烟碱与人血清蛋白相互作用的光谱研究
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摘要 在01 mol/L的磷酸氢二钠柠檬酸体系中，采用荧光光谱、紫外吸收光谱研究了人血清蛋白与烟碱的相互作用。荧光滴定表明这种相互作用使HSA的内源荧光猝灭。通过猝灭常数、结合常数和结合位点数的计算，证明了这种猝灭为静态猝灭机制。尼古丁和HSA形成1∶1稳定复合物；考察不同温度和酸度下的猝灭作用，进一步证实其静态猝灭行为和疏水作用机制。紫外吸收光谱和同步荧光光谱表明，相互作用引起HSA构象变化，而同步荧光光谱提示结合位点更接近于色氨酸。关键词 烟碱， 人血清蛋白， 紫外吸收光谱， 荧光光谱, 同步荧光光谱
1 引言
烟碱即尼古丁[3(1甲基2吡咯烷基)吡啶]是一种主要存在于烟草中的生物碱，在烟草中的含量一般为1%~2%，占烟草总植物碱的95%,是导致人吸烟上瘾的主要因子。动物诱变实验证明尼古丁具有协同致癌作用，而其亚硝化衍生物是确定的器官专属性致癌物。细胞实验表明高剂量的尼古丁会诱导CHO细胞染色体畸变率和姐妹染色单体交换频率显著提高，提示尼古丁可能具有一定的遗传毒性。加速质谱实验[1，2]显示尼古丁在小鼠体内与鼠肝DNA和鼠肝组蛋白均发生加合。进一步的体外光谱实验[3]表明尼古丁与鼠肝组蛋白的相互作用使蛋白质的构象发生了变化，推测尼古丁可能通过改变组蛋白的构象来影响染色体的结构、功能和基因表达。除此之外，尼古丁对一些生物酶活性存在显著的影响[4，5]。因此，尼古丁对生物组织和生物分子的相互作用行为和毒性值得进一步关注。由于血清蛋白在结合和运输内源性和外源性化合物中扮演重要角色，有关小分子底物与其相互作用的研究十分活跃。文献[6，7]通过系列光谱实验探讨了尼古丁与一些血蛋白的相互作用，认为尼古丁与血清蛋白、血红蛋白都存在直接相互作用而形成复合物，但并未做深入研究。本研究采用荧光光谱、紫外吸收光谱研究了人血清蛋白与烟碱的相互作用，证明HSA的内源荧光猝灭为静态猝灭机制；考察不同温度和酸度下的猝灭作用,表明尼古丁和HSA形成1∶1稳定复合物；紫外吸收光谱和同步荧光光谱表明，相互作用引起HSA构象变化。而同步荧光光谱提示结合位点更接近于色氨酸。这些结论对尼古丁的体内转运和脱度机制的深入研究具有一定参考价值。
2 实验部分
2.1 仪器和试剂
CARY ECLIPSE 荧光分光光度计(Varian);UV1600紫外可见分光光度计(北京第二光学仪器厂);PHS3通用型酸度计(成都市三可仪器有限公司) ......
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