氯嘧磺隆胶体金免疫检测试纸条的制备与应用
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摘要 利用胶体金标记的经亲和层析纯化的氯嘧磺隆单克隆抗体，氯嘧磺隆牛血清白蛋白，羊抗鼠IgG制备了氯嘧磺隆胶体金免疫检测试纸条。该试纸条的最低检测极限为100 μg/L，检测时间10 min。8个土壤样品分别添加0～2000 μg/L的氯嘧磺隆标样，用0.15 mol/L NaHCO3 提取2 h后用气相色谱和试纸条进行检测，如果以100 μg/L作为阳性与阴性样品的区分标准，气相色谱和试纸条检测结果完全一致。所制备的胶体金免疫检测试纸条可以用于土壤中氯嘧磺隆残留的筛选。关键词 氯嘧磺隆，单克隆抗体，试纸条，胶体金
1 引言
氯嘧磺隆(chlorimuronethyl)，俗称豆磺隆，是一种超高效的磺酰脲类除草剂。有效用量为10～15 g/hm2，可芽前或芽后选择性防除大豆田阔叶杂草及某些禾本科杂草。由于其残留毒性会使下茬敏感作物受害，因此对其残留监测显得尤为重要[1]。氯嘧磺隆的检测方法主要有活体生物法[2]、高压液相和气相色谱法[3~5]及Enzymelinked immunosorbent assay(ELISA)[6～8]等。上述检测方法或需要昂贵的仪器和训练有素的技术工人，或检测时间长且只能在实验室进行，不能在污染点现场监测。胶体金免疫检测试纸条已广泛应用于小分子物质四环素[9]、链霉素，[10]、黄曲霉素[11，12]、甘草酸[13]的现场快速检测。其原理如图1，样品垫中的待测物移动到胶体金释放垫时与胶体金标记的抗体结合，继续移动到检测线时，检测线上的小分子蛋白交联物与样品中的待测物竞争胶体金标记的抗体；如果样品中待测物的浓度很高，那么检测线上的小分子蛋白交联物就竞争不到胶体金标记的抗体，如果样品中待测物的浓度很低或没有，那么检测线上的小分子蛋白交联物就会结合大量的胶体金标记的抗体。结合了待测物的胶体金标记抗体和剩余的胶体金标记抗体会继续移动到质控线与二抗结合。由于检测线上的小分子蛋白交联物与质控线上的二抗在硝酸纤维素膜(NC膜)上都是固定的，结合在两处的胶体金就会显现颜色。阳性样品，检测线没有颜色，质控线呈红色；阴性样品，检测线与质控线都呈红色；两处都没有颜色说明试纸条失效。本研究拟利用本实验室已经制备的氯嘧磺隆单克隆抗体，通过与胶体金的标记制备免疫检测试纸条并用于土壤中氯嘧磺隆残留的现场快速筛选。
图1 试纸条的结构图(略)
Fig.1 Schematic representation of a dipstick showing its components ......
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