丙型肝炎病毒C区截短型基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达
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胡刚; 董晓慧; 薛小平; 楚雍烈; 尹文; 雷迎峰
丙型肝炎病毒(HCV);核心蛋白;基因表达;大肠杆菌
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胡刚; 董晓慧; 薛小平; 楚雍烈; 尹文; 雷迎峰
西安交通大学医学院微生物学教研室; 第四军医大学微生物教研室肝炎病毒研究组; 西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安; 陕西西安
【关键词】
丙型肝炎病毒(HCV); 核心蛋白; 基因表达; 大肠杆菌
【发表年期页】
2005,4; 320-322,326
【摘要】
目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1-Ct,转化HB101宿主菌,通过温度诱导表达截短型C蛋白。结果扩增得到目的基因长度为462bp,构建pBVIL1-Ct表达载体,在HB101宿主菌中通过温度诱导获得稳定表达,表达蛋白占菌体总蛋白含量的24%。Western-Blot及ELISA检测证实表达产物可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应。结论羧基端部分缺失的HCV C区基因片段可在大肠杆菌中稳定表达并具有良好的反应原性。
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