穴位埋药线对癫痫持续状态后神经细胞凋亡的抑制作用
穴位埋药线,,癫痫持续状态,穴位疗法；神经元；基因，cjun；基因，bcl2；,疾病模型，动物；大鼠,1材料与方法,2结果,讨论,参考文献：
摘要：【目的】探讨穴位埋药线法抑制癫痫持续状态(SE)后大鼠海马神经元凋亡的基因水平机制。【方法】以腹腔注射青霉素诱导大鼠SE，采用免疫组织化学法检测SE后大鼠海马神经元凋亡相关基因cjun、bcl2的表达。【结果】青霉素致SE后24h，穴位埋药线组、苯妥英钠组和常规针刺组与模型组比较，cjun表达降低，bcl2表达升高，两者分别与细胞凋亡指数(AI)呈正、负相关，其中以穴位埋药线组与模型组差异最为显著。【结论】提示穴位埋药线疗法可能通过抑制cjun、促进bcl2蛋白表达，阻止SE后大鼠海马神经元凋亡的发生发展，从而起治疗癫痫的作用。关键词：癫痫持续状态/穴位疗法；神经元；基因，cjun；基因，bcl2； 疾病模型，动物；大鼠
癫痫反复发作引起的神经细胞死亡有死亡和凋亡两种形式。细胞凋亡是涉及一系列基因的激活、表达以及调控的过程[1]。与癫痫发作后细胞凋亡密切相关的基因有即早基因cjun、癌基因bcl2等。本研究主要通过检测SE后大鼠海马神经元凋亡相关基因cjun、bcl2的表达，探讨穴位埋药线疗法抑制SE后大鼠海马神经元凋亡的基因水平机制。
1 材料与方法
11 主要试剂与器材
苯妥英钠片剂，100mg/片，批号：020432；青霉素针剂，40万U/支，批号：U0205002，均为华北制药厂生产。细胞凋亡原位末端标记(Tunel法)检测试剂盒，批号90161220；cjun一抗，批号：2870702；bcl2一抗，批号：01261130；链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶(SP)试剂盒，批号：030408；联苯二胺(DAB)显色试剂，批号：20973559，以上试剂均购自北京中山生物技术有限公司。常规针刺组根据实验大鼠体型以美容针代替成人用针灸针进行操作。
12 动物分组与造模
健康纯系雄性SD大鼠40只，体重160～180g，由广州中山大学北校区实验动物中心提供(粤检证字2002A075)，随机分成空白组、模型组、苯妥英钠组、常规针刺组、穴位埋药线组，每组8只。除空白组外，其他4组动物以青毒素400万U/kg腹腔注射，复制癫痫持续状态(SE)模型[2-3]；空白组腹腔注射与模型组同等剂量的1539mmol/L温生理盐水。
模型评价：以大鼠出现行为和皮质脑电图改变视为造模成功。
①行为改变：大鼠的癫痫发作按Racine法[4]分为5级：Ⅰ级为口角和面部抽动；Ⅱ级为Ⅰ级+点头；Ⅲ级为Ⅱ级+前肢阵挛；Ⅳ级为Ⅲ级+后腿站立；Ⅴ级为Ⅳ级+跌倒 ......
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