RNA干扰Survivin基因治疗大肠癌作用机制的研究进展
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张志宏, 韩盛玺
Survivin;siRNA干扰;COX-2抑制剂,张志宏,韩盛玺,通讯作者:,摘要,关键词:,0,引言,1RNA干扰及其作用机制,2W
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张志宏, 韩盛玺, 四川省医学科学院, 四川省人民医院消化内科 四川省成都市 610041
通讯作者: 张志宏, 610041, 四川省成都市西一环32号, 四川省医学科学院, 四川省人民医院消化内科. zhang-821@21cn.com
电话: 028-66304892
收稿日期: 2006-09-10 接受日期: 2006-10-09
摘要
Survivin(生存素)作为IAP家族成员之一, 被认为是迄今为止发现的最强的凋亡抑制因子. 以siRNA干扰Survivin的表达靶向观察其对大肠癌细胞基因的表达及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.
关键词: Survivin; siRNA干扰; COX-2抑制剂
张志宏, 韩盛玺. RNA干扰Survivin基因治疗大肠癌作用机制的研究进展. 世界华人消化杂志 2006;14(33):3215-3218
0 引言
小干扰RNA片段(small interfering RNA, siRNA)对目的基因Survivin的干扰是否对相应的基因和蛋白质的表达产生影响, 从而干扰细胞的增殖和凋亡.
1 RNA干扰及其作用机制
RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指由小片段的双链RNA分子介导的生物细胞内同源基因的特异性转录后基因静默现象(post-transcriptional gene silencing). 最早报道见于1990年, 但直至1998年, Fire et al[1]首次将正义链和反义链的RNA混合物-双链RNA(double stranded RNA, dsRNA)注入线虫, 结果诱发出比单独注射正/反义链强10倍以上的基因静默现象, 而且在其后代亦可产生同样应答[2], 自此激励许多实验室从事大规模的基因组筛选研究以阐明基因功能. 其作用机制分为如下二个阶段: (1)长链的双链RNA进入细胞; 在细胞胞质内的核酸酶-Dicer的作用下, dsDNA被切割成21-23 bp的siRNA; 后者(包括外源性合成的和内源性表达的siRNA)均可与一些功能蛋白结合, 形成RNA介导的基因沉默复合物(RNA-induced silencing complexes, RISC); (2)RISC中螺旋酶解开双链siRNA, 后者通过解开的反义链与siRNA 具有高度互补序列的靶信使RNA(messenger RNA)结合, RISC切割降解与siRNA序列互补的mRNA, 从而引起特定基因的沉默. 其主要特点包括: (1)高特异性: siRNA只能特异性的降解同源性mRNA, 对siRNA其他种类基因的表达不受影响. Wohlbold et al[3]证明用siRNA能有效沉默异常BCR-ABL融合基因表达, 而不影响正常c-BCR和c-ABL的转录; (2)高效性: 少量dsRNA可促进大量同源mRNA的降解, 与寡脱氧核苷酸(oligodeoxyribonucleic acids, ODNs)比较其最大抑制浓度(IC50)低100-1000倍[4-5], 并且作用时间延长[6], 同时有研究证明通过电穿空、局部注射或静脉注射[7]的方法已经成功将化学合成的siRNA、表达siRNA的质粒以及病毒等导入哺乳动物, 并不引起全身非特异性反应用[4,8-9]. 2004年美国FDA已经批准将经过修饰的siRNA进行临床新药实验, 用于治疗与年龄相关的黄斑退行性改变的患者[8]. 总之, RNAi作为研究基因功能的一种重要和常用的技术, 已经广泛用于基因组的研究和临床疾病包括病毒感染、显性遗传疾病, 尤其是肿瘤的治疗研究, 有着广阔的前景和应用潜力.
2 Wnt信号传导通路的作用机制
目前在我国, 大肠癌作为一种常见的恶性肿瘤, 其发病率呈现出逐年增加的趋势, 但是由于其治疗效果不尽如人意, 使人们对其病因、发病机制的研究兴趣日益增加. 而防治肿瘤的关键在于诱导肿瘤细胞的凋亡和抑制其无限增殖. 目前认为在结肠癌变发生、发展的多个环节中, Wnt信号传导通路发挥着决定性的作用. 其通路中的多个成员如APC,b-catenin, cyclinD, c-myc, Survivin, PTEN等在结肠癌变的过程中均出现异常改变 ......
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