用免疫组化方法鉴定转染 基因nm-23-H1蛋白表达的实验体会
作者通过转染细胞(ACC-m/nm23-H 1 )蛋白表达经免疫组化方法分析鉴定获得满意效果这一方法，将该法与蛋白印迹方法加以比较，并进行分析评价，重新认识到该法具有许多优势。
1 方法
转染细胞(ACC-m/nm23-H 1 )与非转染细胞(ACC-m)爬片，洗涤，固定后，H20h封闭处理，滴加nm23-H 1 鼠抗人单抗，37℃1h洗涤，滴加SP试剂各1次，37℃30min，洗涤，DAB显色，苏木素衬染。
2 结果
转染细胞nm23-H 1 蛋白质的表达较非转染细胞 不仅强度(着色深浅)增加，表达量(着色多少)增加， 且表现形式(颗粒状和网状等)和表达部位(细胞不同部位)多样化，衬染后细胞核呈蓝色。
3 讨论
免疫组化方法是一种常见且较为稳定的分析蛋白质表达的实验方法，观察诸如抗原、抗体和受体等在细胞中的表达具有特异性高的特点。经过数次改进更新后，目前采用的SP法使其灵敏度大大提高。除此之外，在与同样采用观察蛋白质表达的方法之一———蛋白印迹法比较后，作者认为免疫组化方法还有以下优势:①经济:涉及试剂种类不多，价格相对便宜，所需细胞数量较少;②快速:整个实验流程一般只需6～8h;③简单:实验环节较少，重复实验较易;④蛋白质在细胞内的表达直观、明了，真实可信;⑤阳性物质的定量、定位，分布和形态可与图像分析结合起来用电脑进行精确的数据化分析和统计学处理;⑥通过衬染不仅可消除大部分非特异性染色，并可使细胞结构更加清晰完善，便于联系细胞的功能和整体性来进 行相关分析和运用结果;⑦可避免蛋白印迹法在蛋白 质提取、电泳样品制样和转印过程中出现的变性和丢失;⑧安全:除DAB外，其它试剂无毒性;⑨对环境的危害小:试剂无需经特殊处理即可进入下水道。因此，免疫组化方法迄今仍不失为一种观察蛋白质在细胞中表达的经济实用有效的绿色首选方法。
(成都市第一人民医院中心实验室 1 四川大学第一附院中心实验室 成都 610000), http://www.100md.com(孔虹 黄志刚)
1 方法
转染细胞(ACC-m/nm23-H 1 )与非转染细胞(ACC-m)爬片，洗涤，固定后，H20h封闭处理，滴加nm23-H 1 鼠抗人单抗，37℃1h洗涤，滴加SP试剂各1次，37℃30min，洗涤，DAB显色，苏木素衬染。
2 结果
转染细胞nm23-H 1 蛋白质的表达较非转染细胞 不仅强度(着色深浅)增加，表达量(着色多少)增加， 且表现形式(颗粒状和网状等)和表达部位(细胞不同部位)多样化，衬染后细胞核呈蓝色。
3 讨论
免疫组化方法是一种常见且较为稳定的分析蛋白质表达的实验方法，观察诸如抗原、抗体和受体等在细胞中的表达具有特异性高的特点。经过数次改进更新后，目前采用的SP法使其灵敏度大大提高。除此之外，在与同样采用观察蛋白质表达的方法之一———蛋白印迹法比较后，作者认为免疫组化方法还有以下优势:①经济:涉及试剂种类不多，价格相对便宜，所需细胞数量较少;②快速:整个实验流程一般只需6～8h;③简单:实验环节较少，重复实验较易;④蛋白质在细胞内的表达直观、明了，真实可信;⑤阳性物质的定量、定位，分布和形态可与图像分析结合起来用电脑进行精确的数据化分析和统计学处理;⑥通过衬染不仅可消除大部分非特异性染色，并可使细胞结构更加清晰完善，便于联系细胞的功能和整体性来进 行相关分析和运用结果;⑦可避免蛋白印迹法在蛋白 质提取、电泳样品制样和转印过程中出现的变性和丢失;⑧安全:除DAB外，其它试剂无毒性;⑨对环境的危害小:试剂无需经特殊处理即可进入下水道。因此，免疫组化方法迄今仍不失为一种观察蛋白质在细胞中表达的经济实用有效的绿色首选方法。
(成都市第一人民医院中心实验室 1 四川大学第一附院中心实验室 成都 610000), http://www.100md.com(孔虹 黄志刚)