不同海拔炎性反应综合征中骨髓基质干细胞对心肌的保护
Protective effect of bone marrow stem cell mobilization on myocardium in systemic inflammatory response syndrome rat at different altitudes
ZHANG Yong, WANG Hui, LIANG JiaLi, JIANG GuanHua, ZHENG XiaoZhou, YANG Zhe, ZHANG Bo
1Department of Cardiovascular Surgery
2Department of Ultrasound Diagnosis, Jinan General Hospital, Jinan Military Area Command, Jinan 250031, China
【Abstract】 AIM: To study the therapeutical effect on myocardium in systemic inflammatory response syndrome (SIRS) rat at different altitudes through mobilizing marrow stem cells (MSCs) by applying granulocyte colony stimulating factor (GCSF) and stem cell factor (SCF). METHODS: The twohit models of SIRS rats were established at three different altitudes (50, 1510, 3900 m). Before modeling, GCSF and SCF was administrated by subcutaneous injection. Rats were killed 24 h after modeling. Isolated hearts from rats were mounted on a Longendorff apparatus to estimate left ventricular systolic and diastolic functions. The expression of Fas mRNA and the activity of caspase3 in myocardium were detected. Frozen myocardium was analyzed by highpressure liquid chromatography for the concentration of adenosine triphosphate (ATP). Double immunofluorescence was employed for the expressions of αSarcomeric actin and CD44. RESULTS: Compared with the high altitude groups, the left ventricular function of SIRS rat was better in low altitude groups (P<0.05). Compared with the GCSF and SCF groups, the left ventricular function was decreased (P<0.05), the concentration of myocardial ATP were lower (P<0.05), the expression level of Fas mRNA and the activity of caspase3 were higher in GCSF and SCF noapplied groups (P<0.01). Myocardial cell specific protein αSarcomeric actin and MSCs specific protein CD44 were positive in GCSF and SCF groups. CONCLUSION: Through applying GCSF and SCF, MSCs were mobilized into the myocardium and induced to differentiate into myocardial cells in SIRS rat. GCSF and SCF may present the protection on myocardium of SIRS rat at different altitudes.
【Keywords】 systemic inflammatory response syndrome; myocardium; GCSF; SCF; marrow stromal cells
【摘要】 目的: 应用粒细胞集落刺激因子(GCSF)和干细胞因子(SCF)，联合动员骨髓基质干细胞(MSCs)探讨在不同海平面发生高原急性全身炎性反应综合征(SIRS)中大鼠心肌的治疗作用. 方法: 分别在海拔三个梯度(50，1510，3900 m)建立大鼠两次打击SIRS模型. 建立模型前应用重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)和重组人干细胞因子(rhSCF)，建立模型后24 h处死大鼠，取心肌标本，利用离体鼠心非循环式Langendorff 灌流功能测定模型，测定左心室收缩及舒张期功能；利用高压液相色谱仪检测心肌线粒体三磷酸腺苷(ATP). 检测心肌中Fas mRNA和Caspase3的表达. 应用激光共聚焦显微镜观察MSCs在心肌内的分化再生的情况. 结果: 在低海平面发生SIRS的大鼠，心功能较高海平面的大鼠明显增高. 在联合应用GCSF和SCF后，在不同海平面发生SIRS的大鼠心肌收缩及舒张期功能较未用组增高明显，心肌组织ATP含量增高，心肌细胞凋亡数量减少，心肌组织中Fas mRNA和Caspase3的表达下降，同时可见MSCs向心肌细胞分化. 结论: 联合应用GCSF和SCF后可以提高发生 SIRS大鼠的心功能. 其机制与动员MSCs修复坏死的心肌组织有关.
【关键词】 全身炎性反应综合征；心肌；粒细胞集落刺激因子; 干细胞因子；骨髓基质干细胞
0 引言
全身炎性反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)是机体释放内源性介质引起的全身性炎症反应， SIRS继续发展可以导致多脏器功能不全综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS )的发生. 以高原低氧为轴心的高原环境暴露因素是SIRS/ MODS发生发展的分子启动环节和敏感诱因[1]. 目前有关联合应用粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,GCSF)和干细胞因子( stem cell factor, SCF)是否能够动员骨髓基质干细胞(marrow stromal cells, MSCs)向心肌细胞的分化，保护心脏功能的研究报道较少. 本实验利用在不同海平面SIRS/ MODS动物模型，观察联合应用GCSF和SCF以动员自体MSCs进行“自我移植”，对不同海平面环境中发生急性SIRS/ MODS动物心肌的影响，旨在为进一步探讨防治方案提供依据.
1 材料和方法
1.1材料
健康成年雄性Wistar大鼠， 体质量250~350 g，由济南军区总医院实验动物科提供18只，兰州军区总医院实验动物科提供36只. 重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF),上海三维生物技术有限公司；注射用重组人干细胞因子(rhSCF),美国Amgen 公司；高效液相色谱仪,美国Waters公司；TUNEL原位末端标记试剂盒,美国Interge公司；PCR引物由上海生工生物有限公司合成; 兔抗大鼠CD44IgG，小鼠抗大鼠心肌α横纹肌肌动蛋白IgG(αSarcomeric actin)，羊抗兔IgGBiotin和羊抗小鼠IgGBiotin，荧光FITCAvidin和CY3Avidin,均购自武汉博士德生物工程有限公司；Caspase3荧光分析试剂盒,美国Clontech公司.
1.2方法
1.2.1实验分组
按实验海拔高度分为A，B，C三个大组. A大组在马汉山梯度(海拔3900 m)，B大组在兰州梯度(海拔1510 m)，C大组在济南梯度(海拔50 m). 每个大组再按实验动物是否在实验前注射rhGCSF和rhSCF(皮下注射rhGCSF 20 μg/kg, 2次/d; rhSCF 20 μg/kg, 2次/d,共14 d[2])，分为实验组和对照组两个小组. 所有动物均在实验后24 h处死，每个小组大鼠为9只.
1.2.2SIRS/ MODS动物模型的建立及心功能的测定
实验前大鼠被禁食12 h. 大鼠经氯胺酮麻醉(20 mg/kg)，仰卧位固定于手术台上，常规消毒，解剖股动静脉或颈动静脉，按照文献[1]的方法制作大鼠低血压休克复苏模型. 24 h后大鼠腹腔注射内毒素5 mg/kg ( O55:B5 Sigma)，而后将动物在24 h后处死，将大鼠心脏迅速移至Langendorff灌注装置上，测定左心室舒张期末压(LVEDP)，左心室收缩期末压(LVESP)，左心室压力变化率(dp/dtmax,dp/dtmin).
1.2.3心肌三磷酸腺苷(ATP)测定
采用高效液相色谱仪. 称取心肌组织，匀浆，高速离心，取上清液20 μL进高效液相色谱仪分析.
1.2.4凋亡细胞的原位末端标记(TUNEL)及分析
按TUNEL原位末端标记试剂盒说明进行染色. 结果判断：光镜下正常心肌细胞核呈蓝色，凋亡细胞核呈深浅不一的棕色，即阳性细胞. 每张切片选择5个视野，每个视野计算200个细胞中阳性细胞数，计算阳性细胞所占的百分比作为细胞凋亡指数(apoptosis index，AI).
1.2.5Fas基因mRNA表达的检测及半定量分析
采用RTPCR检测心肌中Fas及βactin(作为内对照)的mRNA表达变化，扩增Fas的引物序列: 上游引物 5′ CCAGGGACTGATAGCATCTTTGAGG 3′，下游引物 5′ TGTGAAAGTCCTGAACCCTAAGG 3′；βactin上游引物 5′ TCATGAAGTGTGACATCG 3′，下游引物 5′ AAACTGCACGTGTGTAAAC 3′. Fas扩增片段的长度为436 bp，βactin扩增长度为289 bp. 经密度扫描仪扫描分析结果，以Fas/βactin积分比值反映心肌细胞Fas mRNA表达指标.
1.2.6心肌Caspase3活性测定
按Caspase3荧光分析试剂盒操作说明进行检测. 绘制标准曲线，计算Caspase3活性.
1.2.7心肌细胞免疫荧光检测
取心肌的冰冻切片，分别随机在马汉山梯度两组中各选择10张做双重免疫荧光标记染色，检测CD44和心肌α横约肌肌动蛋白的表达. 一抗为兔抗大鼠CD44IgG，小鼠抗大鼠α横约肌肌动蛋白IgG；二抗为羊抗兔IgGBiotin和羊抗小鼠IgGBiotin；三抗为荧光FITCAvidin和CY3Avidin. 激光共聚焦显微镜观察心肌细胞CD44 (绿色)和α横约肌肌动蛋白(红色)的荧光着色，检测是否有新生心肌细胞.
统计学处理：实验数据均以x±s表示，采用析因设计的方差分析，应用SPSS 11.0软件处理分析.
2 结果
2.1心功能的变化
结果显示，注射GCSF和SCF的各实验组中反应左心室收缩功能指标LVESP和+dp/dtmax均较对照组明显增高；而反应左室舒张功能指标LVEDP和dp/dtmax均较对照组低(表1).
2.2心肌三磷酸腺苷变化
各组发生高原急性SIRS/ MOD的大鼠心肌组织中ATP的含量： A大组实验组为(249.27±48.12) μg/g， 对照组为(152.65±43.22) μg/g； B大组实验组为(343.57±49.64) μg/g， 对照组为(297.95±62.35) μg/g； C大组实验组为(479.36±58.62) μg/g， 对照组为(409.25±49.25) μg/g. 注射GCSF和SCF的实验组大鼠心肌组织ATP的含量较对照组高(P<0.05)， C大组实验组大鼠心肌组织ATP的含量较A大组的大鼠高(P<0.05).
2.3心肌细胞凋亡变化与对照组比较
实验组心肌细胞凋亡指数均显著减少(P<0.01)，心肌细胞Fas mRNA表达均显著性下降(P<0.01)，心肌Caspase3活性明显降低(P<0.01)，C大组心肌细胞凋亡数量最低，B大组次之，A大组心肌细胞凋亡数量最多(表2).表1各组大鼠LVESP，LVEDP和±dp/dtmax的变化(略)表2心肌细胞凋亡指数,Fas mRNA表达及Caspase3活性(略)
2.4免疫荧光标记染色
动员MSCs 14 d后，实验组同一心肌切片中可见较多的心肌α横纹肌肌动蛋白和CD44双重荧光染色的呈阳性，而对照组心肌细胞无明显的CD44显色. 说明实验组动员MSCs向心肌细胞分化(图1).
3 讨论
SIRS/MODS是多因素诱发的临床综合征，发病机制复杂. SIRS/MODS双相打击模型充分反映了SIRS/MODS的临床特征[2]. 本实验中，大鼠注射内毒素后出现毛发颜色枯黄紊乱，动物食欲下降、烦躁、呼吸急促，部分伴有颤抖，约4～5 h后出现精神萎靡，反应迟钝，活动明显减少.
急进高原后发生SIRS/MODS，炎性介质可诱导心肌细胞表面Fas表达增加，激活Caspase3而导致细胞凋亡[3]. 本试验结果显示，低海拔平面进行实验的大鼠心功能均较高海拔平面的大鼠为增高，心肌细胞凋亡数量减少.
MSCs可以向心肌细胞分化，同周围宿主细胞形成功能合胞体[4]. GCSF和SCF是MSCs强有力的动员剂，可以大幅度的提高外周血MSCs的水平，使其迁移到心肌组织，分化为功能心肌细胞[5]. 本实验结果表明，经过GCSF和SCF动员后，可提高发生在不同海平面SIRS/ MODS的大鼠心功能，心肌组织ATP含量增高，心肌组织Fas mRNA表达下降，大鼠心肌Caspase3活性减低，心肌细胞凋亡数量减少. 心肌内有一些细胞既呈现MSCs特有的CD44阳性，又呈现心肌细胞特有的α横约肌肌动蛋白阳性，这提示可能为自体的MSCs分化成为心肌细胞，使功能细胞增多，减少心室重构所致.A: CD44阳性(绿色) ；B: α横纹肌肌动蛋白 (红色)；C: α横纹肌肌动蛋白和CD44共同显色.
【参考文献】
[1]West JB. The physiologic basis of highaltitude diseases[J]. Ann Intern Med, 2004，141(10):789-800.
[2]Wells CL, Hess DJ, Erlandsen SL. Impact of the indigenous flora in animal models of shock and sepsis[J]. Shock，2004，22(6): 562-568.
[3]Freitas I, Fernandez M, Essenfeld SE, et al. Serum levels of the apoptosisassociated molecules, tumor necrosis factoralpha/tumor necrosis factor typeI receptor and Fas/FasL, in sepsis[J].Chest ，2004，125(6):2238-2246.
[4]张勇，陈如坤. 兔缺血心肌中移植自体骨髓基质干细胞的治疗作用[J]. 第四军医大学学报，2006，27(11)：1986-1988.
[5]Kang HJ, Lee HY, Na SH, et al. Differential effect of intracoronary infusion of mobilized peripheral blood stem cells by granulocyte colonystimulating factor on left ventricular function remodeling in patients with acute myocardial infarction versus old myocardial infarction: The MAGIC Cell3DES randomized, controlled trial[J]. Circulation，2006，114(1):I145-151.
济南军区总医院：1心血管外科，2超声诊断科，山东 济南 250031
基金项目：全军医药卫生“十一五”科研项目(06MA102), 百拇医药(张勇，王惠，梁家立，姜冠华，郑晓舟，杨哲，张波)
ZHANG Yong, WANG Hui, LIANG JiaLi, JIANG GuanHua, ZHENG XiaoZhou, YANG Zhe, ZHANG Bo
1Department of Cardiovascular Surgery
2Department of Ultrasound Diagnosis, Jinan General Hospital, Jinan Military Area Command, Jinan 250031, China
【Abstract】 AIM: To study the therapeutical effect on myocardium in systemic inflammatory response syndrome (SIRS) rat at different altitudes through mobilizing marrow stem cells (MSCs) by applying granulocyte colony stimulating factor (GCSF) and stem cell factor (SCF). METHODS: The twohit models of SIRS rats were established at three different altitudes (50, 1510, 3900 m). Before modeling, GCSF and SCF was administrated by subcutaneous injection. Rats were killed 24 h after modeling. Isolated hearts from rats were mounted on a Longendorff apparatus to estimate left ventricular systolic and diastolic functions. The expression of Fas mRNA and the activity of caspase3 in myocardium were detected. Frozen myocardium was analyzed by highpressure liquid chromatography for the concentration of adenosine triphosphate (ATP). Double immunofluorescence was employed for the expressions of αSarcomeric actin and CD44. RESULTS: Compared with the high altitude groups, the left ventricular function of SIRS rat was better in low altitude groups (P<0.05). Compared with the GCSF and SCF groups, the left ventricular function was decreased (P<0.05), the concentration of myocardial ATP were lower (P<0.05), the expression level of Fas mRNA and the activity of caspase3 were higher in GCSF and SCF noapplied groups (P<0.01). Myocardial cell specific protein αSarcomeric actin and MSCs specific protein CD44 were positive in GCSF and SCF groups. CONCLUSION: Through applying GCSF and SCF, MSCs were mobilized into the myocardium and induced to differentiate into myocardial cells in SIRS rat. GCSF and SCF may present the protection on myocardium of SIRS rat at different altitudes.
【Keywords】 systemic inflammatory response syndrome; myocardium; GCSF; SCF; marrow stromal cells
【摘要】 目的: 应用粒细胞集落刺激因子(GCSF)和干细胞因子(SCF)，联合动员骨髓基质干细胞(MSCs)探讨在不同海平面发生高原急性全身炎性反应综合征(SIRS)中大鼠心肌的治疗作用. 方法: 分别在海拔三个梯度(50，1510，3900 m)建立大鼠两次打击SIRS模型. 建立模型前应用重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)和重组人干细胞因子(rhSCF)，建立模型后24 h处死大鼠，取心肌标本，利用离体鼠心非循环式Langendorff 灌流功能测定模型，测定左心室收缩及舒张期功能；利用高压液相色谱仪检测心肌线粒体三磷酸腺苷(ATP). 检测心肌中Fas mRNA和Caspase3的表达. 应用激光共聚焦显微镜观察MSCs在心肌内的分化再生的情况. 结果: 在低海平面发生SIRS的大鼠，心功能较高海平面的大鼠明显增高. 在联合应用GCSF和SCF后，在不同海平面发生SIRS的大鼠心肌收缩及舒张期功能较未用组增高明显，心肌组织ATP含量增高，心肌细胞凋亡数量减少，心肌组织中Fas mRNA和Caspase3的表达下降，同时可见MSCs向心肌细胞分化. 结论: 联合应用GCSF和SCF后可以提高发生 SIRS大鼠的心功能. 其机制与动员MSCs修复坏死的心肌组织有关.
【关键词】 全身炎性反应综合征；心肌；粒细胞集落刺激因子; 干细胞因子；骨髓基质干细胞
0 引言
全身炎性反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)是机体释放内源性介质引起的全身性炎症反应， SIRS继续发展可以导致多脏器功能不全综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS )的发生. 以高原低氧为轴心的高原环境暴露因素是SIRS/ MODS发生发展的分子启动环节和敏感诱因[1]. 目前有关联合应用粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,GCSF)和干细胞因子( stem cell factor, SCF)是否能够动员骨髓基质干细胞(marrow stromal cells, MSCs)向心肌细胞的分化，保护心脏功能的研究报道较少. 本实验利用在不同海平面SIRS/ MODS动物模型，观察联合应用GCSF和SCF以动员自体MSCs进行“自我移植”，对不同海平面环境中发生急性SIRS/ MODS动物心肌的影响，旨在为进一步探讨防治方案提供依据.
1 材料和方法
1.1材料
健康成年雄性Wistar大鼠， 体质量250~350 g，由济南军区总医院实验动物科提供18只，兰州军区总医院实验动物科提供36只. 重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF),上海三维生物技术有限公司；注射用重组人干细胞因子(rhSCF),美国Amgen 公司；高效液相色谱仪,美国Waters公司；TUNEL原位末端标记试剂盒,美国Interge公司；PCR引物由上海生工生物有限公司合成; 兔抗大鼠CD44IgG，小鼠抗大鼠心肌α横纹肌肌动蛋白IgG(αSarcomeric actin)，羊抗兔IgGBiotin和羊抗小鼠IgGBiotin，荧光FITCAvidin和CY3Avidin,均购自武汉博士德生物工程有限公司；Caspase3荧光分析试剂盒,美国Clontech公司.
1.2方法
1.2.1实验分组
按实验海拔高度分为A，B，C三个大组. A大组在马汉山梯度(海拔3900 m)，B大组在兰州梯度(海拔1510 m)，C大组在济南梯度(海拔50 m). 每个大组再按实验动物是否在实验前注射rhGCSF和rhSCF(皮下注射rhGCSF 20 μg/kg, 2次/d; rhSCF 20 μg/kg, 2次/d,共14 d[2])，分为实验组和对照组两个小组. 所有动物均在实验后24 h处死，每个小组大鼠为9只.
1.2.2SIRS/ MODS动物模型的建立及心功能的测定
实验前大鼠被禁食12 h. 大鼠经氯胺酮麻醉(20 mg/kg)，仰卧位固定于手术台上，常规消毒，解剖股动静脉或颈动静脉，按照文献[1]的方法制作大鼠低血压休克复苏模型. 24 h后大鼠腹腔注射内毒素5 mg/kg ( O55:B5 Sigma)，而后将动物在24 h后处死，将大鼠心脏迅速移至Langendorff灌注装置上，测定左心室舒张期末压(LVEDP)，左心室收缩期末压(LVESP)，左心室压力变化率(dp/dtmax,dp/dtmin).
1.2.3心肌三磷酸腺苷(ATP)测定
采用高效液相色谱仪. 称取心肌组织，匀浆，高速离心，取上清液20 μL进高效液相色谱仪分析.
1.2.4凋亡细胞的原位末端标记(TUNEL)及分析
按TUNEL原位末端标记试剂盒说明进行染色. 结果判断：光镜下正常心肌细胞核呈蓝色，凋亡细胞核呈深浅不一的棕色，即阳性细胞. 每张切片选择5个视野，每个视野计算200个细胞中阳性细胞数，计算阳性细胞所占的百分比作为细胞凋亡指数(apoptosis index，AI).
1.2.5Fas基因mRNA表达的检测及半定量分析
采用RTPCR检测心肌中Fas及βactin(作为内对照)的mRNA表达变化，扩增Fas的引物序列: 上游引物 5′ CCAGGGACTGATAGCATCTTTGAGG 3′，下游引物 5′ TGTGAAAGTCCTGAACCCTAAGG 3′；βactin上游引物 5′ TCATGAAGTGTGACATCG 3′，下游引物 5′ AAACTGCACGTGTGTAAAC 3′. Fas扩增片段的长度为436 bp，βactin扩增长度为289 bp. 经密度扫描仪扫描分析结果，以Fas/βactin积分比值反映心肌细胞Fas mRNA表达指标.
1.2.6心肌Caspase3活性测定
按Caspase3荧光分析试剂盒操作说明进行检测. 绘制标准曲线，计算Caspase3活性.
1.2.7心肌细胞免疫荧光检测
取心肌的冰冻切片，分别随机在马汉山梯度两组中各选择10张做双重免疫荧光标记染色，检测CD44和心肌α横约肌肌动蛋白的表达. 一抗为兔抗大鼠CD44IgG，小鼠抗大鼠α横约肌肌动蛋白IgG；二抗为羊抗兔IgGBiotin和羊抗小鼠IgGBiotin；三抗为荧光FITCAvidin和CY3Avidin. 激光共聚焦显微镜观察心肌细胞CD44 (绿色)和α横约肌肌动蛋白(红色)的荧光着色，检测是否有新生心肌细胞.
统计学处理：实验数据均以x±s表示，采用析因设计的方差分析，应用SPSS 11.0软件处理分析.
2 结果
2.1心功能的变化
结果显示，注射GCSF和SCF的各实验组中反应左心室收缩功能指标LVESP和+dp/dtmax均较对照组明显增高；而反应左室舒张功能指标LVEDP和dp/dtmax均较对照组低(表1).
2.2心肌三磷酸腺苷变化
各组发生高原急性SIRS/ MOD的大鼠心肌组织中ATP的含量： A大组实验组为(249.27±48.12) μg/g， 对照组为(152.65±43.22) μg/g； B大组实验组为(343.57±49.64) μg/g， 对照组为(297.95±62.35) μg/g； C大组实验组为(479.36±58.62) μg/g， 对照组为(409.25±49.25) μg/g. 注射GCSF和SCF的实验组大鼠心肌组织ATP的含量较对照组高(P<0.05)， C大组实验组大鼠心肌组织ATP的含量较A大组的大鼠高(P<0.05).
2.3心肌细胞凋亡变化与对照组比较
实验组心肌细胞凋亡指数均显著减少(P<0.01)，心肌细胞Fas mRNA表达均显著性下降(P<0.01)，心肌Caspase3活性明显降低(P<0.01)，C大组心肌细胞凋亡数量最低，B大组次之，A大组心肌细胞凋亡数量最多(表2).表1各组大鼠LVESP，LVEDP和±dp/dtmax的变化(略)表2心肌细胞凋亡指数,Fas mRNA表达及Caspase3活性(略)
2.4免疫荧光标记染色
动员MSCs 14 d后，实验组同一心肌切片中可见较多的心肌α横纹肌肌动蛋白和CD44双重荧光染色的呈阳性，而对照组心肌细胞无明显的CD44显色. 说明实验组动员MSCs向心肌细胞分化(图1).
3 讨论
SIRS/MODS是多因素诱发的临床综合征，发病机制复杂. SIRS/MODS双相打击模型充分反映了SIRS/MODS的临床特征[2]. 本实验中，大鼠注射内毒素后出现毛发颜色枯黄紊乱，动物食欲下降、烦躁、呼吸急促，部分伴有颤抖，约4～5 h后出现精神萎靡，反应迟钝，活动明显减少.
急进高原后发生SIRS/MODS，炎性介质可诱导心肌细胞表面Fas表达增加，激活Caspase3而导致细胞凋亡[3]. 本试验结果显示，低海拔平面进行实验的大鼠心功能均较高海拔平面的大鼠为增高，心肌细胞凋亡数量减少.
MSCs可以向心肌细胞分化，同周围宿主细胞形成功能合胞体[4]. GCSF和SCF是MSCs强有力的动员剂，可以大幅度的提高外周血MSCs的水平，使其迁移到心肌组织，分化为功能心肌细胞[5]. 本实验结果表明，经过GCSF和SCF动员后，可提高发生在不同海平面SIRS/ MODS的大鼠心功能，心肌组织ATP含量增高，心肌组织Fas mRNA表达下降，大鼠心肌Caspase3活性减低，心肌细胞凋亡数量减少. 心肌内有一些细胞既呈现MSCs特有的CD44阳性，又呈现心肌细胞特有的α横约肌肌动蛋白阳性，这提示可能为自体的MSCs分化成为心肌细胞，使功能细胞增多，减少心室重构所致.A: CD44阳性(绿色) ；B: α横纹肌肌动蛋白 (红色)；C: α横纹肌肌动蛋白和CD44共同显色.
【参考文献】
[1]West JB. The physiologic basis of highaltitude diseases[J]. Ann Intern Med, 2004，141(10):789-800.
[2]Wells CL, Hess DJ, Erlandsen SL. Impact of the indigenous flora in animal models of shock and sepsis[J]. Shock，2004，22(6): 562-568.
[3]Freitas I, Fernandez M, Essenfeld SE, et al. Serum levels of the apoptosisassociated molecules, tumor necrosis factoralpha/tumor necrosis factor typeI receptor and Fas/FasL, in sepsis[J].Chest ，2004，125(6):2238-2246.
[4]张勇，陈如坤. 兔缺血心肌中移植自体骨髓基质干细胞的治疗作用[J]. 第四军医大学学报，2006，27(11)：1986-1988.
[5]Kang HJ, Lee HY, Na SH, et al. Differential effect of intracoronary infusion of mobilized peripheral blood stem cells by granulocyte colonystimulating factor on left ventricular function remodeling in patients with acute myocardial infarction versus old myocardial infarction: The MAGIC Cell3DES randomized, controlled trial[J]. Circulation，2006，114(1):I145-151.
济南军区总医院：1心血管外科，2超声诊断科，山东 济南 250031
基金项目：全军医药卫生“十一五”科研项目(06MA102), 百拇医药(张勇，王惠，梁家立，姜冠华，郑晓舟，杨哲，张波)