毛细管电泳法快速测定保健食品中免疫球蛋白G
毛细管电泳,免疫球蛋白G,保健食品,添加剂,,毛细管电泳，免疫球蛋白G，保健食品，添加剂,1引言,2实验部分,3结果与讨论,References
摘要 建立了毛细管电泳法快速测定保健食品中免疫球蛋白G(IgG)含量的方法，成功测定了不同剂型(片剂、粉剂及胶囊)牛初乳保健品中IgG的含量。以37 cm×50 μm (i.d.)未涂敷熔融石英毛细管为色谱分离柱，50 mmol/L四硼酸钾+65 g/L聚乙二醇20 000 (1 mol/L 氢氧化铯调pH 10.0)为运行缓冲液，于214 nm波长处检测。详细研究了影响实际样品中IgG分离及准确定量的关键因素，如添加剂的种类、浓度；运行及样品缓冲液的浓度及pH等。采用峰面积外标法定量。方法的精密度为2.1% (n=7)；检出限为6.25 mg/L (S/N=3)；线性范围为50~2000 mg/L； 400 mg/L IgG迁移时间的相对标准偏差( RSD)为0.14 %；峰面积的RSD为2.9 % (n=7)。6 min内即可实现保健食品中IgG的分离与测定，结果与产品标示值基本吻合。关键词 毛细管电泳，免疫球蛋白G，保健食品，添加剂
1 引言
免疫球蛋白是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是桨细胞合成的一类具有抗体活性的球蛋白[1]。人免疫球蛋白有五类，分别是以IgG、IgA、IgM、IgD和IgE表示，哺乳动物都有IgG、IgM和IgA。近年来，对富含IgG的牛初乳用做食品的添加剂的研究成为热点。将IgG添加到婴幼儿配方奶粉、保健食品中，对于改善婴幼儿、中老年人及免疫力低下的人群的健康有重要意义。因此，需要建立简单、快速、准确检测保健食品中IgG的方法。常用的测定牛初乳制品中IgG的方法有单向免疫扩散法、免疫消浊比浊法、酶联免疫法、火箭免疫电泳法和化学发光自显影法等。这些方法灵敏度低、重复性差且耗时。高效液相色谱法(HPLC)[2]和金属螯合色谱法[3]分离提取免疫球蛋白，虽然提高了检测灵敏度，但前处理步骤繁琐。我国国家标准方法高效亲和色谱法[4]使用的HiTrap Protein G柱，由于能耐受0.3 MPa的反压，适宜快速测定蛋白液相色谱(FPLC)系统。当将其连接到HPLC系统时，由于反压大 (约1MPa) ，特别是在进样瞬间反压更大，随着进样次数的增加，极易造成色谱柱内 “软”的填料被压实而与柱内壁剥离，甚至会使部分填料透过色谱柱出口的多孔筛板进入管路，从而造成系统的反压增加导致色谱柱漏液，柱效下降。另外，该法利用梯度洗脱方式，分离时间较长约20 min，不利于大量常规样品的测定，而且亲和色谱填料对IgG易产生不可逆吸附，影响分离效率[5]。目前，采用毛细管电泳法(CE)或电泳微芯片分析IgG的研究多限于血液、体液中IgG亚结构[6 ......
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