老年肺结核患者白细胞介素6分泌水平的研究
作者：安继红 崔文玉
单位：安继红(白求恩医科大学第二临床学院呼吸内科，长春 130041)；崔文玉(长春市结核病院)
关键词：肺结核；老年人；IL-6；PBMC
中国老年学杂志/990108 摘 要 目的 探讨老年肺结核患者细胞免疫功能。方法 采用MTT(噻唑蓝)比色法，检测其外周血单个核细胞(PBMC)白细胞介素6(IL-6)分泌水平。结果 ①老年肺结核IL-6水平明显高于正常人(P<0.05)；②肺结核进展期IL-6水平老年组低于中青年组(P<0.01)，而好转期无此差异(P>0.05)；③老年肺结核进展期与好转期相比IL-6分泌高峰前移；④IL-6水平与结核病变范围及排菌情况均有关且差异显著(P<0.01)。结论 检测IL-6水平有助于老年肺结核免疫状况观察及病情监测。
An investigation of interleukin-6 (IL-6) level
, 百拇医药
of the elderly patients pulmonary tuberculosis
An Jihong，Cui Wenyu
Deparment of Respiratory The Second College of Norman
Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130041
IL-6 secretion level of the peripheral blood mononuclear cells from the elderly pulmonary TB patients were detected by MTT colorimetric.The results showed that (1) IL-6 levels of elderly pulmonary tuberculosis patients were much higher than that of the normal(P<0.05)；(2) IL-6 level of the elderly group was much lower than that of the middle-aged and young group with advanced pulmonary tuberculosis(P<0.01),but without difference in the resolving stage(P>0.05);(3) Compared the advanced pulmonary tubercusis with the improved stage the height of IL-6 value was moved ahead and (4) IL-6 level was related to tuberculosis focus and the expel of TB bacilli(P<0.0).It is suggested that the detection of IL-6 level is favourable in monitering the immunity status of the elderly pulmonary tuberculosis patients.
, 百拇医药
Key words Pulmonary tuberculosis Interleuke-6(IL-6) Periphera blood mononuclear cells(PBMC)
IL-6是由多种细胞分泌的细胞因子，具有十分广泛的生物学活性，观测其分泌水平变化，为老年肺结核病情监测及免疫状况探讨提供了参考指标。
1 对象与方法
1.1 对象 51例肺结核患者均系长春市结核病院住院及门诊病人，老年组29例，男18例，女11例，年龄60～70岁，平均年龄65.8岁。其中进展期17例，好转期12例；轻中度病变9例(病变范围小于一侧肺2/3或两肺1/3)，重度病变20例(病变大于一侧肺或两肺2/3)。中青年组32例，男15例，女17例，年龄18～48岁，平均年龄35.6岁。其中进展期19例，好转期13例。正常对照组为本院职工及实习生体检合格者31例，男20例，女11例，平均年龄36岁。
, 百拇医药
1.2 主要材料及试剂 IL-6依赖株MH60.BSF2细胞由日本大阪大学Kishimoto教授惠赠。重组人白细胞介素-6标准品购自北京医科大学免疫研究室。
1.3 方法
1.3.1 IL-6的诱生 取静脉抗凝血6 ml，常规分离PBMC，调整细胞数为1×109/L。将细胞及全培基各1 ml加入24 孔培养板，5%CO2 37℃条件下培养，收24、48、72 h培养上清，冻存待测。
1.3.2 IL-6的检测 取对数生长期的MH60.BSF2细胞5×107/L置40孔板中100 μl/孔，加入系列稀释的IL-6标准品及待测样品100 μl/孔。同时设对照孔，以上均为双复孔，置5%CO2 37 ℃条件下培养40 h，加入MTT(5 g/L)10 μl/孔，继续培养5 h，弃上清，加入酸化异丙醇100 μl/孔，吹打溶解甲月 赞颗粒，在酶标仪上测570 nm的OD值，根据标准品计算出样本中IL-6含量。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 实验数据用t检验处理。
2 结 果
2.1 老年肺结核PBMC自分泌IL-6动力学 见图1。
图1 老年肺结核PBMC自分泌IL-6动力学
图1所示，老年肺结核进展期在24 h分泌IL-6较正常人高，随时间延长分泌量增加，48 h达分泌高峰，72 h IL-6有下降趋势。老年肺结核好转期随时间延长，在三个时相IL-6水平呈增高趋势，72 h达较高浓度，正常人在24、48、72 h三个时相自分泌IL-6水平相近。
2.2 老年肺结核进展期、好转期IL-6水平与中青年组及正常对照组比较 见表1，表2。
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2.3 老年肺结核痰菌阳、阴性和疾病程度与IL-6水平的关系 见表3。
表1 老年肺结核组与对照组IL-6水平(
±s)
n
IL-6水平
P值
进展期
17
78.00±25.81
<0.01
好转期
12
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48.51±14.09
<0.05
对照组
31
30.82±14.66
注：进展期与好转期比较P<0.05，余为与对照组比较
表2 老年肺结核组与中青年组IL-6水平(±s)
n
IL-6水平
进展期
, http://www.100md.com 好转期
老年组
29
78.00±25.81
48.53±14.09
中青年组
32
129.12±51.01
52.02±20.16
P值
<0.01
<0.05
表3 老年肺结核痰菌阳、阴性和疾病程度与IL-6水平的关系
, 百拇医药
IL-6水平
P值
痰菌阳性
82.52±39.81
<0.01
痰菌阴性
44.48±23.26
轻中度病变
49.95±10.33
<0.01
重度病变
80.19±47.02
, 百拇医药
3 讨 论
IL-6是由活化的淋巴细胞、单核细胞等多种细胞分泌的细胞因子〔1〕，其基因表达失常是解释许多疾病的基础〔3〕。本文结果表明，老年肺结核IL-6水平比正常人明显升高，其可能机制是：(1)结核菌感染人体，激活了人体的自动免疫系统，淋巴细胞分裂增殖，并在其它细胞作用下释放出包括IL-6在内的多种细胞因子。(2)机体感染结核菌时，单核-巨噬细胞系统被激活释放大量的IL-6。(3)结核菌的LPS可刺激单核细胞释放IL-6〔3〕。
对衰老机体的免疫功能探讨，已深入到细胞分子水平。从免疫应答，免疫调节机制及对细胞分子学的研究均已证明老年人的免疫功能是低下的〔4〕。检测结果也表明，老年进展期肺结核IL-6自泌水平低于中青年进展期肺结核，可能是由于老年人免疫应答及免疫调节能力均较中青年人低下，故当机体感染结核菌时，淋巴细胞及单核细胞的活化程度较中青年人低，致IL-6分泌水平下降。检测结果还表明：老年进展期肺结核IL-6水平高于好转期。重度病变者IL-6水平高于轻中度病变者，痰菌阳性高于不排菌者。这可能是由于进展期排菌者，结核菌的负荷较大，反馈性引起大量淋巴细胞及单核细胞活化〔5〕，释放IL-6增多。而结核菌的多少，又直接影响着病变范围及程度。经有效的化疗，大量结核菌被杀灭，病人痰菌阴转，病变吸收，病情好转，免疫功能改善，对淋巴细胞及单核细胞系统的刺激作用减弱，IL-6释放量减少。由此可见检测IL-6水平，分析其变化规律，对老年肺结核免疫状况探讨及病情监测具有临床指导意义。
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作者简介：安继红，女，41岁，主管技师，从事肺疾病免疫功能的研究
参考文献
1 田志刚，李康生.白细胞介素6与免疫异常性疾病.上海免疫学杂志，1990；10(3)：189
2 田志刚，杨贵贞，孙汭.人白细胞介素6和白细胞介素6 mRNA的诱生动力学.中华微生物学和免疫学杂志，1991；11(1)：49
3 陈家福，殷志伟，茅子均.SLE患者外周血单个核细胞分泌IL-6的研究.上海免疫学杂志，1993；13(5)：294
4 段震峰，王东升，沈元珊.老年人白细胞介素2及其受体的研究.中华老年医学杂志，1993；12(3)：165
5 崔建军，范 平，李 均.肺结核患者血清可溶性白细胞介素-2受体测定的研究.中华结核和呼吸杂志，1994；17(5)：288
〔1996-09-12收稿 1997-10-06修回〕, 百拇医药
单位：安继红(白求恩医科大学第二临床学院呼吸内科，长春 130041)；崔文玉(长春市结核病院)
关键词：肺结核；老年人；IL-6；PBMC
中国老年学杂志/990108 摘 要 目的 探讨老年肺结核患者细胞免疫功能。方法 采用MTT(噻唑蓝)比色法，检测其外周血单个核细胞(PBMC)白细胞介素6(IL-6)分泌水平。结果 ①老年肺结核IL-6水平明显高于正常人(P<0.05)；②肺结核进展期IL-6水平老年组低于中青年组(P<0.01)，而好转期无此差异(P>0.05)；③老年肺结核进展期与好转期相比IL-6分泌高峰前移；④IL-6水平与结核病变范围及排菌情况均有关且差异显著(P<0.01)。结论 检测IL-6水平有助于老年肺结核免疫状况观察及病情监测。
An investigation of interleukin-6 (IL-6) level
, 百拇医药
of the elderly patients pulmonary tuberculosis
An Jihong，Cui Wenyu
Deparment of Respiratory The Second College of Norman
Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130041
IL-6 secretion level of the peripheral blood mononuclear cells from the elderly pulmonary TB patients were detected by MTT colorimetric.The results showed that (1) IL-6 levels of elderly pulmonary tuberculosis patients were much higher than that of the normal(P<0.05)；(2) IL-6 level of the elderly group was much lower than that of the middle-aged and young group with advanced pulmonary tuberculosis(P<0.01),but without difference in the resolving stage(P>0.05);(3) Compared the advanced pulmonary tubercusis with the improved stage the height of IL-6 value was moved ahead and (4) IL-6 level was related to tuberculosis focus and the expel of TB bacilli(P<0.0).It is suggested that the detection of IL-6 level is favourable in monitering the immunity status of the elderly pulmonary tuberculosis patients.
, 百拇医药
Key words Pulmonary tuberculosis Interleuke-6(IL-6) Periphera blood mononuclear cells(PBMC)
IL-6是由多种细胞分泌的细胞因子，具有十分广泛的生物学活性，观测其分泌水平变化，为老年肺结核病情监测及免疫状况探讨提供了参考指标。
1 对象与方法
1.1 对象 51例肺结核患者均系长春市结核病院住院及门诊病人，老年组29例，男18例，女11例，年龄60～70岁，平均年龄65.8岁。其中进展期17例，好转期12例；轻中度病变9例(病变范围小于一侧肺2/3或两肺1/3)，重度病变20例(病变大于一侧肺或两肺2/3)。中青年组32例，男15例，女17例，年龄18～48岁，平均年龄35.6岁。其中进展期19例，好转期13例。正常对照组为本院职工及实习生体检合格者31例，男20例，女11例，平均年龄36岁。
, 百拇医药
1.2 主要材料及试剂 IL-6依赖株MH60.BSF2细胞由日本大阪大学Kishimoto教授惠赠。重组人白细胞介素-6标准品购自北京医科大学免疫研究室。
1.3 方法
1.3.1 IL-6的诱生 取静脉抗凝血6 ml，常规分离PBMC，调整细胞数为1×109/L。将细胞及全培基各1 ml加入24 孔培养板，5%CO2 37℃条件下培养，收24、48、72 h培养上清，冻存待测。
1.3.2 IL-6的检测 取对数生长期的MH60.BSF2细胞5×107/L置40孔板中100 μl/孔，加入系列稀释的IL-6标准品及待测样品100 μl/孔。同时设对照孔，以上均为双复孔，置5%CO2 37 ℃条件下培养40 h，加入MTT(5 g/L)10 μl/孔，继续培养5 h，弃上清，加入酸化异丙醇100 μl/孔，吹打溶解甲月 赞颗粒，在酶标仪上测570 nm的OD值，根据标准品计算出样本中IL-6含量。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 实验数据用t检验处理。
2 结 果
2.1 老年肺结核PBMC自分泌IL-6动力学 见图1。
图1 老年肺结核PBMC自分泌IL-6动力学
图1所示，老年肺结核进展期在24 h分泌IL-6较正常人高，随时间延长分泌量增加，48 h达分泌高峰，72 h IL-6有下降趋势。老年肺结核好转期随时间延长，在三个时相IL-6水平呈增高趋势，72 h达较高浓度，正常人在24、48、72 h三个时相自分泌IL-6水平相近。
2.2 老年肺结核进展期、好转期IL-6水平与中青年组及正常对照组比较 见表1，表2。
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2.3 老年肺结核痰菌阳、阴性和疾病程度与IL-6水平的关系 见表3。
表1 老年肺结核组与对照组IL-6水平(
±s)n
IL-6水平
P值
进展期
17
78.00±25.81
<0.01
好转期
12
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48.51±14.09
<0.05
对照组
31
30.82±14.66
注：进展期与好转期比较P<0.05，余为与对照组比较
表2 老年肺结核组与中青年组IL-6水平(
±s)n
IL-6水平
进展期
, http://www.100md.com 好转期
老年组
29
78.00±25.81
48.53±14.09
中青年组
32
129.12±51.01
52.02±20.16
P值
<0.01
<0.05
表3 老年肺结核痰菌阳、阴性和疾病程度与IL-6水平的关系
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IL-6水平
P值
痰菌阳性
82.52±39.81
<0.01
痰菌阴性
44.48±23.26
轻中度病变
49.95±10.33
<0.01
重度病变
80.19±47.02
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3 讨 论
IL-6是由活化的淋巴细胞、单核细胞等多种细胞分泌的细胞因子〔1〕，其基因表达失常是解释许多疾病的基础〔3〕。本文结果表明，老年肺结核IL-6水平比正常人明显升高，其可能机制是：(1)结核菌感染人体，激活了人体的自动免疫系统，淋巴细胞分裂增殖，并在其它细胞作用下释放出包括IL-6在内的多种细胞因子。(2)机体感染结核菌时，单核-巨噬细胞系统被激活释放大量的IL-6。(3)结核菌的LPS可刺激单核细胞释放IL-6〔3〕。
对衰老机体的免疫功能探讨，已深入到细胞分子水平。从免疫应答，免疫调节机制及对细胞分子学的研究均已证明老年人的免疫功能是低下的〔4〕。检测结果也表明，老年进展期肺结核IL-6自泌水平低于中青年进展期肺结核，可能是由于老年人免疫应答及免疫调节能力均较中青年人低下，故当机体感染结核菌时，淋巴细胞及单核细胞的活化程度较中青年人低，致IL-6分泌水平下降。检测结果还表明：老年进展期肺结核IL-6水平高于好转期。重度病变者IL-6水平高于轻中度病变者，痰菌阳性高于不排菌者。这可能是由于进展期排菌者，结核菌的负荷较大，反馈性引起大量淋巴细胞及单核细胞活化〔5〕，释放IL-6增多。而结核菌的多少，又直接影响着病变范围及程度。经有效的化疗，大量结核菌被杀灭，病人痰菌阴转，病变吸收，病情好转，免疫功能改善，对淋巴细胞及单核细胞系统的刺激作用减弱，IL-6释放量减少。由此可见检测IL-6水平，分析其变化规律，对老年肺结核免疫状况探讨及病情监测具有临床指导意义。
, http://www.100md.com
作者简介：安继红，女，41岁，主管技师，从事肺疾病免疫功能的研究
参考文献
1 田志刚，李康生.白细胞介素6与免疫异常性疾病.上海免疫学杂志，1990；10(3)：189
2 田志刚，杨贵贞，孙汭.人白细胞介素6和白细胞介素6 mRNA的诱生动力学.中华微生物学和免疫学杂志，1991；11(1)：49
3 陈家福，殷志伟，茅子均.SLE患者外周血单个核细胞分泌IL-6的研究.上海免疫学杂志，1993；13(5)：294
4 段震峰，王东升，沈元珊.老年人白细胞介素2及其受体的研究.中华老年医学杂志，1993；12(3)：165
5 崔建军，范 平，李 均.肺结核患者血清可溶性白细胞介素-2受体测定的研究.中华结核和呼吸杂志，1994；17(5)：288
〔1996-09-12收稿 1997-10-06修回〕, 百拇医药