高效液相色谱法测定复方百部止咳冲剂中的黄芩苷含量
摘要：目的建立用高效液相色谱法测定复方百部止咳冲剂中黄芩苷含量的方法。方法色谱柱为Shim-Pack VP-ODS;流动为甲醇水乙腈(47∶53∶0.5)；流速1.0 ml/min；检测波长278 nm；柱温(40.0±2)℃。结果黄芩苷进样量在0.25~1.25 μg范围内有良好的线性关系，回归方程为Y=3.262×106X+1.956×105，r=0.999 8(n=5)，平均回收率为99.42%，RSD=0.7%(n=5)。结论该检测方法简便准确，可用于复方百部止咳冲剂的质量控制。
关键词：复方百部止咳冲剂； 黄芩苷； 高效液相色谱法
Determination of Baicalin in Co.Baibu Antitussive Granules by HPLC
LAN Mingsheng, DENG Rijian, JIANG Li
(Pharmaceutical Factory of Guangxi Botanic Garden of Medicinal Plants, Nanning, Guangxi 530000, China)
Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of Baicalin in Co.Baibu Antitussive Granules by HPLC.MethodsThe column Diamomul C18 was used, the mobile phase consisted of methamol, water and acetonitrile (47∶53∶0.5), flow rate was 1.0 ml/min, the wavelength was at 278 nm.ResultsThe linear range was within 0.25 to 1.25 μg, the average recovery was 99.42%, and RSD was 0.7%(n=5).ConclusionThis assay method was simple and accurate.
Key words：Co.Baibu Antitussive Granules; Baicalin; HPLC
复方百部止咳冲剂是我国医药学工作者在总结前人临床用药经验的基础上，结合现代医药学技术开发出的止咳产品，由于疗效确切，服用安全深得广大患者欢迎，被《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第3册收载。该产品由百部(蜜炙)、苦杏仁、桔梗、桑白皮、黄芩、天南星(制)、陈皮、枳壳(炒)、麦冬、知母、甘草等中药制成。由于该产品的质量标准比较简单，没有定量测定产品成分的控制指标。因此，笔者对该产品的主要有效成分黄芩苷的含量测定方法进行了研究。笔者参照文献[1]，采用HPLC法对复方百部止咳冲剂中黄芩苷的含量进行了测定，该方法具有准确度高、分离效果好、灵敏度高、专属性强等优点，可作为复方百部止咳冲剂质量控制的一个参考方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器日本岛津公司高效液相色谱仪：LC10ATVP型高效液相泵，SPD10AVP型紫外检测器，7725i型手动进样器，微量进样器(25μl)，GR202型电子天平，B2200S型超声波仪。
1.2 试药黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110715200212)；双重蒸馏水，甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，其他试剂均为分析纯，复方百部止咳冲剂(广西××药业有限责任公司，批号040826，041023，050128，050415)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为ShimPack VPODS；流动相为甲醇水乙腈(47∶53∶0.5)；流速1.0 ml/min；检测波长278 nm，柱温(40±2)℃；灵敏度0.04AUFE，进样量20 μl。
2.2 实验溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥至恒重的黄芩苷对照品12.500 mg，置于100 ml容量瓶中加50%甲醇溶解至刻度，得对照品储备液。
2.2.2 供试样液的制备本品(批号：050128)颗粒研细，取约5 g，精密称定，分别置100 ml锥形瓶中，分别加适量(约60 ml 50%甲醇)，超声提取30 min，放冷加50%甲醇到刻度，摇匀后滤纸滤过，收集续滤液约10 ml，微孔滤膜(0.45 μm)过滤，滤液备用。
2.2.3 阴性样液的制备按法定标准处方和制法制备不含黄芩药材的产品100 g，取少量研细，取约5 g，精密称定，按2.2.2法制备样液。
2.3 检测波长的选择及专属性的测定取对照溶液(125 μg/ml)在200~500 nm范围内扫描，由图谱可见黄芩苷在278 nm波长处有最大吸收，故以278 nm为检测波长。
取阴性样液、供试样液和黄芩苷对照品溶液，在上述色谱条件下进样20 μl，测绘HPLC图谱。结果见图1~3。由图1可知阴性样品对黄芩苷的测定无干扰，而且黄芩苷与其他组分可达到基线分离。
2.4 标准曲线的制备分别精密吸取黄芩苷对照品贮备液(125 μg /ml)1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，置10 ml量瓶中，用50%甲醇溶液定容至刻度，摇匀，进样20 μl，按上述色谱条件测定黄芩苷的峰面积，经计算以黄芩苷进样量与峰面积之间的线性回归方程为Y=3.262×106X+1.956×105，相关系数为r=0.999 8(n=5)。结果表明：黄芩苷进样量在0.25至1.25μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度实验取供试样液(见2.2.2项)，按前述色谱条件，连续测定5次，进样20 μl/次，依法测定峰面积，结果RSD=1.34%，表明本方法精密度高。
2.6 稳定性实验取供试样液(见2.2.2项)，分别于0，1，3，6，12，24，48 h测定峰面积，结果RSD=1.70%，表明供试品在48 h内测定结果稳定，故供试品溶液在48 h之内稳定性较好。
2.7 重现性实验取同批(批号050128)样品5份，按2.2.2法制备供试样液，按2.1条件进行分析，进样20 μl/次，依法测定峰面积，计算含量，结果重现性良好，RSD为1.60%。
2.8 样品测定取4个批号的样品，分别按供试样液的方法制备供试样液，进样20 μl/次，依法测定峰面积，按外标峰面积法测定黄芩苷的含量。结果见表1。表1 样品含量测定结果(略)
2.9 回收率实实验精密称取重现性试验项下的样品(已研细，黄芩苷含量为3.080 mg/g)10 g，置100 ml锥形瓶中，加适量(约60 ml 50%甲醇)，超声提取30 min，放冷，用50%甲醇加至刻度，滤过，精密吸取续滤液5 ml共5份置于100 ml容量瓶中，分别精确加入不同量的黄芩苷对照品，使其充分溶解，加入50%甲醇到刻度。摇匀后用微孔滤膜(0.45 μm)过滤，滤液各取20μl进样，依法测定峰面积，计算黄芩苷的含量。结果见表2。结果表明：该方法有良好的回收率。表2 加样回收实验结果序(略)
3 讨论
复方百部止咳冲剂是市场流通比较广的止咳药，目前由于没有含量测定的指标，不利于控制产品的质量，在成品的考察中未能准确地反映产品的内在质量，进而降低了产品的质量水平。因此，制定本产品的含量测定标准已成了刻不容缓的工作。笔者采用的高效液相测定方法准确度高、分离效果好、灵敏度高、专属性强、稳定性和重现性都比较理想，可作为本产品理想的含量测定方法。
参考文献：
[1]中华人民共和国第八届药典编纂委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2004：343.
(广西药用植物园制药厂，广西 南宁 530000)
作者简介：蓝鸣生(1957)，男(壮族)，广西宜州人，现任广西药用植物园制药厂主管药师，硕士学位，主要从事药剂学和中药化学研究工作., http://www.100md.com(蓝鸣生， 邓日建 ， 蒋莉)
关键词：复方百部止咳冲剂； 黄芩苷； 高效液相色谱法
Determination of Baicalin in Co.Baibu Antitussive Granules by HPLC
LAN Mingsheng, DENG Rijian, JIANG Li
(Pharmaceutical Factory of Guangxi Botanic Garden of Medicinal Plants, Nanning, Guangxi 530000, China)
Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of Baicalin in Co.Baibu Antitussive Granules by HPLC.MethodsThe column Diamomul C18 was used, the mobile phase consisted of methamol, water and acetonitrile (47∶53∶0.5), flow rate was 1.0 ml/min, the wavelength was at 278 nm.ResultsThe linear range was within 0.25 to 1.25 μg, the average recovery was 99.42%, and RSD was 0.7%(n=5).ConclusionThis assay method was simple and accurate.
Key words：Co.Baibu Antitussive Granules; Baicalin; HPLC
复方百部止咳冲剂是我国医药学工作者在总结前人临床用药经验的基础上，结合现代医药学技术开发出的止咳产品，由于疗效确切，服用安全深得广大患者欢迎，被《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第3册收载。该产品由百部(蜜炙)、苦杏仁、桔梗、桑白皮、黄芩、天南星(制)、陈皮、枳壳(炒)、麦冬、知母、甘草等中药制成。由于该产品的质量标准比较简单，没有定量测定产品成分的控制指标。因此，笔者对该产品的主要有效成分黄芩苷的含量测定方法进行了研究。笔者参照文献[1]，采用HPLC法对复方百部止咳冲剂中黄芩苷的含量进行了测定，该方法具有准确度高、分离效果好、灵敏度高、专属性强等优点，可作为复方百部止咳冲剂质量控制的一个参考方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器日本岛津公司高效液相色谱仪：LC10ATVP型高效液相泵，SPD10AVP型紫外检测器，7725i型手动进样器，微量进样器(25μl)，GR202型电子天平，B2200S型超声波仪。
1.2 试药黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110715200212)；双重蒸馏水，甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，其他试剂均为分析纯，复方百部止咳冲剂(广西××药业有限责任公司，批号040826，041023，050128，050415)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为ShimPack VPODS；流动相为甲醇水乙腈(47∶53∶0.5)；流速1.0 ml/min；检测波长278 nm，柱温(40±2)℃；灵敏度0.04AUFE，进样量20 μl。
2.2 实验溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥至恒重的黄芩苷对照品12.500 mg，置于100 ml容量瓶中加50%甲醇溶解至刻度，得对照品储备液。
2.2.2 供试样液的制备本品(批号：050128)颗粒研细，取约5 g，精密称定，分别置100 ml锥形瓶中，分别加适量(约60 ml 50%甲醇)，超声提取30 min，放冷加50%甲醇到刻度，摇匀后滤纸滤过，收集续滤液约10 ml，微孔滤膜(0.45 μm)过滤，滤液备用。
2.2.3 阴性样液的制备按法定标准处方和制法制备不含黄芩药材的产品100 g，取少量研细，取约5 g，精密称定，按2.2.2法制备样液。
2.3 检测波长的选择及专属性的测定取对照溶液(125 μg/ml)在200~500 nm范围内扫描，由图谱可见黄芩苷在278 nm波长处有最大吸收，故以278 nm为检测波长。
取阴性样液、供试样液和黄芩苷对照品溶液，在上述色谱条件下进样20 μl，测绘HPLC图谱。结果见图1~3。由图1可知阴性样品对黄芩苷的测定无干扰，而且黄芩苷与其他组分可达到基线分离。
2.4 标准曲线的制备分别精密吸取黄芩苷对照品贮备液(125 μg /ml)1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，置10 ml量瓶中，用50%甲醇溶液定容至刻度，摇匀，进样20 μl，按上述色谱条件测定黄芩苷的峰面积，经计算以黄芩苷进样量与峰面积之间的线性回归方程为Y=3.262×106X+1.956×105，相关系数为r=0.999 8(n=5)。结果表明：黄芩苷进样量在0.25至1.25μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度实验取供试样液(见2.2.2项)，按前述色谱条件，连续测定5次，进样20 μl/次，依法测定峰面积，结果RSD=1.34%，表明本方法精密度高。
2.6 稳定性实验取供试样液(见2.2.2项)，分别于0，1，3，6，12，24，48 h测定峰面积，结果RSD=1.70%，表明供试品在48 h内测定结果稳定，故供试品溶液在48 h之内稳定性较好。
2.7 重现性实验取同批(批号050128)样品5份，按2.2.2法制备供试样液，按2.1条件进行分析，进样20 μl/次，依法测定峰面积，计算含量，结果重现性良好，RSD为1.60%。
2.8 样品测定取4个批号的样品，分别按供试样液的方法制备供试样液，进样20 μl/次，依法测定峰面积，按外标峰面积法测定黄芩苷的含量。结果见表1。表1 样品含量测定结果(略)
2.9 回收率实实验精密称取重现性试验项下的样品(已研细，黄芩苷含量为3.080 mg/g)10 g，置100 ml锥形瓶中，加适量(约60 ml 50%甲醇)，超声提取30 min，放冷，用50%甲醇加至刻度，滤过，精密吸取续滤液5 ml共5份置于100 ml容量瓶中，分别精确加入不同量的黄芩苷对照品，使其充分溶解，加入50%甲醇到刻度。摇匀后用微孔滤膜(0.45 μm)过滤，滤液各取20μl进样，依法测定峰面积，计算黄芩苷的含量。结果见表2。结果表明：该方法有良好的回收率。表2 加样回收实验结果序(略)
3 讨论
复方百部止咳冲剂是市场流通比较广的止咳药，目前由于没有含量测定的指标，不利于控制产品的质量，在成品的考察中未能准确地反映产品的内在质量，进而降低了产品的质量水平。因此，制定本产品的含量测定标准已成了刻不容缓的工作。笔者采用的高效液相测定方法准确度高、分离效果好、灵敏度高、专属性强、稳定性和重现性都比较理想，可作为本产品理想的含量测定方法。
参考文献：
[1]中华人民共和国第八届药典编纂委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2004：343.
(广西药用植物园制药厂，广西 南宁 530000)
作者简介：蓝鸣生(1957)，男(壮族)，广西宜州人，现任广西药用植物园制药厂主管药师，硕士学位，主要从事药剂学和中药化学研究工作., http://www.100md.com(蓝鸣生， 邓日建 ， 蒋莉)