B72蛋白;_Western_blot;_肝硬化_

B72分子在肝硬化患者肝脏组织中表达的Western blot检测方法研究

http://www.100md.com 《东南大学学报(医学版)》 2006年第4期

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     [摘要]目的: 建立肝硬化患者肝组织B72分子Western blot检测方法。方法:设置不同的一抗稀释比，筛选合适一抗稀释比。设置阳性对照、阴性对照，确认目的蛋白。结果:在一抗稀释比从1∶50到1∶200的范围内，蛋白显影灰度逐渐增加，随着一抗稀释比从1∶200到1∶1000的进一步递减，蛋白显影灰度却逐渐减弱。结论:在一抗稀释比为1∶200条件下，B72分子在肝硬化患者肝脏组织中呈强阳性表达。

    [关键词]B72蛋白; Western blot; 肝硬化

    乙肝肝损害主要和T淋巴细胞免疫有关,长期过强免疫反应是导致乙肝肝硬化的主要发病机制。T淋巴细胞的激活需要双重信号刺激。B72分子是重要的协同刺激分子，参与T细胞的激活和分化。另外，B72分子同多种疾病，如肿瘤、肝移植及其他免疫性疾病的发病机制有相关性。探讨B72分子在组织中表达的检测方法为揭示其功能提供必要条件。本研究旨在探讨建立Western blot检测肝硬化肝组织中B72分子的方法及合适条件。

     1 材料与方法

    11 材料

    111 实验试剂山羊抗人B72抗体(AF141NA，美国RnDsystem公司)，兔抗山羊辣根过氧化物酶标记二抗(A5420，美国SIGMA公司)；蛋白酶抑制试剂盒(BS387，上海生物工程技术有限公司),二喹啉甲酸(BCA)蛋白测定试剂盒(FK93273，Amersham Biosciences公司), PVDF(RPN303F，Amersham Biosciences公司)；Supersignal west pico chemiluminescent substrate(FG70952，美国PIERCE 公司)，β巯基乙醇(M0482，上海生物工程技术有限公司)；Jurkat Whole cell lysates(SC2204 ......

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