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编号:10209463
枸杞对老年小鼠皮肤及表皮郎格罕细胞的影响1
http://www.100md.com 《中国老年学杂志》 1999年第1期
     作者:周茂华 周连生 黄焯民 韩世发 陈东明 夏兆骥

    单位:周茂华 周连生 黄焯民 韩世发 陈东明 夏兆骥(武警医学院外科教研室,天津 300162);陈东明 夏兆骥 北京医科大学第三临床医学院成形外科研究中心

    关键词:枸杞;郎格罕细胞;皮肤老化

    中国老年学杂志/990119 摘 要 目的 探讨枸杞对老年小鼠皮肤及表皮郎格罕细胞(Langerhans cell,LC)的影响。方法 将单味中药枸杞溶于硅霜中,外涂小鼠皮肤。结果 枸杞可促进老年小鼠表皮LC数量增多、表达Ia抗原功能增强;图像分析表明,枸杞对真皮组织内胶原纤维、弹性纤维及DNA含量均有促进作用。结论 枸杞有增加老年小鼠表皮LC数量,增强皮肤免疫功能的作用。

    枸杞是熟知的传统滋补中药,具有养血、补肾功能。为了探讨枸杞对老年小鼠皮肤及表皮LC的影响,本实验用酶化学,免疫组织学及计算机图像分析等方法,对外用枸杞的老年小鼠皮肤及表皮LC的形态功能进行观察,报道如下。
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    1 材料与方法

    1.1 实验动物 Balb/c雄性小鼠,体重20~25 g,18~20周龄,由天津市动物研究所提供。

    1.2 实验试剂 枸杞由达仁堂提供,硅霜由北京医科大学提供,ATPase、IaABC免疫检测试剂盒由美国Sigma公司提供。

    1.3 方法 小鼠背部皮肤先用1∶5硫化钠脱毛,脱毛范围2×2 cm2。1 d后开始涂药。小鼠分5组:老年对照组、硅霜组、枸杞1组、枸杞2组、枸杞3组每组10只。老年对照组不经过处理,硅霜组及枸杞组每天脱毛处涂药1次,枸杞组以硅霜为基质加入枸杞,浓度分别为2%、4%和8%三个不同剂量组,用药50 d后取皮肤标本,进行染色。

    1.4 染色方法 ①用改良的Mackenzie ATPase染色法〔1〕显示表皮LC。标本在EDTA液中孵育,将表皮与真皮分开,经多聚甲醛固定,在ATPase孵育液中孵育,硫化胺显色,甘油明胶封片。②用ABC免疫组织化学方法〔2〕显示表皮中Ia阳性细胞。分离的表皮经丙酮固定后,加抗鼠Ia第一抗体,室温孵育45 min后,加生物素标记的第二抗体室温孵育30 min,ABC复合物室温孵育15 min,DAB显色,甘油明胶封片。
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    1.5 表皮LC密度的测定 光镜下,选择LC分布较均匀处,用格式测微尺随机测10个视野。观测后计算表皮LC的平均密度〔3〕

    1.6 图像分析 部分标本进行MallaryⅡ染色、Gomori染色及Feulgen染色显示皮肤中胶原纤维,弹性纤维及DNA,然后用德国产IBAS-2000计算机图像处理系统进行观察分析,计算每张切片上代表欲检测物质的平均光密度(OD),以测量该物质的相对密度,积分光密度(IOD),以代表局部物质的总量。测量是在相同的辉度、放大倍数情况下,每张切片选择5个视野,将其相加后,平均得到此片的平均光密度及积分光密度,经计算机分析处理后进行成对资料的t检验,并计算各组数据的均值和标准差。

    1.7 统计学处理 用美国产Primer软件t检验分析。

    2 结 果

    2.1 应用酶组织化学铅法显示LC:ATP酶,染色后光镜下观察,小鼠皮肤表皮ATP酶阳性细胞为棕黑色,呈星状多突形,细胞胞体多呈三角形或长椭圆形,细胞突起多为短粗而分枝少,枸杞组ATP酶阳性细胞密度较老年对照组及硅霜组明显增多(表1)。
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    2.2 免疫组织化学显示结果:光镜下可见Ia阳性树突状细胞呈多突形,胞体多呈圆形或椭圆形,突起较细而短。各组Ia抗原阳性树突状细胞分布密度(表1),枸杞组Ia阳性LC密度较老年对照组及硅霜组明显增多。

    表1 小鼠表皮LC及Ia阳性细胞的密度变化(±s,个/mm2) 分组

    ATPase阳性细胞

    Iad阳性细胞

    老年对照组

    432.00±24.32

    364.21±12.21

, http://www.100md.com     硅霜组

    430.00±28.63

    358.24±42.36

    枸杞1组

    661.00±32.571)

    571.41±27.511)

    枸杞2组

    671.00±26.121)

    620.42±41.841)

    枸杞3组

    765.00±33.231)
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    596.84±73.521)

    与老年对照组及硅霜组相比:1)P<0.05,下表同

    2.3 皮肤真皮组织内胶原纤维、弹性纤维及DNA含量变化见表2。枸杞组胶原纤维、弹性纤维及DNA含量比老年对照组及硅霜组有显著性差异。

    表2 真皮组织内胶原纤维、弹性纤维及DNA含量的变化(±s) 分组

    胶原纤维

    弹性纤维

    DNA含量

    老年对照组

, 百拇医药     0.352 7±0.0117

    0.108 7±0.010 5

    0.181 0±0.028 3

    硅霜组

    0.348 9±0.0172

    0.117 5±0.010 7

    0.183 4±0.012 6

    枸杞1组

    0.386 1±0.01821)

    0.157 3±0.016 01)
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    0.226 6±0.016 2

    枸杞2组

    0.398 4±0.01321)

    0.149 8±0.012 31)

    0.231 0±0.021 31)

    枸杞3组

    0.387 6±0.01641)

    0.147 9±0.014 51)

    0.245 6±0.019 51)
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    2.4 由于老年对照组和硅霜组无显著性差异,证明硅霜作为基质对实验设计没有影响。

    3 讨 论

    LC是骨髓源性细胞,是表皮的巨噬细胞。LC表达Ia抗原是其发挥功能的前提,Ia抗原在大多数免疫反应中起着主要作用,增强LC功能可达到促进皮肤免疫的效应。

    皮肤与外界环境密切结触,因而不断地受到外界有害因子的侵袭,包括理化因素,如化学药物刺激,紫外线照射,这些有害因素可使表皮细胞发生突变,获得新的表面抗原,而被LC看作为异己免疫原处理掉。

    由于LC长期受到外界有害因子的损害,使其不能有效地处理新生物细胞,继而产生特异性无反应性,易发生皮肤恶性肿瘤。文献报道人和小鼠表皮的LC密度,随着年龄的增加而减少〔4,5〕,受到外界有害因子的损害后,其LC密度减少更为明显〔6〕,使皮肤免疫监察系统失调。皮肤老化特征之一是皮肤厚度变薄,有人报道〔4,6〕,老龄是人类表皮ATP酶阳性LC减少的原因之一,根据本研究结果和有关文献,我们认为:枸杞促进表皮LC数量增加,Ia抗原表达功能增强及促进皮肤真皮组织内胶原纤维、弹性纤维及DNA增生,从而提高皮肤的免疫防御功能,达到预防老化及抑制皮肤癌肿的发生。
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    1 本课题受武警医学院科研基金资助

    作者简介:周茂华,36岁,主治医师,硕士,研究方向:组织移植,皮肤老化

    参考文献

    1 Mackenzie IC.Cytochemical Identification of ATPase Positive Langerhans Cell in EDTA Separated Sheets of Mouse Epiodermis.Br J Dermatol,1975;92:523

    2 周茂华,陈东明,唐军民 et al.60钴照射后小鼠表皮Langerhans细胞的变化及对异体植皮的影响.中华实验外科杂志,1997;14:94

    3 陈东明,曲淼淼,鲍卫汉 et al.低温储存小鼠皮肤对表皮Langerhans细胞的影响.中华实验外科杂志,1989;6:27

    4 陈东明,朱洪荫,鲍卫汉 et al.不同年龄小鼠表皮Langerhans细胞光镜和电镜下的观察.北京医科大学学报,1989;21:491

    5 贾晓明,朱兆明.皮肤表皮Langerhans细胞及其免疫学功能.国外医学*创伤与外科基本问题分册,1993;14:209

    6 涂 平,郭英年.青年和老年人暴露与非暴露部位表皮郎格罕细胞的比较.中华皮肤科杂志,1991;24:387

    〔1997-09-10收稿 1998-01-10修回〕, 百拇医药