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方勤美 孙薇 焦丽燕 钱小红 姜颖 夏春 贺福初
肝癌细胞,细胞收集,蛋白提取,二维差异凝胶电泳,系统评估,,肝癌细胞,细胞收集,蛋白提取,二维差异凝胶电泳,系统评估,1引言,2实验部分,3结果与讨论
摘要 利用二维差异凝胶电泳技术(twodimensional differential ingel electrophoresis, 2DDIGE)研究肝癌细胞与正常细胞的差异时应先对其蛋白样品进行标记系统评估，以确保正式实验的成功。在细胞水平上展开蛋白质组研究应尽可能提取到细胞的所有蛋白，为此本研究先比较了机械刮除法、胰酶消化法和PBSE消化法收获肝癌细胞后的细胞形态与蛋白得率，结果显示PBSE消化法收集肝癌细胞时细胞形态完整，提取的蛋白得率最高。然后将提取的细胞蛋白经DIGETM试剂盒的3重荧光(Cy2、Cy3、Cy5)标记后再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和双向电泳(2DE， twodimensional electrophoresis)。前者图像使用ImageQuant软件进行分析，结果说明肝癌细胞蛋白提取液与该染料能相互兼容，样品得到了有效的标记。2DE的扫描图像使用DeCyder 5.0软件的胶内分析(differential ingel analysis，DIA)和胶间分析(biological variation analysis，BVA)模式，结果表明，Cy3和Cy5标记的蛋白质定量结果基本一致，但该染料标记肝癌细胞蛋白后会造成极少量蛋白出现位置偏差 ......