腺病毒科_载体；_遗传；_粒细胞巨噬细胞集落刺激因子；

GMCSF基因腺病毒表达载体的构建及其在树突状细胞的表达

http://www.100md.com 《福建医科大学学报》 2006年第5期

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     摘要: 目的构建人GMCSF 基因的重组腺病毒载体,探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。方法设计一对GMCSF 基因上下游引物,以质粒pBluhGMCSF为模板,经PCR 扩增获得GMCSF基因全部序列。片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pshuttleCMVGMCSF。经双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy1 的BJ5183 菌。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒，将2种重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化，用脂质体转染293 细胞。制备病毒上清并测定其滴度，并感染人树突状细胞。结果完成构建含有人GMCSF基因的重组腺病毒,病毒滴度AdGMCSF 5.2×109pfu/mL。RTPCR 及ELISA检测证实GMCSF在DC中表达。结论构建重组腺病毒载体,并在DC表达GMCSF抗原蛋白。

    关键词: 腺病毒科，载体；遗传；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子；树突细胞

    Construction of Recombinant Adenovirus Vector Containing Human GMCSF Gene and Expression in Dentritic Cells

    Zhu Xiongpeng, Chen Zhizhe, Lin Xu, Hu Jianda, Li Chuntuan, Xu Zhenshu, Yang Ting

    1.The Affiliated Union Hospital,Fujian Medical University, Fujian Institute of Hematology, Fuzhou 350001， China

    2.Research Center of Molecular Medicine， Fujian Medical University, Fuzhou 350001， China

    3.Department of Hematology, The Affiliated Quanzhou First Hospital, Fujian Medical University， Quanzhou 362000， China

    ABSTRACT: Objective To construct the recombinant adenovirus vectors containing human GMCSF gene ......

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