牛分支杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4E(mce4E)的原核表达与二级结构分析
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摘 要：为了阐明牛分支杆菌侵入宿主细胞和在肺泡巨噬细胞长期存活的机理，进一步研究牛分支杆菌的致病机理，以牛分支杆菌的DNA为模板，通过PCR的方法扩增克隆牛分支杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4E(Mammalian cell-entry protein 4E，mce4 E)基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pET30a(+)并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的牛分支杆菌和人分支杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白mce4 E基因同源性为100%。将重组表达载体转入宿主菌BL21进行诱导表达,表达蛋白经SDS -PAGE分析和Western-blot免疫印迹鉴定,结果证明目的蛋白获得高效表达并以包涵体的形式存在, 表达量占菌体总量的53.3%，大小约为45kDa； 利用Ni-NTA琼脂糖柱对表达蛋白进行纯化，纯化率在95%以上；纯化的蛋白经过透析复性、圆二色谱(CD)测定，结果表明重组蛋白为典型的α螺旋型结构，经Jascow32软件分析计算，mce4E蛋白含有39.1%的α螺旋，60.9%的无规卷曲， 无β-折叠和转角，为进一步研究开展牛分支杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。
摘 要：为了阐明牛分支杆菌侵入宿主细胞和在肺泡巨噬细胞长期存活的机理，进一步研究牛分支杆菌的致病机理，以牛分支杆菌的DNA为模板，通过PCR的方法扩增克隆牛分支杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4E(Mammalian cell-entry protein 4E，mce4 E)基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pET30a(+)并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的牛分支杆菌和人分支杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白mce4 E基因同源性为100%。将重组表达载体转入宿主菌BL21进行诱导表达,表达蛋白经SDS -PAGE分析和Western-blot免疫印迹鉴定,结果证明目的蛋白获得高效表达并以包涵体的形式存在, 表达量占菌体总量的53.3%，大小约为45kDa； 利用Ni-NTA琼脂糖柱对表达蛋白进行纯化，纯化率在95%以上；纯化的蛋白经过透析复性、圆二色谱(CD)测定，结果表明重组蛋白为典型的α螺旋型结构，经Jascow32软件分析计算，mce4E蛋白含有39.1%的α螺旋，60.9%的无规卷曲， 无β-折叠和转角，为进一步研究开展牛分支杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。
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