兔抗人细胞色素P450 4A11合成肽抗体的制备与鉴定
CYP4A11;,合成肽;,多克隆抗体,,]CYP4A11;,合成肽;,多克隆抗体,兔抗人细胞色素P4504A11合成肽抗体的制备与鉴定,1材料和方法,2结果,3讨论,参考文献:
[摘 要] 目的: 制备兔抗人细胞色素P450 4A11 (CYP4A11)抗体, 并对其特性进行初步鉴定。方法: 利用生物信息学方法分析CYP4A11蛋白的序列, 根据亲水性结构、 柔韧区、 抗原指数及表面概率结构等指标选择多肽序列、 合成CYP4A11多肽, 与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联, 免疫大耳白兔制备抗CYP4A11抗体。辛酸硫酸铵法纯化抗体, 对纯化的抗体进行ELISA、 Western blot、 免疫组化等鉴定。结果: 获得抗CYP4A11合成肽的抗体。该抗体效价为1∶32000。可与CYP4A11合成肽及天然CYP4A11出现特异性反应, 该抗体识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为53000, 可识别正常肝脏的CYP4A11。结论: 合成的多肽KLH复合物具有免疫原性, 可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP4A11合成肽抗体可应用于ELISA、 Western blot、 免疫组化等实验。[关键词]CYP4A11; 合成肽; 多克隆抗体
人细胞色素P450 4A11是细胞色素P450 4A亚型之一, 主要分布在肝脏和肾脏, 其可以催化多种脂肪酸(月桂酸等)的代谢, 调节体内脂类代谢平衡[1]。CYP4A11催化内源性花生四烯酸代谢生成20羟基廿碳四烯酸(20H ydroxyeicosatetraenoicacid, 20HETE), 而20HETE与原发性高血压形成有关[2]。CYP4A11还参与防御紫外线氧化损伤的机制[3]。目前对CYP4A11的研究正逐渐深入。国外已研究出重组CYP4A11抗体, 而国内尚无这方面报道。因此, 我们制备CYP4A11的抗体, 这将对CYP4A11的生理功能、 组织定位以及与某些疾病的关系研究起重要的推动作用。
1 材料和方法
1.1 材料 雄性大耳白兔6周龄, 由哈尔滨医科大学动物实验中心提供。福氏佐剂及3,3,5,5四甲基联苯胺(TMB)均购自Sigma公司。HRP山羊抗兔IgG购自Jackson Immuno Research公司。牛血清白蛋白(BSA)购自Solarbio公司。硝酸纤维素膜(NC)购自BIORAD公司。ECL Plus购自Amersham Biosciences公司。即用型SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。其他试剂均为国产分析纯。多肽合成及其与KLH、 BSA的联接由北京中科亚光生物科技有限公司完成。正常人肝脏组织, 由“人类肝脏蛋白质组计划”项目提供。
1.2 方法 ......
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