法测定小青龙颗粒中芍药苷的含量
摘 要 目的：建立小青龙颗粒中芍药苷含量的测定方法。方法：采用RP-HPLC法测定芍药苷的含量，C18柱；流动相：ψ(乙腈∶0.1%磷酸)=15∶85；检测波长：230 nm。结果：该方法的线性范围：ρ=0.101～1.608 μg/mL(r=0.9997,n=5)；平均加样回收率：99.41% (RSD：0.98%，n=9)。结论：本方法简便，准确，灵敏度高，重现性好，可作为该制剂的质量控制方法之一。
关键词 RP-HPLC；小青龙颗粒；芍药苷；含量测定
Determination of paeoniflorin in Xiaoqinglong granules by RP-HPLC
SUN Suzhen,SUN Shuzhou
(Guangzhou Jiahe Parmaceatical Co.LTD,Guangzhou,Guangdong 510507)
Abstract Objective：To develop an assay for paeoniflorin in Xiaoqinglong Granules。Method：The determination of paeoniflorin was performed by RP-HPLC using C18 column with ψ(acetonitrile ∶0.1% H3PO4) =15∶85 as a mobile phase and detection wavelength at 230nm. Results: The linear range was 0.101～1.608 μg/mL (r=0.9997,n=5); The average recovery of the added sample was 99.41% ( RSD was 0.98%,n=9). Conclusion: The methods are simple,accurate,highly sensitive and reproducible.It can be used as one of method for quality control of this Granules.
Key words RP-HPLC；Xiaoqinglong Granules；paeoniflorin；assay
小青龙颗粒是由麻黄、桂枝、白芍、干姜等八味中药经水提酒沉精制而成，具有解表化软、止咳平喘等功能，临床主要用于风寒水饮，恶寒发热，无汗，喘咳痰稀。经多年应用证明有较好的疗效。由于它是中药的复方制剂，成分较复杂，中国药典2000年版中该质量标准只进行定性检验，本文参考有关文献[1~3]，采用高效液相色谱法测定芍药苷的含量，以控制该制剂的内在质量。
1 仪器与试药
岛津LC-10Avp高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器；芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0736-200014)，小青龙颗粒(广州嘉禾药厂)，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 芍药苷对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品40.2 mg，置100 mL棕色量瓶中，用φ=50%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，备用。精密量取1.0 mL对照品贮备液，置10 mL量瓶中，加φ=50%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2 样品溶液和阴性对照品溶液的制备
取本品约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入φ=50%乙醇25 mL，置超声波超声30 min，密塞，放冷，称定重量，用φ=50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液为样品溶液。
另按小青龙颗粒处方和制法，依法制成缺白芍的阴性小青龙颗粒，并按样品溶液制备方法制备缺白芍的阴性对照品溶液。
2.3 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱(Diamonsil C18 250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流动相：ψ(乙腈∶0.1%磷酸溶液)=15∶85；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；理论板数按芍药苷峰计算应不少于1000。按以上条件分析样品，样品色谱图见图1。
2.4 线性关系考察
分别精密量取对照品贮备液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mL置于10 mL量瓶中，用φ=50%乙醇稀释至刻度，摇匀，制得浓度分别为10.1、20.1、40.2、80.4、160.8 μg/mL的溶液，并分别进样10 μL，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，计算回归方程得：Y=94358 ρ-5362，r=0.9997(n=5)，结果表明：芍药苷进样量在0.101～1.608 μg/mL范围内峰面积积分值与浓度呈良好的线性关系。
2.5 重复性试验
精密吸取上述对照品溶液10 μL，重复进样6次测得芍药苷峰面积的RSD为0.57%。
2.6 样品溶液的测定
分别精密吸取芍药苷对照品溶液及样品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件测定，根据芍药苷对照品的峰面积值，以外标法计算样品中芍药苷的含量。结果见表1。表1 芍药苷含量样品测定结果(略)
2.7 重现性试验
取同一批样品5份，依法平行测定5次，结果RSD为0.61%(n=5)。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一批供试液，每隔1 h进样1次，共进样6次，结果表明：供试品溶液在5 h内基本稳定，RSD为1.03%(n=6)。
2.9 回收率试验
精密称取已知含量的样品(批号：020601，ω=1396 mg/g)适量，共9份，分别精密加入对照品贮备液1.0、1.25、1.5 mL，挥干乙醇，依照上述样品溶液的制备方法制备，并按照上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表2。表2 加样回收率试验结果(略)
3 讨论
3.1 在对本品的RP-HPLC法研究时，试验多种不同配比的流动相系统，结果表明：ψ(乙腈∶0.1%磷酸)=15∶85作流动相较好。
3.2 本实验通过对阴性对照品和样品的比较，结果表明：本品的其他药材成分对芍药苷的含量测定无干扰。
3.3 在本实验所采用的色谱条件下，样品中被测成分的峰形、分离度、保留时间均令人满意，加样回收率也较理想。对称因子：1.04； 保留时间：14.12 min；分离度：2.8。
参考文献
[1]中国药典(2000年版一部)[S]：2000 .554 .
[2]张莉.高效液相色谱法测定麝香抗栓丸中芍药苷的含量[J] .沈阳药科大学学报，2002，19(1)：41.
[3]陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京：人民卫生出版社,1997.188
(广州嘉禾制药有限公司，广东 广州 510507), 百拇医药(孙素珍 孙树周)
关键词 RP-HPLC；小青龙颗粒；芍药苷；含量测定
Determination of paeoniflorin in Xiaoqinglong granules by RP-HPLC
SUN Suzhen,SUN Shuzhou
(Guangzhou Jiahe Parmaceatical Co.LTD,Guangzhou,Guangdong 510507)
Abstract Objective：To develop an assay for paeoniflorin in Xiaoqinglong Granules。Method：The determination of paeoniflorin was performed by RP-HPLC using C18 column with ψ(acetonitrile ∶0.1% H3PO4) =15∶85 as a mobile phase and detection wavelength at 230nm. Results: The linear range was 0.101～1.608 μg/mL (r=0.9997,n=5); The average recovery of the added sample was 99.41% ( RSD was 0.98%,n=9). Conclusion: The methods are simple,accurate,highly sensitive and reproducible.It can be used as one of method for quality control of this Granules.
Key words RP-HPLC；Xiaoqinglong Granules；paeoniflorin；assay
小青龙颗粒是由麻黄、桂枝、白芍、干姜等八味中药经水提酒沉精制而成，具有解表化软、止咳平喘等功能，临床主要用于风寒水饮，恶寒发热，无汗，喘咳痰稀。经多年应用证明有较好的疗效。由于它是中药的复方制剂，成分较复杂，中国药典2000年版中该质量标准只进行定性检验，本文参考有关文献[1~3]，采用高效液相色谱法测定芍药苷的含量，以控制该制剂的内在质量。
1 仪器与试药
岛津LC-10Avp高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器；芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0736-200014)，小青龙颗粒(广州嘉禾药厂)，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 芍药苷对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品40.2 mg，置100 mL棕色量瓶中，用φ=50%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，备用。精密量取1.0 mL对照品贮备液，置10 mL量瓶中，加φ=50%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2 样品溶液和阴性对照品溶液的制备
取本品约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入φ=50%乙醇25 mL，置超声波超声30 min，密塞，放冷，称定重量，用φ=50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液为样品溶液。
另按小青龙颗粒处方和制法，依法制成缺白芍的阴性小青龙颗粒，并按样品溶液制备方法制备缺白芍的阴性对照品溶液。
2.3 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱(Diamonsil C18 250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流动相：ψ(乙腈∶0.1%磷酸溶液)=15∶85；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；理论板数按芍药苷峰计算应不少于1000。按以上条件分析样品，样品色谱图见图1。
2.4 线性关系考察
分别精密量取对照品贮备液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mL置于10 mL量瓶中，用φ=50%乙醇稀释至刻度，摇匀，制得浓度分别为10.1、20.1、40.2、80.4、160.8 μg/mL的溶液，并分别进样10 μL，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，计算回归方程得：Y=94358 ρ-5362，r=0.9997(n=5)，结果表明：芍药苷进样量在0.101～1.608 μg/mL范围内峰面积积分值与浓度呈良好的线性关系。
2.5 重复性试验
精密吸取上述对照品溶液10 μL，重复进样6次测得芍药苷峰面积的RSD为0.57%。
2.6 样品溶液的测定
分别精密吸取芍药苷对照品溶液及样品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件测定，根据芍药苷对照品的峰面积值，以外标法计算样品中芍药苷的含量。结果见表1。表1 芍药苷含量样品测定结果(略)
2.7 重现性试验
取同一批样品5份，依法平行测定5次，结果RSD为0.61%(n=5)。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一批供试液，每隔1 h进样1次，共进样6次，结果表明：供试品溶液在5 h内基本稳定，RSD为1.03%(n=6)。
2.9 回收率试验
精密称取已知含量的样品(批号：020601，ω=1396 mg/g)适量，共9份，分别精密加入对照品贮备液1.0、1.25、1.5 mL，挥干乙醇，依照上述样品溶液的制备方法制备，并按照上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表2。表2 加样回收率试验结果(略)
3 讨论
3.1 在对本品的RP-HPLC法研究时，试验多种不同配比的流动相系统，结果表明：ψ(乙腈∶0.1%磷酸)=15∶85作流动相较好。
3.2 本实验通过对阴性对照品和样品的比较，结果表明：本品的其他药材成分对芍药苷的含量测定无干扰。
3.3 在本实验所采用的色谱条件下，样品中被测成分的峰形、分离度、保留时间均令人满意，加样回收率也较理想。对称因子：1.04； 保留时间：14.12 min；分离度：2.8。
参考文献
[1]中国药典(2000年版一部)[S]：2000 .554 .
[2]张莉.高效液相色谱法测定麝香抗栓丸中芍药苷的含量[J] .沈阳药科大学学报，2002，19(1)：41.
[3]陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京：人民卫生出版社,1997.188
(广州嘉禾制药有限公司，广东 广州 510507), 百拇医药(孙素珍 孙树周)