当前位置: 首页 > 期刊 > 《江苏大学学报(医学版)》 > 2006年第5期
编号:11333952
幽门螺杆菌感染5种检测方法的评价
http://www.100md.com 《江苏大学学报(医学版)》 2006年第5期
     [关键词]幽门螺杆菌;检测方法; 蛋白质印迹法; Giemsa染色;

    自1983年Barry Marshall和Robin Warren分离出幽门螺杆菌( Hp )以来,目前认为 Hp 与消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌及粘膜相关淋巴组织淋巴瘤的发生密切相关[1,2]。Hp 感染的准确诊断在临床工作中 显得尤其重要。目前 Hp 感染的诊断方法分为内窥 镜依赖性检查方法和非内窥镜依赖性检查方法,但每种检查方法各有优点及不足。本文通过对136例患者在同一时间段内采用快速尿素酶试验(RUT)、细菌培养、组织细胞学(Giemsa染色)、13 C尿素呼气 试验(13C-UBT)、抗体免疫印迹等不同方法检测 Hp感染,分析评估各种指标优劣,寻找检测 Hp 感染的可靠指标,为指导临床选择提供参考。

     1 资料与方法

    1.1 病例选择

    选取2004年2月至2005年11月在本院内科 因上腹部症状就诊而接受胃镜检查的患者136例,其中男75例,女61例,年龄18~76岁,平均(46.4 ±8.1) 岁 。其中单纯浅表性胃炎患者74例,萎缩性胃炎23例,十二指肠球部溃疡25例,胃溃疡8 例,胃癌6例。 所有患者1个月内均未服用抗 Hp 药物(包括质子泵抑制剂、铋剂、抗生素等)并且无胃手术史。

    1.2 检查方法

    进行胃镜检查时,从胃窦大弯侧近幽门孔3 cm 内取相邻3块粘膜,1块粘膜立即进行RUT(福建三 强生物化工有限公司)检测,观察5 min,试剂由淡黄色变为红色为阳性;1块粘膜置于10%甲醛中固定后送病理科,行Giemsa染色后进行判断;1块粘膜置于 Hp 输送液中送实验室 Hp 培养,根据菌落、Hp 形态、生化反应进行判断。不同疾病的患者根据 胃镜下的具体情况行病理活检。上述患者完成胃镜检查后即采指尖血10 μl行 Hp 抗体免疫印迹(深圳市伯劳特生物制品有限公司)检测,根据 Hp 特异性抗体(CagA抗体、VacA抗体、UreB抗体、UreA抗体)进行判断。 所有患者均接受13 C-UBT检测 Hp ,患者口服13C标记的尿素分解为 13 C标记的CO2,通过质谱仪检测 患者呼气中的13 C-CO2 进行判断。

    1.3 诊断标准

    Hp 感染的标准为:①细菌培养阳性;②细菌培养阴性,但组织染色有大量典型细菌或组织染色有少量典型或大量不典型细菌则加上13C-UBT、RUT或免疫印迹法中任何一种;③13 C-UBT、RUT或免疫印迹法三项中两项阳性[13]。

    1.4 统计学处理

    Hp 检测率的比较采用χ2 检验,P <0.05为有显 著性差异。

     2 结 果

    2.1 5种 Hp 检测方法敏感性、特异性、准确性比较

    根据5项检测结果,在136例患者中 Hp 感染 82例,未感染54例,同时统计每一项检测方法在 Hp感染和未感染者中人数,得出每项检测的敏感性、特异性和准确性,表1显示13C-UBT检测 Hp 感染的敏感性,特异性和RUT比较有显著性差异( P< 0.05 )。表1 5种 Hp 检测方法的敏感性、特异性、准确性检测方法Hp 感染组 (略)

    2.2 不同疾病的 Hp 感染率

    在136例患者中,不同疾病 Hp 感染率也不相同,其中十二指肠球部溃疡 Hp 感染率最高(88.00% ,22/25),慢性萎缩性胃炎 Hp 感染率达 (34.78%,8/23),单纯浅表性胃炎58.11%(43/74),胃溃疡为75.00%(6/8),胃癌 Hp 感染率最低(50%,3/6)。

    2.3 Hp 特异性抗体CagA、VacA和上消化道疾病关系

    本研究显示 Hp 阳性患者中VacA、CagA两项均阳性者为56.09%(46/82),均阴性者为17.07% (14/82),两者相比较有显著性差异( P <0.05),其中一项阳性者为26.82%(22/82)。在VacA、CagA 均阳性者在十二指肠溃疡病组32%(8/25)与单纯 浅表慢性胃炎组28.37%(21/74)比较无显著差异 ( P >0.05)。

     3 讨 论

    Hp 感染与胃十二指肠病密切相关,本资料中慢性浅表性胃炎中 Hp 感染率为58.11%,慢性萎缩性胃炎为34.78%,十二指肠球部溃疡88.00%,与文 献报道相似,故认为 Hp 感染与慢性胃炎密切相关,是消化性溃疡的重要致病因子。本研究也提示在上消化道疾病中VacA、CagA均阳性者高于VacA、Ca-gA均阴性者( P <0.05),但VacA、CagA均阳性者在十二指肠溃疡病组与单纯浅表慢性胃炎组无显著差异( P >0.05),和有关报道大致相似[5],VacA、CagA 在胃癌和胃溃疡阳性率如何,因本研究该类病例数少,以后需进一步研究。目前 Hp 感染的检测方法大致可分为侵入性和 非侵入性两类[5]。非侵入性方法无创伤,易为患者所接受,13C-UBT是一种比较常用方法。本资料中13C-UBT诊断 Hp 感染的敏感性为96.34%,特异性为 98.15%,准确性为97.06%,明显高于其他检测方法。由于口服13C-尿素到达胃后呈均匀分布,故只要在13 C-尿素接触的部位存在 Hp 感染,就可灵敏地检测到,可反应“全胃”状况[6],能克服胃内 Hp 灶性分布的局限性及取材局限的缺点,避免了活检标本 Hp 分布不均造成的假阴性结果,而且13C-UBT还是一种稳定性同位素,对机体是完全无损伤性的,故幼儿及孕妇均可受试,除了定性以外,还可以做定量测 定。国内外有些文章[6]称13C-UBT为诊断 Hp 感染的“金标准”,但我们必须考虑到13C-UBT检测仍旧会受到诸如药物、上消化道活动出血、胃内其他杂菌等因素的影响而可能出现假阳性和假阴性结果,且由于其需要大型质谱仪和试剂较昂贵,限制了它在 基层医院的应用。但从目前临床条件出发,13C-UBT仍不失为一项值得推广的检测手段,可用于 Hp 感染的动态观察,尤其用于观察 Hp 根除的疗效有特殊意义。免疫印迹法是一种特异、敏感而可靠的蛋白质检测方法,它能定位、定性分析蛋白质的各组分,具有高特异、高灵敏和快速检测的特点。由于它也是一种非侵入的检测方法,易于为病人所接受。更重 要的是它可以对 Hp 的毒力菌株进行分型, 包括了 CagA、VacA和尿素酶亚单位,本文研究发现免疫印 迹法不仅诊断 Hp 感染率敏感性,特异性,准确性均比较高,而且能观察 Hp 的毒力菌株(CagA、VacA)在消化道疾病的分布情况,这是其他方法所不能代替的,这对疾病程度的估计、预后发展及临床治疗均 有重要的指导意义,对进一步研究 Hp 毒力菌株和胃十二指肠疾病内在关系有很大的帮助,值得推广应用。在侵入性检测方法中,本研究发现RUT检测 Hp 感染率敏感性和特异性都不是很高。虽然RUT检测因其试剂廉价,方法简单,反应迅速而在临床上得到广泛应用,但尿素酶的活性取决于活检组织内的细菌数量多少,而且取材亦受 Hp 在胃内“灶性分布”的影响,可能造成假阴性反应,而其他非 Hp 类螺杆菌属细菌也可能造成假阳性,故笔者认为RUT不宜单独作为判断有无 Hp 感染的依据,须结合其他检测方法,这样可以减少其假阳性与假阴性的概率。胃粘膜组织的细菌培养是诊断 Hp 感染的最可靠方法,往往作为其他检测手段的“金标准”,但由于 Hp 培养需要一些特殊条件,且费用高和费时,多用于科研工作中,其特异性敏感性可达100%和76.83% ,但有些因素可能会影响 Hp 的培养而导致假阴性,如培养基污染抑制 Hp 生长,近期服用抗生素,粘膜组织中 Hp 的数量过少,细菌繁殖能力差等。组织学中Giemsa染色下 Hp 形态清晰、染色单一容易辨认,操作简单,价格低廉,并能对胃炎分类,病理改变作出判断,其特异性高达96.30%,但敏感 性较低(70.73%),通过多点活检可提高诊断的准 确性。总之,通过5种检测方法的比较,本研究认为13C-UBT和免疫印迹法测定Hp 感染灵敏度强,特异性高,值得在临床推广使用,RUT检测方法简单,费用低,但灵敏度和特异性不是很高,不宜单独作为判断有无 Hp 感染的依据,须结合其他检测方法,胃黏膜细菌培养法适合于科研工作。

     [参考文献]

    [ 1 ]Axon AT. Helicobacter pylori infection[J]. J Antimi- crob Chemother, 1993,32(Supp1A):61-68.

    [ 2 ]MCCA Nulty. Pathogenicity of Campylobacter pylori-a causative factor in gastritis[J]. Scand J Gastroenterol Suppl, 1989, 1603-1606.

    [ 3 ]周殿元, 张万岱, 王继德. 中华医学会第二届全国幽 门螺杆菌专题学术研讨会纪要[J]. 中华消化杂志, 1997,17(7):286-287.

    [ 4 ]Zhang YL, Liu HY, Zhou K. Lack of correlation of va-cA Genotype,cagA gene of Helicobacter Pylori and theirexpressing products with various gastroduodenal dis-eases[J]. Chinese Medical Journal;2001,114(7):703 -706.

    [ 5 ]李岩. 幽门螺杆菌检测方法[J]. 中国实用内科杂 志, 2002, 22(1):15-16.

    [ 6 ]苏艺群,李常群. 低剂量 13 C-尿素呼气试验幽门螺杆 菌感染[J]. 中国内镜杂志, 1996, 2(3):39

    (江苏大学附属医院消化科, 江苏 镇江 212001), 百拇医药(何亚龙, 张尤历, 魏金文)