用PCR技术研究缺氧时肾上腺素能β2受体mRNA的变化
作者：王节发 薛全福 刘敬忠 王晓芳 王立荣
单位：100005北京中国医学科学院基础医学研究所病理生理研究室(王节发、薛全福、王晓芳、王立荣)、生物化学及分子生物研究室(刘敬忠)
关键词：
我们运用PCR 我们运用PCR(polymerase chain reaction)技术和液体闪烁测量(liquid scintilation counting)技术，分析缺氧时β2受体基因表达水平即mRNA的变化。按薛全福报道的方法复制常压缺氧肺动脉高压模型。用放射性配基结合法测定大鼠肺β、β1、β2受体的动态变化规律。实验结果表明，缺氧2周、4周时大鼠肺β受体都明显下降(分别为对照的62.2%、63.1%，P<0.001)。其中β2受体下降明显(分别为对照的38.6%、21.9%.P<0.001))；缺氧2周和4周相比P<0.001)，不分布于肺血管的β1受体反而呈上升的变化，说明缺氧所致β受体的下降，主要是β2受体的下降。缺氧前后β、β1、β2受体的亲和力(kd)均无变化。用异琉氰酸胍—苯酚—氯仿法提取大鼠肺组织总RNA；按照β2受体基因序列，合成一对引物；用总RNA进行逆转录反应；然后进行PCR反应。在PCR反应过程中，掺入α-32P-dATP，产物经电泳后切下含有特异性条带的凝胶，用液闪仪测量其放射性以CPM表示，用以后映β2受体mRNA水平的高低。实验结果表明，缺氧2周时β2受体mRNA水平与正常对照相比不变(为对照的102%)；而缺氧4周时β2受体mRNA水平明显下降(为对照的42%，P<0.001)。提示缺氧4周时β2受体mRNA表达水平下降与β2受体数目大幅度下降有关。缺氧时大鼠肺β2受体mRNA的时相性变化对肺动脉高压的加重和肺心病的形成机理提供新的认识。
(收稿：1992-06-24), 百拇医药
单位：100005北京中国医学科学院基础医学研究所病理生理研究室(王节发、薛全福、王晓芳、王立荣)、生物化学及分子生物研究室(刘敬忠)
关键词：
我们运用PCR 我们运用PCR(polymerase chain reaction)技术和液体闪烁测量(liquid scintilation counting)技术，分析缺氧时β2受体基因表达水平即mRNA的变化。按薛全福报道的方法复制常压缺氧肺动脉高压模型。用放射性配基结合法测定大鼠肺β、β1、β2受体的动态变化规律。实验结果表明，缺氧2周、4周时大鼠肺β受体都明显下降(分别为对照的62.2%、63.1%，P<0.001)。其中β2受体下降明显(分别为对照的38.6%、21.9%.P<0.001))；缺氧2周和4周相比P<0.001)，不分布于肺血管的β1受体反而呈上升的变化，说明缺氧所致β受体的下降，主要是β2受体的下降。缺氧前后β、β1、β2受体的亲和力(kd)均无变化。用异琉氰酸胍—苯酚—氯仿法提取大鼠肺组织总RNA；按照β2受体基因序列，合成一对引物；用总RNA进行逆转录反应；然后进行PCR反应。在PCR反应过程中，掺入α-32P-dATP，产物经电泳后切下含有特异性条带的凝胶，用液闪仪测量其放射性以CPM表示，用以后映β2受体mRNA水平的高低。实验结果表明，缺氧2周时β2受体mRNA水平与正常对照相比不变(为对照的102%)；而缺氧4周时β2受体mRNA水平明显下降(为对照的42%，P<0.001)。提示缺氧4周时β2受体mRNA表达水平下降与β2受体数目大幅度下降有关。缺氧时大鼠肺β2受体mRNA的时相性变化对肺动脉高压的加重和肺心病的形成机理提供新的认识。
(收稿：1992-06-24), 百拇医药