八正合剂抗感染作用及其对小鼠免疫功能的影响
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刘如意 ,任会勋 ,吴 捷 ,董颖颖
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参见附件(224KB，3页)。
摘要：目的 探讨八正合剂治疗泌尿系统感染性疾病的药理学作用及其对小鼠免疫功能的影响。方法 将大肠杆菌注入小鼠膀胱后观察药物对细菌上行感染肾脏的抑制作用，同时检测其对小鼠免疫功能的影响。结果 八正合剂灌胃给药可显著降低大肠杆菌上行感染肾脏的带菌剖面百分率\[ED50为(11.01±1.63)g/kg，95%可信限为9.50-12.76g/kg\]，显著提高小鼠巨噬细胞吞噬率和吞噬指数，对体液免疫和细胞免疫影响不大。结论 八正合剂治疗泌尿系统感染性疾病的作用机制主要与其增强巨噬细胞吞噬功能、清除尿路细菌有关。
关键词：八正合剂；抗感染；小鼠；免疫
Antiinfection action of Bazheng mixture(BM) and effects of BM on immune function in mice
Liu Ruyi, Ren Huixun, Wu Jie, Dong Yingying
(Department of Immunology and Microbiology; Department of Pharmacology, Medical School of Xian Jiaotong University, Xi an 710061, China)
ABSTRACT: Objective To explore the pharmacological action of Bazheng mixture(BM) on infections disease of urinary system and effects of BM on immune function in mice. Methods After E.coli was injected into bladder of mice, the kidneys were examined for the antiinfection action of BM on ascending infection; and the effects of BM on immune function of mice were tested. Results BM ig remarkably decreased the percentage of kedneys infections area caused by ascending infection of E.coli \[ED50 was (11.01±1.63)g/kg and the 95% CL was 9.50-12.76g/kg\]; BM was also found effective in increasing the rate of carbon particle clearance and the index of carbon particle clearance, but BM had no significant effects on body fluid immunity and cell immunity in test for mice. Conclusion The mechanism of BM in treating infections disease of urinary system are mainly associated with the increasing rate of carbon particle clearance, and with bacteria clearance in urinary system.
KEY WORDS: Bazheng mixture(BM); antiinfection; mice; immunity
八正合剂源于宋朝“太平惠民和剂局方”中的八正散,由扁蓄、瞿麦、车前子、大黄、木通、滑石、栀子、甘草等8味中药经现代制药技术加工而成，具有清热、通淋和利尿功效\[1\]。近年来，临床上采用该方对各种泌尿生殖系统感染性疾病进行了大量的辩证施治,均显示出良好的疗效\[23\]，然而对其药理学作用基础尚缺少明确的认识。本研究将大肠杆菌注入小鼠膀胱后观察药物对细菌上行感染肾脏的抑制作用;同时检测其对小鼠免疫功能的影响，旨在阐明该药治疗泌尿系感染性疾病的药理学作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品和试剂 八正合剂,每毫升含生药1.0g，陕西中医学院制药厂生产(批号:990318)；硫酸庆大霉素注射剂，陕西西安妇幼制药厂生产(批号：980917)； MTT、ConA均为美国Sigma公司产品。
1.1.2 动物 ICR品系小鼠，雌性，体质量(19.3±0.8)g；绵羊、鸡等动物均由西安交通大学医学院实验动物中心提供。
1.1.3 大肠杆菌 O111B4 标准株由北京生物制品研究所提供。
1.2 方法
1.2.1 小鼠膀胱上行性肾感染模型制备\[45\]及分组 取ICR品系小鼠90只,随机分为正常对照组、肾感染模型组、庆大霉素40mg/kg对照组、八正合剂5、7、11、14、21、28g/kg(相当于生药量)剂量组，每组10只。各组小鼠禁食24h后，乙醚吸入麻醉，碘酒和酒精分别消毒尿道口，用注射器抽取大肠杆菌菌液(将菌苔接种于肉汤培养基中，37℃孵育18h后再用肉汤培养基稀释成106cfu/mL菌液)，插入尿道，进入膀胱后注入0.04mL菌液,结扎尿道口2-4h以防菌液外漏,并继续禁水4h。第2天开始给药，庆大霉素组每天肌肉注射2次，间隔10h，每次20mg/kg；正常对照组和肾感染模型组用蒸馏水25mL/kg灌胃，八正合剂各剂量组按上述剂量灌胃，每天1次，连续5d。感染后第5天，脱颈椎处死小鼠，无菌条件下取双侧肾脏,纵切后将剖面盖印于平皿琼脂培养基上，37℃培养18h后，记录有活菌存在的肾剖面数，求出各组小鼠肾脏带菌剖面百分率。
1.2.2 小鼠免疫功能检测\[6\] ①腹腔巨噬细胞吞噬功能：上述各组小鼠于最后1次给药后1h，每只鼠腹腔注射5%鸡红细胞混悬液0.4mL/只，4h后处死小鼠，测腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。②溶血素形成：小鼠动物数、分组、给药均同前，于给药第1天，每鼠腹腔注射5%鸡红细胞混悬液0.2mL，进行免疫，于最后1次给药后2h，小鼠眼眶取血分离血清，测溶血素形成。③溶血空斑形成：小鼠动物数、分组、给药及免疫均同前，于最后1次给药后2h，将小鼠脱颈椎处死，解剖取出脾脏，将两个小鼠脾脏放在一起匀浆，测溶血空斑形成。④淋巴细胞转化：小鼠动物数、分组、给药均同前，于灌药的第1天和第3天，每只鼠肌肉注射PHA 10mg/kg，于第5天给药后2h，小鼠剪尾取血，涂片，瑞氏染液染色，油镜下观察外周血淋巴细胞转化率。
1.2.3 统计学方法 采用NDST8.0软件处理数据，计数资料用Fisher直接概率法分析，计量资料用t检验。
2 结果
2.1 八正合剂对小鼠膀胱上行性肾感染大肠杆菌的影响 见表1。
与模型组比较，八正合剂各剂量组小鼠带菌肾剖面百分率均低于肾感染模型组，其中7-28g/kg剂量组与肾感染模型组比较有非常显著性差异(P<0.01)。经Bliss法计算，八正合剂的ED50为(11.01±1.63)g/kg，95%可信限为9.50-12.76g/kg，相关系数r=0.967。
2.2 八正合剂对感染小鼠免疫功能的影响
2.2.1 八正合剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 见表2。
表1 八正合剂对小鼠膀胱上行性肾感染大肠杆菌的影响(略)
Table 1 The effects of Bazheng mixture (BM) on mouse bladder ascending kidney infection
表2 八正合剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(略)
Table 2 The effects of BM on mouse abdominal cavity macrophage phagocytic function
2.2.2 八正合剂对小鼠溶血素、溶血空斑及淋巴细胞转化的影响 表3示，与感染对照组相比，八正合剂各剂量组对小鼠血清溶血素、溶血空斑及淋巴细胞转化无显著影响 (P>0.05)。
3 讨论
现代中医学认为泌尿系统感染性疾病多属于实热淋证的范畴\[7\]，故泌尿系感染疾病的中医治疗通常采用通淋清热法。传统通淋方剂中以八正散及其加减较为常用，尤其是用于湿热蕴结型急性泌尿系感染。泌尿系感染的致病菌以革兰氏阴性杆菌尤其是大肠杆菌最为常见\[8\]，而上行性感染是其主要致病途径\[9\]。本实验结果显示,小鼠灌胃给药，7、11、14、21和28g/kg八正合剂可使实验性膀胱上行肾感染大肠杆菌的带菌剖面百分率由100%下降到60%、45%、40%、30%和20%，与对照组相比有显著差异。表明该药对大肠杆菌由膀胱上行对肾脏的感染具有明显抑制作用。八正合剂处方组成中除大黄外均无明显抗菌活性\[9\],尽管大黄中的蒽醌类化合物对多种致病菌具有较强的抑菌作用,但常用口服剂量下八正合剂在尿中难以达到有效抑菌浓度,我们体外抑菌实验也得出相同结论。然而,由于八正合剂具有较强的利尿作用，可通过增加尿液流量冲洗清除细菌，同时该方在常用剂量下可抑制大肠杆菌P纤毛与尿路黏膜上皮受体结合黏附于尿路\[10\]。吴捷等\[11\]报道，口服八正合剂对抗致病菌引起尿路感染的主要机制在于其排除细菌而非抗菌作用，与本研究结果一致。
表3 八正合剂对小鼠溶血素、溶血空斑及淋巴细胞转化的影响(略)
Table 3 The effects of Bazheng mixture (BM) on mouse hemolysin, hemolysis plaque formation and lymphocyte transformation
免疫对机体抗感染的作用是众所周知的，尿路局部感染与其免疫功能缺陷密切相关，特别是局部分泌性IgA缺乏和吞噬细胞功能的降低。本实验从免疫角度探讨八正合剂治疗尿路感染的免疫学机制，结果显示八正合剂虽对体液免疫和细胞免疫功能影响不大，但能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能，八正合剂灌胃剂量在7-28g/kg的范围，能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数。提示八正合剂抗尿路感染作用与其增强巨噬细胞吞噬作用有关。
综上所述，八正合剂对小鼠大肠杆菌逆行泌尿系统感染有明显抑制作用，其抑菌效应与利尿除菌和增强局部吞噬细胞吞噬作用有关。
参考文献：
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\[11\]吴 捷，曹 舫,刘传镐，等. 八正合剂抗感染作用的实验研究 \[J\]. 中草药, 2002,3(6):523526.
(编辑 邱 芬)
基金项目：国家自然科学基金资助项目(No.398703304)
作者简介：刘如意(1961),男(汉),副教授. 研究方向：抗感染免疫. Email: liuruyi@mail.xjtu.edu.cn
(西安交通大学医学院：免疫与病原生物学系；药理学系，陕西西安 710061)
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