中药复方的化学研究体系(3)
http://www.100md.com
2006年7月27日
中药复方化学成分的研究，从药味、有效部分、有效成分三个化学层次上进行综合研究，是一条较现实的基本说清化学成分和药效、作用机理的研究之路。在此深入了解的基础上，进行适当简化，确定出简化的指纹图谱和指标成分，又是最合理的中药复方质量控制的方法。
三、中药复方物质基础和药效、作用机理相关性研究
中药复方分离成若干有效部分后，必须开展整体动物、组织器官、细胞亚细胞及分子生物学四个药理水平上的药效和作用机理研究。整体动物实验能较好确定各部分是否具有药效活性，即是否是有效部分。通过组合试验，还能确定各部分之间的协同、拮抗等配伍关系。组织器官、细胞亚细胞和分子生物学三个水平的药理实验能说明各有效部分的药效特别是作用机理。由于是在化学成分基本说清前提下开展药理研究，确保了药效、作用机理的可靠性和重现性。在将化学研究和药理研究结合时，可充分运用信息科学各种技术。
采用三个化学层次和四个药理水平这样一条思路，还可开展多方面研究工作：如中药材物质基础和中药药性理论(四性、五味等)相关性研究；中药复方物质基础和方剂配伍理论(药对、七情配伍、配伍法度、量效关系)相关性研究；中药复方物质基础和中药药物动力学相关性研究等。我们将另文阐述。
, 百拇医药
四、中药复方化学研究体系的方法学
要开展三个化学层次、四个药理水平的研究，方法学研究需引进各学科最新科技成果。有效部分和有效成分的提取需要用到超临界萃取、超滤、逆流色谱、双水相萃取等现代技术。特别是为满足药理实验所需大量样品时，更需借助现代化学工程学。分离与分析科学中多维、多模式、高效的系统分离分析新方法、新技术，如各种现代色谱及波谱技术，特别是各类仪器联用技术，如生物质谱、HPLC/CE-MS/MS及HPLC-NMR等，将对中药复杂体系的化学成分起到关键作用。中药复杂体系中化学成分和复合体的组成、结构、构象、状态、形态、过程变化等各种化学信息更有赖于以上各种新技术的使用。为了在器官、细胞和基因水平上开展药效、作用机理研究，须进行原位、微区、瞬时、活体及单细胞的在线监测，以及时间分辨、空间分辨、分子分辨等时空实时监测技术，包括超微电极电化学法、生物传感器等等。特别值得一提的是表面等离子体激元共振(SPR)、光学相干层析术(OCT)等的出现，将为分子生物医学提供崭新的手段。将来甚至有望出现单细胞药理学。
, 百拇医药
五、三承气汤化学研究体系思路
治疗里实证的三承气汤(大承气汤、小承气汤、调胃承气汤)药味组成及功效各不相同。大承气汤由大黄(君)、芒硝(臣)、枳实(佐)、厚朴(佐)组成，为峻下剂。大承气汤四味药去芒硝后成小承气汤，为轻下剂。调胃承气汤则由大黄、芒硝、甘草组成，为缓下剂。组成三方的五味药材包括了无机物和有机小分子化合物二大类及蒽醌类、生物碱类、三萜类及鞣质等十多类化合物。该五味药材又组成大黄�芒硝、大黄�枳实、大黄�厚朴、大黄�甘草等药对。三承气汤有很多作用，现以三承气汤对中医“通里攻下”法的疗效来探讨如何按上述思路进行物质基础研究。
五味药材单独均有大量化学成分和药理研究。对三承气汤复方化学研究只进行了蒽醌含量测定。对大承气汤尚进行了挥发油含量测定及不同煎煮法对大黄蒽醌含量的影响研究。大、小承气汤中君药大黄苦寒泻热，起荡涤胃肠实热积滞。需用生大黄，煎煮时需后下，以防止大黄蒽醌类中大黄酸甙水解变性、减弱泻下作用。芒硝也具有清热泻下之功，和大黄相须为用。药理研究发现：大承气汤对急性腹膜炎小鼠的腹部血管通透性影响，可因炎症部位，病程程度不同出现升高或降低等各种双向调节作用；而小承气汤却只有降低效应，并无双向调节作用。将芒硝单味药和大承气汤各种拆方进行实验，发现均无双向调节作用。拆方实验表明了二方配伍的差异和各味药材的配伍机理，凸现了君臣佐使药材各自的功用。
, 百拇医药
根据单味药材及复方的化学和药理研究资料，可采用溶剂提取、逆流层析、超临界萃取等现代分离手段，将大承气汤、小承气汤、调胃承气汤；大黄�芒硝、大黄�枳实、大黄�厚朴、大黄�甘草等药对；及大黄、芒硝、枳实、厚朴、苷草等药味分别提取分离成挥发油、蒽醌、鞣质、黄酮、生物碱、三萜类及无机物等化学部分。可用小鼠还纳、泻下、肠容积、肠容物移行速度实验来表征中医“通里攻下”法〔3〕，对上述各化学部分进行整体动物实验。从资料可推断结果必为蒽醌类为君有效部分，无机物为臣有效部分。二者配伍体现了大、小承气汤在有效部分这一化学层次上配伍规律。再作蒽醌类有效部分的指纹图谱，即可比较三方、四药对、五药味之间的差异，配合指标成分(游离蒽醌、结合蒽醌或大黄酸等)定量，即可确定药效和含量(有效部分和有效成分)间的量效关系。当然药效和作用机理的实验还应包括其它三个药理水平实验。如用膜片箝方法、45Ca法等研究相关的有效部分、有效成分对胃、肠平滑肌、细胞的离子通道，摄Ca2+等作用机理研究。采用超微电极电化学方法、微型毛细管电泳、分子雷达等方法研究组织或单个细胞内M受体，P-物质、脑啡肽及儿茶酚胺等神经递质、钙调蛋白等变化，来说明其作用机理。, 百拇医药
三、中药复方物质基础和药效、作用机理相关性研究
中药复方分离成若干有效部分后，必须开展整体动物、组织器官、细胞亚细胞及分子生物学四个药理水平上的药效和作用机理研究。整体动物实验能较好确定各部分是否具有药效活性，即是否是有效部分。通过组合试验，还能确定各部分之间的协同、拮抗等配伍关系。组织器官、细胞亚细胞和分子生物学三个水平的药理实验能说明各有效部分的药效特别是作用机理。由于是在化学成分基本说清前提下开展药理研究，确保了药效、作用机理的可靠性和重现性。在将化学研究和药理研究结合时，可充分运用信息科学各种技术。
采用三个化学层次和四个药理水平这样一条思路，还可开展多方面研究工作：如中药材物质基础和中药药性理论(四性、五味等)相关性研究；中药复方物质基础和方剂配伍理论(药对、七情配伍、配伍法度、量效关系)相关性研究；中药复方物质基础和中药药物动力学相关性研究等。我们将另文阐述。
, 百拇医药
四、中药复方化学研究体系的方法学
要开展三个化学层次、四个药理水平的研究，方法学研究需引进各学科最新科技成果。有效部分和有效成分的提取需要用到超临界萃取、超滤、逆流色谱、双水相萃取等现代技术。特别是为满足药理实验所需大量样品时，更需借助现代化学工程学。分离与分析科学中多维、多模式、高效的系统分离分析新方法、新技术，如各种现代色谱及波谱技术，特别是各类仪器联用技术，如生物质谱、HPLC/CE-MS/MS及HPLC-NMR等，将对中药复杂体系的化学成分起到关键作用。中药复杂体系中化学成分和复合体的组成、结构、构象、状态、形态、过程变化等各种化学信息更有赖于以上各种新技术的使用。为了在器官、细胞和基因水平上开展药效、作用机理研究，须进行原位、微区、瞬时、活体及单细胞的在线监测，以及时间分辨、空间分辨、分子分辨等时空实时监测技术，包括超微电极电化学法、生物传感器等等。特别值得一提的是表面等离子体激元共振(SPR)、光学相干层析术(OCT)等的出现，将为分子生物医学提供崭新的手段。将来甚至有望出现单细胞药理学。
, 百拇医药
五、三承气汤化学研究体系思路
治疗里实证的三承气汤(大承气汤、小承气汤、调胃承气汤)药味组成及功效各不相同。大承气汤由大黄(君)、芒硝(臣)、枳实(佐)、厚朴(佐)组成，为峻下剂。大承气汤四味药去芒硝后成小承气汤，为轻下剂。调胃承气汤则由大黄、芒硝、甘草组成，为缓下剂。组成三方的五味药材包括了无机物和有机小分子化合物二大类及蒽醌类、生物碱类、三萜类及鞣质等十多类化合物。该五味药材又组成大黄�芒硝、大黄�枳实、大黄�厚朴、大黄�甘草等药对。三承气汤有很多作用，现以三承气汤对中医“通里攻下”法的疗效来探讨如何按上述思路进行物质基础研究。
五味药材单独均有大量化学成分和药理研究。对三承气汤复方化学研究只进行了蒽醌含量测定。对大承气汤尚进行了挥发油含量测定及不同煎煮法对大黄蒽醌含量的影响研究。大、小承气汤中君药大黄苦寒泻热，起荡涤胃肠实热积滞。需用生大黄，煎煮时需后下，以防止大黄蒽醌类中大黄酸甙水解变性、减弱泻下作用。芒硝也具有清热泻下之功，和大黄相须为用。药理研究发现：大承气汤对急性腹膜炎小鼠的腹部血管通透性影响，可因炎症部位，病程程度不同出现升高或降低等各种双向调节作用；而小承气汤却只有降低效应，并无双向调节作用。将芒硝单味药和大承气汤各种拆方进行实验，发现均无双向调节作用。拆方实验表明了二方配伍的差异和各味药材的配伍机理，凸现了君臣佐使药材各自的功用。
, 百拇医药
根据单味药材及复方的化学和药理研究资料，可采用溶剂提取、逆流层析、超临界萃取等现代分离手段，将大承气汤、小承气汤、调胃承气汤；大黄�芒硝、大黄�枳实、大黄�厚朴、大黄�甘草等药对；及大黄、芒硝、枳实、厚朴、苷草等药味分别提取分离成挥发油、蒽醌、鞣质、黄酮、生物碱、三萜类及无机物等化学部分。可用小鼠还纳、泻下、肠容积、肠容物移行速度实验来表征中医“通里攻下”法〔3〕，对上述各化学部分进行整体动物实验。从资料可推断结果必为蒽醌类为君有效部分，无机物为臣有效部分。二者配伍体现了大、小承气汤在有效部分这一化学层次上配伍规律。再作蒽醌类有效部分的指纹图谱，即可比较三方、四药对、五药味之间的差异，配合指标成分(游离蒽醌、结合蒽醌或大黄酸等)定量，即可确定药效和含量(有效部分和有效成分)间的量效关系。当然药效和作用机理的实验还应包括其它三个药理水平实验。如用膜片箝方法、45Ca法等研究相关的有效部分、有效成分对胃、肠平滑肌、细胞的离子通道，摄Ca2+等作用机理研究。采用超微电极电化学方法、微型毛细管电泳、分子雷达等方法研究组织或单个细胞内M受体，P-物质、脑啡肽及儿茶酚胺等神经递质、钙调蛋白等变化，来说明其作用机理。, 百拇医药