体外培养细胞水浴槽的制作与使用
作者：钟 平 曾广华 孔天翰
单位：(钟平 曾广华)广东医学院生理学教研室，湛江 524023；(孔天翰)湛江市中心人民医院临床医学研究所，湛江 524037
关键词：培养；细胞；膜电位；水浴槽；制作
广东医学院学报JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE1999年 第17卷 第1期 Vol 用玻璃微电极细胞内记录体外培养的癌细胞跨膜电位时，需将长满癌细胞的细胞培养板置于一个防震、恒温的环境中，才可获得较好的实验结果.笔者最初采用的是一单室结构的有机玻璃水浴槽，当电子蠕动泵将温水送至浴槽或水从浴槽的出水口返流至加热水箱时，由于缺少缓冲设施，常常因为水的涌动和虹吸作用，使放置细胞培养板后的浴槽内水面不能稳定于同一水平，既影响了恒温效果，又导致了细胞培养板内细胞的轻微晃动(镜下)，直接影响了细胞膜电位的记录.为克服上述的不足，我们设计制作了一个多室式结构的恒温恒流体外培养细胞水浴槽(图1)，并利用该浴槽进行了癌细胞跨膜电位的研究.
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1 制作材料与方法
1.1 制作材料 0.2cm的透明有机玻璃、三氯甲烷、501胶水、直径0.5cm金属铜管等.
1.2 制作方法 首先，根据放置该浴槽的XSB-1A型倒置式生物显微镜载物台的大小(18.5 cm×14cm)，按比例(1∶1)锯
图1 多室式结构的体外培养细胞水浴槽
取并磨平各板块，包括浴槽底板1块(18.5cm×14cm)；外周侧围板4块，其中14cm×3cm2块(并在其正中稍偏下处各钻一孔，直径约0.5cm，套入金属铜管，可以作出、入水口接管)，18.5cm×3cm2块；隔板2块(13.5cm×1.5cm、13.5cm×2.5cm 各1块).再按细胞培养板的规格(24孔：12.5cm×8.5cm×2cm)，长、宽约扩大1～1.5cm锯取浴槽中心室(放置细胞培养板)周围侧板，即13.5cm×1.5cm2块，13.5cm×3cm1块(其中部约9cm×1.5cm，即呈一凹字型状)，10cm×1.5cm1块，中心室周边各围板的上缘锉成齿状.然后，按截面图(图2)所示，将各板用三氯甲烷进行粘贴.除中心室外，其它各室都加上盖板，将各间室及外室盖住.最后，在中心室的底板面上(相当于细胞培养板大小的四个角)分别粘上0.5cm×0.5cm 的透明有机玻璃板.这样便成了有五个室结构的体外培养细胞水浴槽.
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2 使用与效果
图2 水浴槽纵、横截面 (单位：cm)
在进行癌细胞膜电位测量实验时，体外培养细胞水浴槽是放置在XSB-1A型倒置式生物显微镜载物台上，与LDB-H型电子蠕动泵、小型三用水箱(用于水的加热、恒温)联接同时使用.电子蠕动泵(根据具体需要调节水的流速)将温水从三用水箱抽出，输送到多室式结构的体外培养细胞水浴槽，从浴槽的入水口进入第一间室，当水柱达第一隔板高度时，则从第一间室溢出，流到第二间室，再经第二隔板的阻挡，从其底部渗入到第三间室，当水柱达凹型板的齿状缘时，则从第三间室溢出，进入中心室，再从细胞培养板的两侧及底部漫及整个细胞培养板外，因此使细胞培养板内各孔受热均匀.另外，由于各间室及外室都加上盖板，减少了浴槽内外之间空气的对流，因此减少了热的扩散而达到恒温的目的.当中心室液面达所需高度时，便从各齿状沟流到外室，再从浴槽的出水口经管道流回三用水箱(图3).这样，尽管蠕动泵是节律性、搏动式的将水输送到浴槽，但经过各间室、隔板的缓冲作用，避免了浴槽中心室循环水的涌动，并使浴槽内液面恒定于一定水平，达到防震、恒温、恒流目的，满足了实验的要求。经多年使用，效果良好[1～7].
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图3 恒温恒流水浴示意图
①三用水箱 ②电子蠕动泵 ③水浴槽 ④细胞培养板 ⑤第一间室 ⑥第二间室 ⑦第三间室 ⑧中心室 ⑨外室 10入口11出口
3 参考文献
1 聂思槐，陈丽新，邓惠华，等.低分化鼻咽癌细胞系单克隆株(4-2-H5)细胞膜电位研究.肿瘤防治研究，1993，20(2)：101
2 聂思槐，陈丽新，郭忠民，等.CNE-2Z膜电位的研究.广东医学，1993，14(1)：54
3 陈丽新，王立伟，郭忠民，等.人低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞膜电位及其形成的离子机制.湛江医学院学报，1993，11(1-2)：1
4 陈丽新，曾广华，邓惠华，等.人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)单克隆株细胞膜电学特性研究.中国病理生理杂志，1994，10(1)：68
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5 聂思槐，王立伟，吴枫，等.高、低分化的鼻咽癌细胞膜电位比较.中国病理生理杂志，1995，11(3)：246
6 王立伟，陈丽新，钟平，等.平阳霉素和普鲁卡因治疗鼻咽癌时细胞膜电位的变化.中国病理生理杂志，1996，12(3)：249
7 Kong Tianhan，Zeng Guanghua， Zhong Ping，et al. The effect of APBMV on the membrane potentials of the carcinoma cells. 中国蛇学杂志，1997，6(1-4)：241
收稿日期：1998-07-14, http://www.100md.com
单位：(钟平 曾广华)广东医学院生理学教研室，湛江 524023；(孔天翰)湛江市中心人民医院临床医学研究所，湛江 524037
关键词：培养；细胞；膜电位；水浴槽；制作
广东医学院学报JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE1999年 第17卷 第1期 Vol 用玻璃微电极细胞内记录体外培养的癌细胞跨膜电位时，需将长满癌细胞的细胞培养板置于一个防震、恒温的环境中，才可获得较好的实验结果.笔者最初采用的是一单室结构的有机玻璃水浴槽，当电子蠕动泵将温水送至浴槽或水从浴槽的出水口返流至加热水箱时，由于缺少缓冲设施，常常因为水的涌动和虹吸作用，使放置细胞培养板后的浴槽内水面不能稳定于同一水平，既影响了恒温效果，又导致了细胞培养板内细胞的轻微晃动(镜下)，直接影响了细胞膜电位的记录.为克服上述的不足，我们设计制作了一个多室式结构的恒温恒流体外培养细胞水浴槽(图1)，并利用该浴槽进行了癌细胞跨膜电位的研究.
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1 制作材料与方法
1.1 制作材料 0.2cm的透明有机玻璃、三氯甲烷、501胶水、直径0.5cm金属铜管等.
1.2 制作方法 首先，根据放置该浴槽的XSB-1A型倒置式生物显微镜载物台的大小(18.5 cm×14cm)，按比例(1∶1)锯
图1 多室式结构的体外培养细胞水浴槽
取并磨平各板块，包括浴槽底板1块(18.5cm×14cm)；外周侧围板4块，其中14cm×3cm2块(并在其正中稍偏下处各钻一孔，直径约0.5cm，套入金属铜管，可以作出、入水口接管)，18.5cm×3cm2块；隔板2块(13.5cm×1.5cm、13.5cm×2.5cm 各1块).再按细胞培养板的规格(24孔：12.5cm×8.5cm×2cm)，长、宽约扩大1～1.5cm锯取浴槽中心室(放置细胞培养板)周围侧板，即13.5cm×1.5cm2块，13.5cm×3cm1块(其中部约9cm×1.5cm，即呈一凹字型状)，10cm×1.5cm1块，中心室周边各围板的上缘锉成齿状.然后，按截面图(图2)所示，将各板用三氯甲烷进行粘贴.除中心室外，其它各室都加上盖板，将各间室及外室盖住.最后，在中心室的底板面上(相当于细胞培养板大小的四个角)分别粘上0.5cm×0.5cm 的透明有机玻璃板.这样便成了有五个室结构的体外培养细胞水浴槽.
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2 使用与效果
图2 水浴槽纵、横截面 (单位：cm)
在进行癌细胞膜电位测量实验时，体外培养细胞水浴槽是放置在XSB-1A型倒置式生物显微镜载物台上，与LDB-H型电子蠕动泵、小型三用水箱(用于水的加热、恒温)联接同时使用.电子蠕动泵(根据具体需要调节水的流速)将温水从三用水箱抽出，输送到多室式结构的体外培养细胞水浴槽，从浴槽的入水口进入第一间室，当水柱达第一隔板高度时，则从第一间室溢出，流到第二间室，再经第二隔板的阻挡，从其底部渗入到第三间室，当水柱达凹型板的齿状缘时，则从第三间室溢出，进入中心室，再从细胞培养板的两侧及底部漫及整个细胞培养板外，因此使细胞培养板内各孔受热均匀.另外，由于各间室及外室都加上盖板，减少了浴槽内外之间空气的对流，因此减少了热的扩散而达到恒温的目的.当中心室液面达所需高度时，便从各齿状沟流到外室，再从浴槽的出水口经管道流回三用水箱(图3).这样，尽管蠕动泵是节律性、搏动式的将水输送到浴槽，但经过各间室、隔板的缓冲作用，避免了浴槽中心室循环水的涌动，并使浴槽内液面恒定于一定水平，达到防震、恒温、恒流目的，满足了实验的要求。经多年使用，效果良好[1～7].
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图3 恒温恒流水浴示意图
①三用水箱 ②电子蠕动泵 ③水浴槽 ④细胞培养板 ⑤第一间室 ⑥第二间室 ⑦第三间室 ⑧中心室 ⑨外室 10入口11出口
3 参考文献
1 聂思槐，陈丽新，邓惠华，等.低分化鼻咽癌细胞系单克隆株(4-2-H5)细胞膜电位研究.肿瘤防治研究，1993，20(2)：101
2 聂思槐，陈丽新，郭忠民，等.CNE-2Z膜电位的研究.广东医学，1993，14(1)：54
3 陈丽新，王立伟，郭忠民，等.人低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞膜电位及其形成的离子机制.湛江医学院学报，1993，11(1-2)：1
4 陈丽新，曾广华，邓惠华，等.人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)单克隆株细胞膜电学特性研究.中国病理生理杂志，1994，10(1)：68
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5 聂思槐，王立伟，吴枫，等.高、低分化的鼻咽癌细胞膜电位比较.中国病理生理杂志，1995，11(3)：246
6 王立伟，陈丽新，钟平，等.平阳霉素和普鲁卡因治疗鼻咽癌时细胞膜电位的变化.中国病理生理杂志，1996，12(3)：249
7 Kong Tianhan，Zeng Guanghua， Zhong Ping，et al. The effect of APBMV on the membrane potentials of the carcinoma cells. 中国蛇学杂志，1997，6(1-4)：241
收稿日期：1998-07-14, http://www.100md.com