应用抑制性消减杂交克隆震颤大鼠差异表达基因
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参见附件。
目的 采用抑制性消减杂交技术克隆震颤鼠差异表达基因。方法 分别从震颤鼠和正常鼠的海马组织中提取mRNA，反转录为双链cDNA，经RsaI酶切。实验组的cDNA等分后与不同的接头连接，再与对照组的cDNA进行两次抑制性多聚酶反应(PCR)扩增。而后将消减cDNA产物与T/A克隆连接，转入大肠杆菌进行文库扩增，最后进行测序分析。结果 所获癫痫差异表达基因的消减cDNA产物散布在300bp～800bp范围。经蓝白筛选和酶切鉴定，共得到23个阳性克隆。经测序分析发现其中1个阳性克隆的cDNA序列与正常的Wistar大鼠有差别，经比对可能与线粒体的基因变异有关。结论 震颤大鼠线粒体的变异基因片段可能与震颤大鼠的癫痫发作相关。
目的 采用抑制性消减杂交技术克隆震颤鼠差异表达基因。方法 分别从震颤鼠和正常鼠的海马组织中提取mRNA，反转录为双链cDNA，经RsaI酶切。实验组的cDNA等分后与不同的接头连接，再与对照组的cDNA进行两次抑制性多聚酶反应(PCR)扩增。而后将消减cDNA产物与T/A克隆连接，转入大肠杆菌进行文库扩增，最后进行测序分析。结果 所获癫痫差异表达基因的消减cDNA产物散布在300bp～800bp范围。经蓝白筛选和酶切鉴定，共得到23个阳性克隆。经测序分析发现其中1个阳性克隆的cDNA序列与正常的Wistar大鼠有差别，经比对可能与线粒体的基因变异有关。结论 震颤大鼠线粒体的变异基因片段可能与震颤大鼠的癫痫发作相关。
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