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编号:10226711
粒单核细胞系统特异性单克隆抗体的制备及应用
http://www.100md.com 《中国医学杂志》 1994年第4期
     作者:汤永民 郭淑芬 徐淑芝 沈红强

    单位:310003 杭州,浙江医科大学附属儿童医院白血病研究室

    关键词:

    中华医学杂志940419.htm 本课题为国家自然科学基金资助项目

    单克隆抗体(单抗)在白血病诊断分型中已显示出越来越重要的作用。最近,我们研制出一种广谱粒细胞、单核细胞系统特异性单抗,命名为ZCH4F8,并对其生物学特性及其在白血病诊断分型中的作用进行了研究。

    一、资料与方法

    1.4F8单抗的制备:以髓细胞/淋巴细胞(双克隆)混合型急性白血病(HAL)复发时的白血病细胞(已转变为TdT+急性单核细胞性白血病,其表现为HLA-DR+,CD+13,CD+33,TdT+,CD-19,CD-10,CD-7,CD-41α)作为免疫原,应用鼠-鼠杂交瘤方法,经3次克隆化及8个多月的连续传代培养的反复冻融,建立了能持续稳定分泌4F8单抗的杂交瘤细胞株。
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    2.人细胞系:早幼粒细胞白血病(HL60)、红白血病(K562)、原始单核细胞白血病(U937);Raji、B细胞淋巴瘤(Daudi);大肠癌(SW)、肝癌(Alexander);羊膜上皮细胞(EL)。

    3.正常细胞成分:外周血中性粒、单核细胞,T、B淋巴细胞,红细胞和血小板的分离,经引产胚胎(18周龄)肝、脾和胸腺细胞以及成人骨髓单个核细胞(MNC)按常规制备。

    4.补体介导细胞毒试验及琼脂双扩散试验。

    5.识别抗原分子量测定:按Westernblot法和酶标显色法进行。

    6.病例:1990年2月-1992年6月本院及外院送检细胞表面标记的白血病病例共130例。其中儿童82例,成人48例;初诊125例,复发5例;急性白血病(急白)122例,慢性白血病(慢白)8例。
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    7.标本:化疗前采骨髓或静脉血,肝素钠抗凝。急白病例MNC中幼稚细胞均在80%以上。

    8.细胞表面标记检查:按本院常规间接免疫荧光法进行。所用标准单抗包括CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD20、CD25、CD28、CD71和HLA-DR由日本松尾良信先生惠赠;CD1、CD7、CD9、CD13、CD14、CD15、CD19、CD33、CD38、CD41α、HIM4、HIM5购自中国医学科学院血液学研究所;CD11C、CD68由联邦德国Lennert教授惠赠。以阳性细胞数>20%为阳性。

    二、结果及讨论

    1.4F8与细胞系的反应性:4F8只与髓系细胞系HL60(85%,荧光强度++-+++)、K562(90%,++-+++)和U937(92%,++)细胞反应,而不与Raji、Daudi、Alexander、SW和EL细胞反应,说明4F8识别髓系相关性抗原。
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    2.4F8与正常造血组织细胞的反应性:4F8主要与骨髓MNC(68.6%)和外周血中性粒细胞(81.7%)、单核细胞(84.3%)及胎肝细胞(44.1%)反应,而不与其他细胞成分反应,进一步说明4F8主要识别粒、单核系相关抗原。

    3.4F8的免疫球蛋白(Ig)亚类和固定补体的能力:琼脂双扩散试验示4F8属于IgG1。补体介导细胞毒试验提示4F8无固定补体的能力。

    4.4F8所识别的抗原分子量:4F8识别3条分子量分别为75000d+97000d+130000d的蛋白区带。

    5.4F8与白血病细胞的反应性:

    在各种急、慢性白血病病例中的阳性分布:共检测了130例白血病细胞,4F8+者67例(51.5%)39例急性髓系白血病(AML)中,阳性者37例(94.9%),阳性细胞数为22%-95%,阳性强度为+-+++,多数为++,阳性细胞数在50%以上者占78.4%(29/37);阴性2例中,M56(17.1%;CD33为14.5%)和M7(0%)各1例。55例急性淋巴细胞白血病(ALL,免疫分型:μALL10例,cALL31例,前-BALL1例,B-ALL2例,T-ALL8例及T/CALL3例)和2例成熟B细胞型慢白(毛细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病各1例)均阴性,15例淋/髓HAL中,13例阴性(24.8%-92.7%,+-++);2例阴性,CD33也阴性。6例慢性粒细胞白血病(CML,含急单变和髓/B祖细胞双表型急白变各1例)全部阳性(63.4%-90%,++-+++)。11/13例急性未分化型白血病(AUL)阳性(40%-95%,+-+++)。
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    与主要髓系单抗对非淋巴系急白的反应性比较:结果表明4F8与61/67(91%)例非淋巴系急白病例反应,明显高于CD13(13/65,P<0.01)、CD14(12/64,P<0.005)和CD15(26/55,P<0.01)的阳性例数,但与CD33的阳性病例数(57/67)间的差异无显著意义(P>0.05)。然而,经逐例对照比较发现:CD33的3例M2(5%,1%,1%)和1例M4(0%),4F8则呈阳性(57.2%,73.6%,21.2%和70%);而CD+33(95%)的1例M7却不与4F8反应(0%),说明4F8在识别粒、单核系白血病方面比CD-33更具特异性。

    我们的研究结果还表明,4F8能识别所有定向于粒、单核系的低分化型AML-MO[Br J Haematol 1991, 78 : 325],与CD-33类似。

    目前认为,髓系特异性单抗主要有CD-33、CD13、CD14、CD41,其中仅CD-33和CD13与较多的AML病例反应,阳性率分别为41%-66%和53%-85%,这是当前国际上用以鉴别ALL和AML包括MO的有力工具。我们的结果表明,4F8反应谱与CD33类似,是一种广谱粒、单核系特异性单抗,对AML特别是低分化型的诊断和鉴别具有重要作用。

    (收稿:1992-11-12 修回:1993-06-10), 百拇医药