应用抗体捕捉ELISA法检测流行性出血热患者血浆特异性IgM抗体
作者：张天明 杨占秋 张美英 向近敏
单位：湖北医学院病毒研究所*
关键词：
中华医学杂志900119
近年来，国内对流行性出血热(EHF)患者血清和尿液中特异性抗体的检测已有报道。为了探讨EHF患者血浆中特异性IgM抗体的情况，我们应用抗体捕捉ELISA法对135例经临床诊断和血清特异性IgM抗体检测而确诊的EHF患者509份血浆进行了IgM抗体的检测，结果如下。
1.抗体捕捉ELISA法的基本步骤：将羊抗人IgM(u链特异性抗体)用0.1mol/pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)作1∶500稀释，包被96孔聚氯乙烯微量反应板，4°C过夜，以0.1mol/pH7.4PBS(含0.1%Tween-20)洗3次：加待检血浆标本(0.01mol pH7.4PBS含0.1%Tween, 5%胎牛血清作1：100稀释)，同时设阳性血清、正常人血清、血浆对照，37°C1小时，按上法洗3次；加灭活EHF抗原(阴性抗原平行对照)、加1/1000兔抗EHF抗体.加1/1000酶标羊抗兔IgG结合物，每次加入后，均置37°C1小时，洗3次：加底物(系2，2-azino-di-[3-ethlbenzthlazoline-Sulfonate和H2O2等量混合])，37°C30分钟后观察结果。抗体阳性时为绿色，阴性时无颜色改变。也可在酶标仪上读取结果。
2.结果与讨论：从第2病日起血浆中就可检出EHF特异性IgM抗体，检出率为75%(3/4)，第2～5病日的检出率为96%(77/80)，从第6病日起，检出率为100%，即135例患者血浆此时均可测出EHF IgM，与血清检测结果一致。32例正常人血浆未检出EHF IgM抗体。将509份血浆按病期分析发现：发热期检出率为96%，而低血压期、少尿期、移行期、多尿期、恢复期的检测标本数分别为8、15、28、324、51份，检出率均为100%，即在509份标本中有506份可检出EHF IgM抗体，检出率为99%。本结果说明采用此法检测EHF患者血浆中特异性IGM搞具有特异性强、敏感性高等优点，且不需特殊设备，适用于基层医院推广应用，以达到快速早期诊断，便于病人就地给予及时治疗。
(1989年1月31日收稿 同年9月20日修回), 百拇医药
单位：湖北医学院病毒研究所*
关键词：
中华医学杂志900119
近年来，国内对流行性出血热(EHF)患者血清和尿液中特异性抗体的检测已有报道。为了探讨EHF患者血浆中特异性IgM抗体的情况，我们应用抗体捕捉ELISA法对135例经临床诊断和血清特异性IgM抗体检测而确诊的EHF患者509份血浆进行了IgM抗体的检测，结果如下。
1.抗体捕捉ELISA法的基本步骤：将羊抗人IgM(u链特异性抗体)用0.1mol/pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)作1∶500稀释，包被96孔聚氯乙烯微量反应板，4°C过夜，以0.1mol/pH7.4PBS(含0.1%Tween-20)洗3次：加待检血浆标本(0.01mol pH7.4PBS含0.1%Tween, 5%胎牛血清作1：100稀释)，同时设阳性血清、正常人血清、血浆对照，37°C1小时，按上法洗3次；加灭活EHF抗原(阴性抗原平行对照)、加1/1000兔抗EHF抗体.加1/1000酶标羊抗兔IgG结合物，每次加入后，均置37°C1小时，洗3次：加底物(系2，2-azino-di-[3-ethlbenzthlazoline-Sulfonate和H2O2等量混合])，37°C30分钟后观察结果。抗体阳性时为绿色，阴性时无颜色改变。也可在酶标仪上读取结果。
2.结果与讨论：从第2病日起血浆中就可检出EHF特异性IgM抗体，检出率为75%(3/4)，第2～5病日的检出率为96%(77/80)，从第6病日起，检出率为100%，即135例患者血浆此时均可测出EHF IgM，与血清检测结果一致。32例正常人血浆未检出EHF IgM抗体。将509份血浆按病期分析发现：发热期检出率为96%，而低血压期、少尿期、移行期、多尿期、恢复期的检测标本数分别为8、15、28、324、51份，检出率均为100%，即在509份标本中有506份可检出EHF IgM抗体，检出率为99%。本结果说明采用此法检测EHF患者血浆中特异性IGM搞具有特异性强、敏感性高等优点，且不需特殊设备，适用于基层医院推广应用，以达到快速早期诊断，便于病人就地给予及时治疗。
(1989年1月31日收稿 同年9月20日修回), 百拇医药