甲基毒死蜱乳油的急性毒性研究
摘 要 目的：研究40%甲基毒死蜱乳油的急性毒性作用，为其中毒防治提供依据。 方法：参照GB15670-1995及卫生毒理学急性毒性试验方法。结果：该农药急性经口LD50：雌性大鼠为5620 mg/kg，雄性大鼠为3160 mg/kg；急性经皮LD50>2150 mg/kg；皮肤刺激强度平均分值为1.3；眼刺激积分指数(I.A.O.I)最高数为34，眼刺激的平均指数(M.I.O.I)7 d后为3.3。 结论：40%甲基毒死蜱乳油急性经口、经皮毒性均属于低毒级；急性皮肤刺激属于轻度刺激性；对眼属于中度刺激性。
关键词 甲基毒死蜱;急性毒性
甲基毒死蜱(chlorpyrifosmethyl，CME)属于有机磷农药。其纯品及较高浓度(>90%)制剂的一般毒性和致突、致畸、对生育繁殖的影响已有报道[1]，但其较低浓度的毒性尚未见报道。而实际应用中多为其较低浓度的制剂。本文研究了40%甲基毒死蜱乳油的急性毒性，为其中毒防治提供依据。
1 材料及方法
1.1 材料 受试农药：40%CME乳油，某农药厂提供。试验动物：SD大鼠(粤检证字第2000A026号)、新西兰纯种白兔(粤检证字第2000A027号)，均由广东省卫生厅医学实验动物中心提供。
1.2 方法 参照GB15670-1995及卫生毒理学急性毒性试验的常规方法进行。
1.2.1 急性经口毒性试验 健康SD大鼠40只，体重180~220 g，随机分5组，每组8只，雌雄各半。灌胃前动物禁食约12 h，自由饮水。分别以1000、2150、4640、10000、215000 mg/kg体重剂量灌胃。观察动物14 d，记录中毒症状及死亡情况。用霍恩氏法统计实验结果。
1.2.2 急性经皮毒性试验 健康SD大鼠，体重180~220 g，随机分组，每组10只，雌雄各半。试验前用电剪剪去大鼠背毛，面积约6 cm×6 cm，观察24 h后，选择皮肤无损者供试。给药4 h后用清水洗去受试物，连续观察14 d，记录中毒症状及死亡情况。按霍恩氏法统计试验结果。
1.2.3 急性皮肤刺激试验 以新西兰纯种白兔4只，雌雄各半，体重2.2～2.6 kg，试验前24 h用电剪剪去动物背毛，面积约6 cm×6 cm，染毒前确认皮肤无损后取0.5 mL受试物均匀涂布于动物一侧脱毛区中约2.5 cm×2.5 cm皮肤上，用四层油纸遮盖，并以无刺激胶布固定。另一侧为正常对照区。涂药4 h后去除受试物并用温水洗干净，分别于去除受试物后1、24、48、72 h观察受试区的皮肤反应。
1.2.4 眼刺激试验 新西兰白兔4只，雌雄各半，体重2.2～2.6 kg，试验前检验动物左右眼均正常，以一眼为试验眼。取0.1 mL受试物滴入结膜囊内，给药后1、24、48、72 h分别检查眼睛，第4 d和第7 d观察恢复情况。用荧光素钠滴在角膜上，再用蒸馏水冲洗，观察是否有角膜损害情况。以对侧眼为对照眼，方法同上。按GB15670-1995判断刺激强度。
2 结果
2.1 急性经口毒性试验 灌胃后约10 min，4640、10000、215000 mg/kg体重剂量组动物出现流涎，突眼，约1 h出现四肢乏力，2 h出现抽搐等症状，动物死亡多发生在灌胃后24 h至3 d内。此后存活动物症状逐渐缓解，约1周左右恢复正常。各剂量组死亡情况见表1。
用霍恩氏法统计得40%CME对大鼠急性经口LD50：雌性大鼠为5620 mg/kg，其95%可信区间为3830～8250 mg/kg；雄性大鼠LD50为3160 mg/kg，其95%可信限未能求出。根据GB15670-1995，40%CME急性经口毒性属于低毒级。
2.2 急性经皮毒性试验 经皮染毒后，各组动物未出现明显中毒症状，涂皮剂量达2150 mg/kg时，14 d试验期内无动物死亡。故40%CME急性经皮LD50雌雄大鼠均大于2150 mg/kg，根据GB15670-1995，40%CME急性经皮毒性属于低毒级。
表1 40%甲基毒死蜱乳油急性经口毒性试验结果 略
2.3 急性皮肤刺激试验 去除受试物1 h后部分动物出现红斑、未见水肿，皮肤刺激强度平均分值为1.3；对照区皮肤未见红斑和水肿，积分为0。具体结果见表2。根据GB15670-1995，40%CME对皮肤属于轻度刺激性。
表2 40%甲基毒死蜱乳油急性皮肤刺激试验结果 略
2.4 眼刺激试验 给受试物1 h后，家兔受试眼结膜可见少量充血、水肿和少量分泌物。24 h后全部动物角膜都有损伤，部分动物虹膜有损伤，结果见表3。急性眼刺激积分指数(I.A.O.I)最高数为34；眼刺激的平均指数(M.I.O.I)4 d后为11，7 d后为3.3，对照眼未见刺激反应，积分均为0。根据GB15670-1995，40%CME对眼属中度刺激性。
3 讨论
CME是一种有机磷杀虫杀螨剂[2，3]，具有触杀、胃毒和熏蒸作用，因其具有高效、广谱、对高等动物低毒、低残留等特点而被广泛应用。在本研究中，40%CME对雌性大鼠急性经口LD50为562 0 mg/kg，对雄性大鼠LD50为3160 mg/kg，求得其急性经口LD50较低，在较大剂量灌胃后才出现以有机磷中毒为主的症状，但其经胃肠道吸收较慢，吸收率较低，24 h至3 d内试验动物才出现死亡，存活动物症状缓解时间亦较长，约4～7 d 。资料表明[5]，CME经消化道吸收其半衰期为13.2 min，吸收率为17%，肝细胞的可溶性胞浆和微粒体是主要代谢转化场所。在哺乳动物中，肝微粒体酶对农药等外来化合物的代谢解毒起重要作用，CME在大鼠体内可抑制肝微粒体酶如NADPH-细胞色素C还原酶，使其在体内蓄积，同时可诱导肝微粒体谷胱甘肽转移酶，促进CME在体内的代谢转化而减毒[6]。此外，胃酸亦可能影响CME的稳定性，而使其毒性降低。这些因素可能是造成CME对人畜毒性比较低的原因。
表3 40%甲基毒死蜱乳油眼刺激反应积分表 略1
本研究结果表明，样品的急性经口毒性雄性大于雌性，与原药纯品的急性经口毒性结果相反，这可能是样品的溶剂改变了其毒性，亦可能是工业品中的某些杂质改变了其毒性，尚需进一步的研究，而对雄性毒性高于雌性的原因，可能是由于不同性别大鼠的肝微粒体酶活性不同所致，有资料报道[6]，在体外试验表明CME对雄性大鼠肝微粒体谷胱甘肽转移酶有直接抑制作用；也可能是雌雄动物在生理、生化方面的差异所造成。这提示不同人群对有毒化学物质的危害的敏感性可能存在差异，其机制还有待进一步研究。在实践应用过程中，应充分注意其对不同人群的影响。
CME脂溶性差，经皮肤吸收较慢[7]，本研究中，经皮染毒大鼠未出现明显症状，属于低毒性。在眼试验中，可以观察到CME主要引起角膜和结膜的损伤。个别兔眼损伤较严重，可能是个体差异的原因。但CME所致眼损伤均可在7 d左右逐渐恢复。结果表明，CME对眼有中度刺激性。CME人畜中毒报道尚少，当不慎发生急性中毒时，应立即终止接触毒物，消除进入人体内已被吸收或尚未吸收的毒物，脱去污染衣物，用肥皂水清洗污染皮肤，口服中毒者用2%~5%碳酸氢钠溶液反复洗胃[8]，然后再给硫酸钠导泻，并用阿托品等解毒药物对症治疗。因为该农药对皮肤和眼有刺激性，故在施药时，应特别注意做好皮肤和眼的保护措施，佩带有效的防护工具，对不慎接触农药的皮肤和眼立即用大量清水冲洗后再对症处理。
参考文献
[1] 宋瑞琨,李龙,赖志伟,等.甲基毒死蜱毒理学研究[J].同济医科大学学报,1992,21(增刊):17.
[2] 林郁.农药应用大全[M].北京:中国农业出版社,1989.187
[3] 中国农药部农药检定所.农药使用电子手册[M].1998267.
[4] 王强,韩丽娟,黄祥麟,等.毒死蜱和甲基毒死蜱防治稻纵卷叶螟[J].农药,1995,34(2):31
[5] 李龙,周正敏,宋瑞琨,等.甲基毒死蜱在大鼠体内的毒物代谢动力学[J].中国药理学与毒理学杂志,1995,9(1):57
[6] 石年,赖志伟,胡汉生,等.甲基毒死蜱对大鼠肝微粒体的影响[J].同济医科大学学报,1994,23(6):466-467
[7] 朱子扬,龚国庆,汪国良.中毒急救手册[M].第二版.上海:上海科学技术出版社,1999.895
[8] 孙立平.杀虫剂中毒与救治[J].中国媒介生物学及控制杂志,2000,11(6):473.
(1.广东药学院毒理学教研室，广东广州 510224； 2.广东省职业病防治院毒理科), 百拇医药(安社娟 陈秉 钟海盛 梁丽燕 越飞)
关键词 甲基毒死蜱;急性毒性
甲基毒死蜱(chlorpyrifosmethyl，CME)属于有机磷农药。其纯品及较高浓度(>90%)制剂的一般毒性和致突、致畸、对生育繁殖的影响已有报道[1]，但其较低浓度的毒性尚未见报道。而实际应用中多为其较低浓度的制剂。本文研究了40%甲基毒死蜱乳油的急性毒性，为其中毒防治提供依据。
1 材料及方法
1.1 材料 受试农药：40%CME乳油，某农药厂提供。试验动物：SD大鼠(粤检证字第2000A026号)、新西兰纯种白兔(粤检证字第2000A027号)，均由广东省卫生厅医学实验动物中心提供。
1.2 方法 参照GB15670-1995及卫生毒理学急性毒性试验的常规方法进行。
1.2.1 急性经口毒性试验 健康SD大鼠40只，体重180~220 g，随机分5组，每组8只，雌雄各半。灌胃前动物禁食约12 h，自由饮水。分别以1000、2150、4640、10000、215000 mg/kg体重剂量灌胃。观察动物14 d，记录中毒症状及死亡情况。用霍恩氏法统计实验结果。
1.2.2 急性经皮毒性试验 健康SD大鼠，体重180~220 g，随机分组，每组10只，雌雄各半。试验前用电剪剪去大鼠背毛，面积约6 cm×6 cm，观察24 h后，选择皮肤无损者供试。给药4 h后用清水洗去受试物，连续观察14 d，记录中毒症状及死亡情况。按霍恩氏法统计试验结果。
1.2.3 急性皮肤刺激试验 以新西兰纯种白兔4只，雌雄各半，体重2.2～2.6 kg，试验前24 h用电剪剪去动物背毛，面积约6 cm×6 cm，染毒前确认皮肤无损后取0.5 mL受试物均匀涂布于动物一侧脱毛区中约2.5 cm×2.5 cm皮肤上，用四层油纸遮盖，并以无刺激胶布固定。另一侧为正常对照区。涂药4 h后去除受试物并用温水洗干净，分别于去除受试物后1、24、48、72 h观察受试区的皮肤反应。
1.2.4 眼刺激试验 新西兰白兔4只，雌雄各半，体重2.2～2.6 kg，试验前检验动物左右眼均正常，以一眼为试验眼。取0.1 mL受试物滴入结膜囊内，给药后1、24、48、72 h分别检查眼睛，第4 d和第7 d观察恢复情况。用荧光素钠滴在角膜上，再用蒸馏水冲洗，观察是否有角膜损害情况。以对侧眼为对照眼，方法同上。按GB15670-1995判断刺激强度。
2 结果
2.1 急性经口毒性试验 灌胃后约10 min，4640、10000、215000 mg/kg体重剂量组动物出现流涎，突眼，约1 h出现四肢乏力，2 h出现抽搐等症状，动物死亡多发生在灌胃后24 h至3 d内。此后存活动物症状逐渐缓解，约1周左右恢复正常。各剂量组死亡情况见表1。
用霍恩氏法统计得40%CME对大鼠急性经口LD50：雌性大鼠为5620 mg/kg，其95%可信区间为3830～8250 mg/kg；雄性大鼠LD50为3160 mg/kg，其95%可信限未能求出。根据GB15670-1995，40%CME急性经口毒性属于低毒级。
2.2 急性经皮毒性试验 经皮染毒后，各组动物未出现明显中毒症状，涂皮剂量达2150 mg/kg时，14 d试验期内无动物死亡。故40%CME急性经皮LD50雌雄大鼠均大于2150 mg/kg，根据GB15670-1995，40%CME急性经皮毒性属于低毒级。
表1 40%甲基毒死蜱乳油急性经口毒性试验结果 略
2.3 急性皮肤刺激试验 去除受试物1 h后部分动物出现红斑、未见水肿，皮肤刺激强度平均分值为1.3；对照区皮肤未见红斑和水肿，积分为0。具体结果见表2。根据GB15670-1995，40%CME对皮肤属于轻度刺激性。
表2 40%甲基毒死蜱乳油急性皮肤刺激试验结果 略
2.4 眼刺激试验 给受试物1 h后，家兔受试眼结膜可见少量充血、水肿和少量分泌物。24 h后全部动物角膜都有损伤，部分动物虹膜有损伤，结果见表3。急性眼刺激积分指数(I.A.O.I)最高数为34；眼刺激的平均指数(M.I.O.I)4 d后为11，7 d后为3.3，对照眼未见刺激反应，积分均为0。根据GB15670-1995，40%CME对眼属中度刺激性。
3 讨论
CME是一种有机磷杀虫杀螨剂[2，3]，具有触杀、胃毒和熏蒸作用，因其具有高效、广谱、对高等动物低毒、低残留等特点而被广泛应用。在本研究中，40%CME对雌性大鼠急性经口LD50为562 0 mg/kg，对雄性大鼠LD50为3160 mg/kg，求得其急性经口LD50较低，在较大剂量灌胃后才出现以有机磷中毒为主的症状，但其经胃肠道吸收较慢，吸收率较低，24 h至3 d内试验动物才出现死亡，存活动物症状缓解时间亦较长，约4～7 d 。资料表明[5]，CME经消化道吸收其半衰期为13.2 min，吸收率为17%，肝细胞的可溶性胞浆和微粒体是主要代谢转化场所。在哺乳动物中，肝微粒体酶对农药等外来化合物的代谢解毒起重要作用，CME在大鼠体内可抑制肝微粒体酶如NADPH-细胞色素C还原酶，使其在体内蓄积，同时可诱导肝微粒体谷胱甘肽转移酶，促进CME在体内的代谢转化而减毒[6]。此外，胃酸亦可能影响CME的稳定性，而使其毒性降低。这些因素可能是造成CME对人畜毒性比较低的原因。
表3 40%甲基毒死蜱乳油眼刺激反应积分表 略1
本研究结果表明，样品的急性经口毒性雄性大于雌性，与原药纯品的急性经口毒性结果相反，这可能是样品的溶剂改变了其毒性，亦可能是工业品中的某些杂质改变了其毒性，尚需进一步的研究，而对雄性毒性高于雌性的原因，可能是由于不同性别大鼠的肝微粒体酶活性不同所致，有资料报道[6]，在体外试验表明CME对雄性大鼠肝微粒体谷胱甘肽转移酶有直接抑制作用；也可能是雌雄动物在生理、生化方面的差异所造成。这提示不同人群对有毒化学物质的危害的敏感性可能存在差异，其机制还有待进一步研究。在实践应用过程中，应充分注意其对不同人群的影响。
CME脂溶性差，经皮肤吸收较慢[7]，本研究中，经皮染毒大鼠未出现明显症状，属于低毒性。在眼试验中，可以观察到CME主要引起角膜和结膜的损伤。个别兔眼损伤较严重，可能是个体差异的原因。但CME所致眼损伤均可在7 d左右逐渐恢复。结果表明，CME对眼有中度刺激性。CME人畜中毒报道尚少，当不慎发生急性中毒时，应立即终止接触毒物，消除进入人体内已被吸收或尚未吸收的毒物，脱去污染衣物，用肥皂水清洗污染皮肤，口服中毒者用2%~5%碳酸氢钠溶液反复洗胃[8]，然后再给硫酸钠导泻，并用阿托品等解毒药物对症治疗。因为该农药对皮肤和眼有刺激性，故在施药时，应特别注意做好皮肤和眼的保护措施，佩带有效的防护工具，对不慎接触农药的皮肤和眼立即用大量清水冲洗后再对症处理。
参考文献
[1] 宋瑞琨,李龙,赖志伟,等.甲基毒死蜱毒理学研究[J].同济医科大学学报,1992,21(增刊):17.
[2] 林郁.农药应用大全[M].北京:中国农业出版社,1989.187
[3] 中国农药部农药检定所.农药使用电子手册[M].1998267.
[4] 王强,韩丽娟,黄祥麟,等.毒死蜱和甲基毒死蜱防治稻纵卷叶螟[J].农药,1995,34(2):31
[5] 李龙,周正敏,宋瑞琨,等.甲基毒死蜱在大鼠体内的毒物代谢动力学[J].中国药理学与毒理学杂志,1995,9(1):57
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[7] 朱子扬,龚国庆,汪国良.中毒急救手册[M].第二版.上海:上海科学技术出版社,1999.895
[8] 孙立平.杀虫剂中毒与救治[J].中国媒介生物学及控制杂志,2000,11(6):473.
(1.广东药学院毒理学教研室，广东广州 510224； 2.广东省职业病防治院毒理科), 百拇医药(安社娟 陈秉 钟海盛 梁丽燕 越飞)