠道内或食品中的双歧杆菌进行准确地定量分析, 对于医疗卫生和营养保健方面的研究具有重要意义. 双歧杆菌定量分析的方法主要分为传统计数法和分子生物学定量分析法.

    1 传统计数法

    细菌培养加菌落计数是双歧杆菌定性定量的一种传统计数方法, 主要是依据细菌表型特征通过特殊培养基接种培养、菌株计数而实现. 由于双歧杆菌属于革兰氏阳性厌氧菌, 无孢子形成, 不能游动, 无氧化脱氢酶, 形态多变, 对酸敏感, 对营养要求苛刻, 其生长所需的氮源需有酪蛋白降解产生的肽和氨基酸, 所需的碳源大多由人体不能利用的寡糖提供, 且与其他乳酸菌如嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌及嗜热链球菌具有相近的生长特点, 使双歧杆菌的培养和鉴别存在很大难度.

    当待测样品中仅含有双歧杆菌时, 其计数可在葡萄糖血肝培养基(glucose-blood-liver, GBL)、强化梭菌培养基(reinforced clostridial agar, RCA)和脑心浸液培养基(brain-heart infusion, BHI)等培养基中进行[1]. 然而大多情况下, 待测样品中往往混合了多种细菌, 此时必须利用选择性鉴别培养基来对双歧杆菌进行鉴别计数, 各种细菌不同的氧耐受性、营养要求、抗生素敏感性以及菌落的形态和颜色特征构成了鉴别的基础. 在以往众多的选择性鉴别培养基中, 应用效果较好的主要有: 1978年Teraguchi et al[2]将新霉素-巴龙霉素-萘啶酮酸-氯化锂培养基(neomycin-paromomycin-nalidixic acid-lithium chloride, NPNL)用于双歧杆菌的选择计数, 该培养基在后来双歧杆菌计数培养基的发展中一直作为一种参考培养基. 其后, Lapierre et al[3]设计的氯化锂-丙酸钠培养基(lithium chloride-sodium propionate, LP)及Lim et al[4]研制的葡萄糖-血肝-牛胆汁庆大霉素培养基(glucose-blood-liver-oxgall-gentamycin, GBL-OG), 在发酵乳制品中选择计数双歧杆菌时也得到较好的结果, 1999年Rhodes et al[5]研究的在半乳糖基质中同时计数双歧杆菌及其他乳酸菌的方法也比较好. 近年改良的TPY培养基(modified TPY, MTPY)[6]和在MRS培养基中添加盐酸半胱氨酸的BSM培养基(bifidobacteria selective medium, BSM)[7]因对双歧杆菌的选择性较强、培养阳性率较高而经常使用 ......

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