短发夹状RNA抑制GCS基因在人乳腺癌细胞的表达及逆转其多药耐药
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参见附件。
目的 构建葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase, GCS)基因的短发夹状RNA(shRNA),观察其对人耐药乳腺癌细胞GCS表达的抑制及多药耐药的逆转作用。方法 设计两对GCS基因编码的反向重复序列，中间间隔6个nt,体外合成并克隆至载体pSUPER。转染乳腺癌细胞，Western blot和免疫细胞化学方法测定GCS表达。Western blot、比色法检测细胞内caspase-3的表达，流式细胞仪分析细胞凋亡率。四氮唑盐(MTT)法检测半数细胞抑制浓度。结果 酶切和DNA测序证实重组质粒构建成功。转染后GCS蛋白含量分别下降 80%、 82%， GCS表达阳性率降低为18.1%、16.7%。caspase-3表达和活性均显著增强，细胞凋亡率明显增加。细胞对化疗药物耐药性有明显下降。结论 shRNA可有效抑制人耐药乳腺癌细胞中GCS表达，并可提高其对多种化疗药物的敏感性。
目的 构建葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase, GCS)基因的短发夹状RNA(shRNA),观察其对人耐药乳腺癌细胞GCS表达的抑制及多药耐药的逆转作用。方法 设计两对GCS基因编码的反向重复序列，中间间隔6个nt,体外合成并克隆至载体pSUPER。转染乳腺癌细胞，Western blot和免疫细胞化学方法测定GCS表达。Western blot、比色法检测细胞内caspase-3的表达，流式细胞仪分析细胞凋亡率。四氮唑盐(MTT)法检测半数细胞抑制浓度。结果 酶切和DNA测序证实重组质粒构建成功。转染后GCS蛋白含量分别下降 80%、 82%， GCS表达阳性率降低为18.1%、16.7%。caspase-3表达和活性均显著增强，细胞凋亡率明显增加。细胞对化疗药物耐药性有明显下降。结论 shRNA可有效抑制人耐药乳腺癌细胞中GCS表达，并可提高其对多种化疗药物的敏感性。
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