http://www.100md.com
姚德生 1 李 力 1 Kenneth Garson 2 Barbara C. Vanderhyden 2
1 广西医科大学肿瘤医院妇瘤科
2 加拿大渥太华大学癌症中心
本项目研究获美国 NIH 研究基金 (CA84242) 、加拿大国家癌症研究基金 (NCIC 014175) 和广西回国基金 ( 桂科回 0575020) 资助
【摘要】目的 为了解 OPCML 在卵巢癌中的功能 , 以及慢病毒载体( lentiviral vector )作为体外转基因工具的高效性和可行性。 方法 根据 GenBank 上的序列，从 CD1 小鼠上克隆了 OPCML 基因，将之克隆到慢病毒载体 pWPI-GFP ，构建了慢病毒表达质粒 pWPI-OPCML ，将 pWPI-OPCML+pCMV.dR874 +pMDG 共转染 293T 细胞获得携带有 OPCML 的重组慢病毒，用病毒上清感染靶细胞( A2780 ， OCC1 ， RM 及 MOSE )，通过细胞增殖试验、细胞聚合力试验及体内成瘤试验等来研究 OPCML 在卵巢癌中的功能。 结果 ( 1 ) OPCML 能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞，效率几乎达 100% ，同时达到稳定的表达， Western blot 能检测到 OPCML(60kDa) 和 GFP(27kDa) 蛋白。 ( 2 ) 细胞增殖试验显示，在 A2780 和 RM 细胞，转入 OPCML 后细胞的增殖明显的比未转基因( A2780 ， RM )或仅转空载体( A2780-pWPI 和 RM-PWPI )者慢( P <0.01 )，但在 OCC1 细胞系， OPCML 对细胞的增殖无明显的影响( P >0.05 )；( 3 ) FCM (流式细胞仪)对细胞周期检测显示 OPCML 对 A2780 细胞的细胞周期有明显的滞留作用，但对 OCC1 、 RM 、 MOSE 细胞无明显滞留作用( P >0.05 )；( 4 )细胞聚合力试验显示 OPCML 能明显增强细胞的粘附力；( 5 )移植瘤试验显示，将 A2780-OPCML 注射到裸皮下，仅有一个( 1/4 )有肿瘤生长，体积显著的小于 A2780 及 A2780-pWPI 组( P <0.001 ) ; 但在 RM 组， RM-OPCML 和对照组 RM-pWPI 之间肿瘤大小和成瘤情况无明显差异( P >0.05 )
1 广西医科大学肿瘤医院妇瘤科
2 加拿大渥太华大学癌症中心
本项目研究获美国 NIH 研究基金 (CA84242) 、加拿大国家癌症研究基金 (NCIC 014175) 和广西回国基金 ( 桂科回 0575020) 资助
【摘要】目的 为了解 OPCML 在卵巢癌中的功能 , 以及慢病毒载体( lentiviral vector )作为体外转基因工具的高效性和可行性。 方法 根据 GenBank 上的序列，从 CD1 小鼠上克隆了 OPCML 基因，将之克隆到慢病毒载体 pWPI-GFP ，构建了慢病毒表达质粒 pWPI-OPCML ，将 pWPI-OPCML+pCMV.dR874 +pMDG 共转染 293T 细胞获得携带有 OPCML 的重组慢病毒，用病毒上清感染靶细胞( A2780 ， OCC1 ， RM 及 MOSE )，通过细胞增殖试验、细胞聚合力试验及体内成瘤试验等来研究 OPCML 在卵巢癌中的功能。 结果 ( 1 ) OPCML 能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞，效率几乎达 100% ，同时达到稳定的表达， Western blot 能检测到 OPCML(60kDa) 和 GFP(27kDa) 蛋白。 ( 2 ) 细胞增殖试验显示，在 A2780 和 RM 细胞，转入 OPCML 后细胞的增殖明显的比未转基因( A2780 ， RM )或仅转空载体( A2780-pWPI 和 RM-PWPI )者慢( P <0.01 )，但在 OCC1 细胞系， OPCML 对细胞的增殖无明显的影响( P >0.05 )；( 3 ) FCM (流式细胞仪)对细胞周期检测显示 OPCML 对 A2780 细胞的细胞周期有明显的滞留作用，但对 OCC1 、 RM 、 MOSE 细胞无明显滞留作用( P >0.05 )；( 4 )细胞聚合力试验显示 OPCML 能明显增强细胞的粘附力；( 5 )移植瘤试验显示，将 A2780-OPCML 注射到裸皮下，仅有一个( 1/4 )有肿瘤生长，体积显著的小于 A2780 及 A2780-pWPI 组( P <0.001 ) ; 但在 RM 组， RM-OPCML 和对照组 RM-pWPI 之间肿瘤大小和成瘤情况无明显差异( P >0.05 )