[摘要]目的: 探讨体外培养条件下高糖状态对血管内皮细胞的影响。 方法: 培养人脐静脉内皮细胞株ECV304，分为对照组和高糖组，用分光光度比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH.PX)活力，RT.PCR法检测细胞间粘附分子1(ICAM.1)mRNA水平，免疫细胞化学法观察内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达。 结果: 高糖组GSH.PX活力明显下降，eNOS、iNOS蛋白表达明显增高，ICAM.1mRNA水平也显著上升。 结论: 在较短时间内糖浓度升高可引起血管内皮细胞GSH.PX活力下降，ICAM.1mRNA、eNOS和iNOS蛋白表达增高，对糖尿病血管病变早期进展起一定的作用。

    [关键词] 高糖;人脐静脉内皮细胞;一氧化氮合酶;细胞间粘附分子1

    糖尿病血管并发症是糖尿病患者死亡的主要原因之一，而内皮细胞损伤是血管病变的基础。长期慢性高血糖与血管并发症的关系十分肯定，但是，短暂的、急性高血糖对血管病变的影响研究不多。本研究观察短期高糖刺激对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株ECV304的生物学特性的影响，为进一步探讨糖尿病血管病变早期进展的机制提供一定的实验依据。

     1 材料与方法

    1.1 细胞、试剂及仪器

    ECV304购自中国科学院上海细胞生物学研究所，DMEM培养液购自Gibco公司，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH.PX)试剂盒购自南京建成生物工程研究所，Triblue试剂购自上海申能博彩公司，引物由上海申能博彩公司合成，RT.PCR试剂盒购自大连宝生物工程有限公司，兔抗人内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)多克隆抗体购自Santa Cruz公司，Power VisionTM二步法免疫细胞化学检测试剂购自北京中山生物技术有限公司，数码摄像机及图像分析仪购自日本尼康公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及分组 取在含10%小牛血清的低糖DMEM培养液中贴壁生长良好的对数生长期ECV304细胞，以每孔2×10 5 个细胞总数接种到6孔培养板，待细胞生长达50%～60%，用无血清DMEM培养液培养24h，使细胞处于静止状态，此时设为0h，然后加入不同处理因素随机分为2组。(1)对照组(C组):用低糖DMEM培养液，葡萄糖终浓度为5.5mmol·L -1 ;(2)高糖组(HG组):用高糖DMEM培养液，葡萄糖终浓度为25mmol·L -1 。分别于12、24、36h收上清液测GSH.PX活力 ......