nm23-H1蛋白在鼻咽癌组织中的表达及意义
作者：莫武宁 黄光武 邝国乾*
单位：广西医科大学第一附属医院检验科 南宁 530021
关键词：鼻咽癌；nm23-H1蛋白；免疫组织化学
广西医科大学学报990114
摘要 目的：为探讨nm23-H1蛋白与鼻咽癌发生发展的关系。方法：采用免疫组化法检测了80例鼻咽癌组织、20例无瘤鼻咽部组织nm23-H1基因产物的表达。结果：nm23-H1蛋白在鼻咽癌组织、鼻咽部无瘤组织中的表达无显著性差异(P>0.05)；nm23-H1蛋白在鼻咽癌组织中的表达与性别、临床分期、原发灶大小无关。但在有颈淋巴结转移组与无颈淋巴结转移组之间，差异有显著性(P<0.05)。结论：nm23-H1基因与鼻咽癌有无淋巴结转移有关，但它在鼻咽癌发生发展中的作用仍不明确，有待于进一步研究。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R730.45；R739.6
EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF nm23-H1 PROTEIN IN NASOPHARYNGEAL CARCINOMA
Mo Wuning,Huang Guangwu,Kuang Guoqian(Fist Affiliated Hospital,Guangxi Medical University，Nanning 530021)
Abstract Objective:To investigate the possible relationship between nm23-H1 protein and progression of nasopharyngeal carcinoma (NPC).Methods:80 cases of NPC and 20 cases of tumor-free nasopharyngeal mucosae were detected for expression of nm23-H1 gene product by using a monoclonal antibody against nm23-H1 protein by immunohistochemistry.Results:No significant differece of the positive expression rate of nm23-H1 protein was observed between NPC and tumor-free nasopharyngeal mucosae (P>0.05);no significance regarding the protein was found in respective correlation analysis of NPC sex,stage and size of primary focus (P>0.05).There was a significant difference of nm23-H1 expression between the patients with non-lymph node metastasis and the patients with lymph node metastasis.Conclusions:The function of nm23-H1 gene in NPC is not sure and needs further research.
, 百拇医药
Key words nasopharyngeal carcinoma;nm23-H1 protein;immunohistochemistry
nm23基因被认为是一种肿瘤转移抑制基因。有关它在鼻咽癌的发生、发展作用的报道极少，且结果不尽一致。为此，我们使用nm23-H1单克隆抗体免疫组化法检测80例鼻咽癌组织和20例无瘤鼻咽部组织。现将结果报道如下。
1 材料和方法
1.1检测对象：鼻咽癌80例，男58例，女22例，平均年龄42岁，均为初诊病人，病理分型为低分化鳞癌。按1992年福州分期标准：Ⅰ期10例，Ⅱ期20例，Ⅲ期22例，Ⅳ期28例。其中经常规放疗后随访28例，时间为1～1.5年。对照为无瘤鼻咽部炎症组织20例，男12例，女8例，平均年龄39岁。
1.2 试剂与检测方法：鼠抗人nm23-H1单克隆抗体免疫组化试剂盒(S-P法)、DAB试剂盒均购于北京中山生物工程公司。免疫组化方法按产品说明书进行。每次试验均用已知阳性片作阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作空白对照和用非免疫的正常小鼠血清同等倍数释稀做替代对照。
, http://www.100md.com
1.3 结果判定：细胞浆和(或)细胞核被染成棕黄色并明显高于背景定为阳性，不着色者为阴性。
1.4 统计学处理：采用χ2检验。
2 结 果
2.1nm23-H1基因表达阳性率：见表1。从表1可见显示无瘤炎症组织nm23-H1表达的阳性率与鼻咽癌组织相比，无显著性差异(χ2=0.050 7，P>0.05)。
表1 nm23-H1在鼻咽部组织表达阳性率 病理诊断
n
nm23-H1的表达
, 百拇医药
P
+
-
阳性率(%)
炎症
20
15
5
75
>0.05
低分化鳞癌
80
58
, 百拇医药 22
72.5
2.2 nm23-H1基因产物表达与鼻咽癌临床参数关系：见表2。从表2可见，nm23-H1阳性表达与鼻咽癌患者性别、临床分期、原发灶及颈转移淋巴结大小无关(P>0.05)。但无颈淋巴结转移者阳性表达率显著高于已有颈淋巴结转移者(P<0.05)。
2.3 nm23蛋白表达与鼻咽癌患者预后的关系：见表3。从表3显示，随访1～1.5年患者，有无局部复发或远处转移组差异无显著性(P>0.05)。表2 nm23-H1蛋白表达与鼻咽癌临床参数的关系 项 目
性别
临床分期
原发灶
, http://www.100md.com
淋巴结*
男
女
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
T1
T2
T3
T4
N0
, http://www.100md.com
N1
N2
N3
n
58
22
10
20
22
28
15
22
26
, http://www.100md.com
17
30
25
13
12
阳性例数
43
15
9
14
16
19
11
19
, http://www.100md.com
16
12
26
16
9
7
阳性率(%)
74.14
68.18
90
70
72.73
67.86
, 百拇医药
73.33
86.36
61.54
70.59
86.67
64
69.23
58.33
χ2
0.283 8
1.902 0
3.7241
, http://www.100md.com P
>0.05
>0.05
>0.05
* N0与N1～3比较，χ2=4.831 8，P<0.05，N1、N2、N3之间比较，χ2=0.321 6，P>0.05。晚期(Ⅲ～Ⅳ期)与早期(Ⅰ～Ⅱ期)比较，χ2=0.418 0，P>0.05
表3 nm23蛋白表达与鼻咽癌患者预后关系 复发或转移
n
阳性例数
, 百拇医药
阳性率(%)
P
无
13
11
84.62
>0.05
有
15
11
73.33
3 讨 论
nm23基因是1988年Steeg等[1]首次从小鼠黑色素瘤细胞株中分离出来，它定位于17号染色体长臂(17q24)，其家族包括nm23-H1，nm23-H2和nm23-H3b。国内外一些报道认为nm23-H1与肿瘤浸润、转移关系更为密切。它对乳腺癌、胃肠道癌、肝癌等的浸润、转移及预后有重要意义[2～4]。
, 百拇医药
nm23-H1基因与鼻咽癌发生、发展关系，文献报道不多，且结果矛盾不少。郑天荣等[5]报道鼻咽癌组织nm23蛋白表达阳性率显著高于正常组织，晚期(Ⅲ～Ⅳ期)鼻咽癌组织表达阳性率又显著高于早期(Ⅱ期)，认为nm23-H1基因与鼻咽癌发生有关，与其转移无关，晚期组织高表达可能与细胞快速增殖有关。本组结果显示，鼻咽癌组织中nm23蛋白表达与正常组织对比，差异无统计学意义(P>0.05)；鼻咽癌nm23-H1蛋白在不同性别、晚期(Ⅲ～Ⅳ期)与早期(Ⅰ～Ⅱ期)之间，原发灶和颈淋巴结转移灶大小之间表达阳性率，差异无显著性(P>0.05)，但无颈部淋巴结转移组(N0)nm23-H1蛋白表达阳性率则显著高于已有颈淋巴结转移组(P<0.05)。本组结果不支持nm23与组织细胞恶性变和肿瘤发生的观点，认为是人体正常组织表达的基因。鼻咽癌组织的nm23蛋白表达与癌组织的局部浸润、扩散无关，但却显示与有无颈部淋巴结转移有关，与郭翔等[6]报道有些相似。
, http://www.100md.com
人类nm23基因蛋白表达与鼻咽癌患者预后相关性各说不一。郭翔观察放疗后5年患者，发现表达阴性组的局部复发和远处转移率较阳性组高，生存曲线分析表明阳性表达组的生存率高于阴性表达组。认为nm23蛋白高表达是鼻咽癌患者预后良好的指标[6]。但郑天荣等[5]报道的结果则相反，认为nm23蛋白表达与预后不良有关。本组对部分患者随访1～1.5年的鼻咽癌组织进行检测，发现在有无复发、转移的两组间差异无显著性(P>0.05)。本组缺乏长期随访资料，且病例数较少，与生存期关系有待进一步观察。
造成上述报道不尽一致的原因，恐与检测使用的抗体不同有关。本组与郭翔使用的为单克隆抗体，而郑天荣等使用的是多克隆抗体，抗体的特异性不同可导致实验结果不一致。Atai等[7]使用RT-PCR检测甲状腺癌中nm23-H1和nm23-H2的mRNA表达水平，发现转移淋巴结中nm23-H1 mRNA不表达或低表达，而nm23-H2 mRNA则高表达，使用多克隆抗体检测，则发现癌组织均有nm23-H1及nm23-H2蛋白反应，且nm23-H1与甲癌转移密切相关。
, 百拇医药
nm23蛋白与二磷酸核苷酸酶(NDPK)高度同源。有观点认为nm23基因产物就是NDPK，nm23基因的作用是通过NDPK活性。NDPK介导的转磷酸作用提供GTP，若GTP不足，既可使微管聚合异常而导致细胞非整倍体染色体形成，又通过影响细胞骨架而影响细胞运动，从而促进肿瘤细胞浸润转移。另方面，NDPK在信号传导进程中使GDP还原为GTP，从而激活G蛋白，引发一系列G蛋白介导的细胞内信号传导反应，参与调节发育和肿瘤发展。但是nm23蛋白的抑制转移作用还不能与NDPK作用等同起来。某些肿瘤，如神经母细胞瘤中nm23基因表达反与肿瘤恶性程度成正相关。这与nm23基因蛋白在鼻咽癌组织表达结果不尽一致是相符的。因此，nm23基因在肿瘤侵袭转移中的作用仍不明确，有待于进一步研究。
作者简介：黄光武：指导老师
参考文献
1 Steeg PS,Bevilacyua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with tumor metastatic potential.J Natl Cancer Inst,1988,80:200
, http://www.100md.com
2 Tokunaya Y,Vrano T,Furukaua K,et al.Reduced expression of nm23-H1,But not of nm23-H2 is concordant with the frequency of lymph-node metastasis of human breast cancer.Int J Cancer,1993,55:66
3 Kodera Y,Isobe KI,Yamauchi M,et al.Expression of nm23-H1 RNA levels in human gastric cancer tissues:a negative correlation with nodol metastasis.Cancer,1994,73:259
4 Nakayama T,Ohtsuru A,Nakao K,et al.Expression in hepatocellular carcinoma of nucleoside diphosphate kinase,a homolog of the nm23 gene product.J Natl Cancer Inst,1992,84:1 349
, 百拇医药
5 郑天荣，谢佐福，林贤东，等.nm23蛋白在人鼻咽癌中的表达.中华病理学杂志，1997，26(2)：118
6 郭 翔，闵华庆，邵建永，等.nm23-H1基因产物在人鼻咽癌中的表达及其临床意义.癌症，1997，16(2)：119
7 Arai T,Watanabe M,Onodera M,et al.Reduced nm23-H1 messenger RNA expression in metastatic lymph nodes patients with papillary carcinoma of the thyroid.Am J Pathol,1993,142:1938
收稿日期：1998-03-10, 百拇医药(莫武宁 黄光武 邝国乾*)
单位：广西医科大学第一附属医院检验科 南宁 530021
关键词：鼻咽癌；nm23-H1蛋白；免疫组织化学
广西医科大学学报990114
摘要 目的：为探讨nm23-H1蛋白与鼻咽癌发生发展的关系。方法：采用免疫组化法检测了80例鼻咽癌组织、20例无瘤鼻咽部组织nm23-H1基因产物的表达。结果：nm23-H1蛋白在鼻咽癌组织、鼻咽部无瘤组织中的表达无显著性差异(P>0.05)；nm23-H1蛋白在鼻咽癌组织中的表达与性别、临床分期、原发灶大小无关。但在有颈淋巴结转移组与无颈淋巴结转移组之间，差异有显著性(P<0.05)。结论：nm23-H1基因与鼻咽癌有无淋巴结转移有关，但它在鼻咽癌发生发展中的作用仍不明确，有待于进一步研究。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R730.45；R739.6
EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF nm23-H1 PROTEIN IN NASOPHARYNGEAL CARCINOMA
Mo Wuning,Huang Guangwu,Kuang Guoqian(Fist Affiliated Hospital,Guangxi Medical University，Nanning 530021)
Abstract Objective:To investigate the possible relationship between nm23-H1 protein and progression of nasopharyngeal carcinoma (NPC).Methods:80 cases of NPC and 20 cases of tumor-free nasopharyngeal mucosae were detected for expression of nm23-H1 gene product by using a monoclonal antibody against nm23-H1 protein by immunohistochemistry.Results:No significant differece of the positive expression rate of nm23-H1 protein was observed between NPC and tumor-free nasopharyngeal mucosae (P>0.05);no significance regarding the protein was found in respective correlation analysis of NPC sex,stage and size of primary focus (P>0.05).There was a significant difference of nm23-H1 expression between the patients with non-lymph node metastasis and the patients with lymph node metastasis.Conclusions:The function of nm23-H1 gene in NPC is not sure and needs further research.
, 百拇医药
Key words nasopharyngeal carcinoma;nm23-H1 protein;immunohistochemistry
nm23基因被认为是一种肿瘤转移抑制基因。有关它在鼻咽癌的发生、发展作用的报道极少，且结果不尽一致。为此，我们使用nm23-H1单克隆抗体免疫组化法检测80例鼻咽癌组织和20例无瘤鼻咽部组织。现将结果报道如下。
1 材料和方法
1.1检测对象：鼻咽癌80例，男58例，女22例，平均年龄42岁，均为初诊病人，病理分型为低分化鳞癌。按1992年福州分期标准：Ⅰ期10例，Ⅱ期20例，Ⅲ期22例，Ⅳ期28例。其中经常规放疗后随访28例，时间为1～1.5年。对照为无瘤鼻咽部炎症组织20例，男12例，女8例，平均年龄39岁。
1.2 试剂与检测方法：鼠抗人nm23-H1单克隆抗体免疫组化试剂盒(S-P法)、DAB试剂盒均购于北京中山生物工程公司。免疫组化方法按产品说明书进行。每次试验均用已知阳性片作阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作空白对照和用非免疫的正常小鼠血清同等倍数释稀做替代对照。
, http://www.100md.com
1.3 结果判定：细胞浆和(或)细胞核被染成棕黄色并明显高于背景定为阳性，不着色者为阴性。
1.4 统计学处理：采用χ2检验。
2 结 果
2.1nm23-H1基因表达阳性率：见表1。从表1可见显示无瘤炎症组织nm23-H1表达的阳性率与鼻咽癌组织相比，无显著性差异(χ2=0.050 7，P>0.05)。
表1 nm23-H1在鼻咽部组织表达阳性率 病理诊断
n
nm23-H1的表达
, 百拇医药
P
+
-
阳性率(%)
炎症
20
15
5
75
>0.05
低分化鳞癌
80
58
, 百拇医药 22
72.5
2.2 nm23-H1基因产物表达与鼻咽癌临床参数关系：见表2。从表2可见，nm23-H1阳性表达与鼻咽癌患者性别、临床分期、原发灶及颈转移淋巴结大小无关(P>0.05)。但无颈淋巴结转移者阳性表达率显著高于已有颈淋巴结转移者(P<0.05)。
2.3 nm23蛋白表达与鼻咽癌患者预后的关系：见表3。从表3显示，随访1～1.5年患者，有无局部复发或远处转移组差异无显著性(P>0.05)。表2 nm23-H1蛋白表达与鼻咽癌临床参数的关系 项 目
性别
临床分期
原发灶
, http://www.100md.com
淋巴结*
男
女
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
T1
T2
T3
T4
N0
, http://www.100md.com
N1
N2
N3
n
58
22
10
20
22
28
15
22
26
, http://www.100md.com
17
30
25
13
12
阳性例数
43
15
9
14
16
19
11
19
, http://www.100md.com
16
12
26
16
9
7
阳性率(%)
74.14
68.18
90
70
72.73
67.86
, 百拇医药
73.33
86.36
61.54
70.59
86.67
64
69.23
58.33
χ2
0.283 8
1.902 0
3.7241
, http://www.100md.com P
>0.05
>0.05
>0.05
* N0与N1～3比较，χ2=4.831 8，P<0.05，N1、N2、N3之间比较，χ2=0.321 6，P>0.05。晚期(Ⅲ～Ⅳ期)与早期(Ⅰ～Ⅱ期)比较，χ2=0.418 0，P>0.05
表3 nm23蛋白表达与鼻咽癌患者预后关系 复发或转移
n
阳性例数
, 百拇医药
阳性率(%)
P
无
13
11
84.62
>0.05
有
15
11
73.33
3 讨 论
nm23基因是1988年Steeg等[1]首次从小鼠黑色素瘤细胞株中分离出来，它定位于17号染色体长臂(17q24)，其家族包括nm23-H1，nm23-H2和nm23-H3b。国内外一些报道认为nm23-H1与肿瘤浸润、转移关系更为密切。它对乳腺癌、胃肠道癌、肝癌等的浸润、转移及预后有重要意义[2～4]。
, 百拇医药
nm23-H1基因与鼻咽癌发生、发展关系，文献报道不多，且结果矛盾不少。郑天荣等[5]报道鼻咽癌组织nm23蛋白表达阳性率显著高于正常组织，晚期(Ⅲ～Ⅳ期)鼻咽癌组织表达阳性率又显著高于早期(Ⅱ期)，认为nm23-H1基因与鼻咽癌发生有关，与其转移无关，晚期组织高表达可能与细胞快速增殖有关。本组结果显示，鼻咽癌组织中nm23蛋白表达与正常组织对比，差异无统计学意义(P>0.05)；鼻咽癌nm23-H1蛋白在不同性别、晚期(Ⅲ～Ⅳ期)与早期(Ⅰ～Ⅱ期)之间，原发灶和颈淋巴结转移灶大小之间表达阳性率，差异无显著性(P>0.05)，但无颈部淋巴结转移组(N0)nm23-H1蛋白表达阳性率则显著高于已有颈淋巴结转移组(P<0.05)。本组结果不支持nm23与组织细胞恶性变和肿瘤发生的观点，认为是人体正常组织表达的基因。鼻咽癌组织的nm23蛋白表达与癌组织的局部浸润、扩散无关，但却显示与有无颈部淋巴结转移有关，与郭翔等[6]报道有些相似。
, http://www.100md.com
人类nm23基因蛋白表达与鼻咽癌患者预后相关性各说不一。郭翔观察放疗后5年患者，发现表达阴性组的局部复发和远处转移率较阳性组高，生存曲线分析表明阳性表达组的生存率高于阴性表达组。认为nm23蛋白高表达是鼻咽癌患者预后良好的指标[6]。但郑天荣等[5]报道的结果则相反，认为nm23蛋白表达与预后不良有关。本组对部分患者随访1～1.5年的鼻咽癌组织进行检测，发现在有无复发、转移的两组间差异无显著性(P>0.05)。本组缺乏长期随访资料，且病例数较少，与生存期关系有待进一步观察。
造成上述报道不尽一致的原因，恐与检测使用的抗体不同有关。本组与郭翔使用的为单克隆抗体，而郑天荣等使用的是多克隆抗体，抗体的特异性不同可导致实验结果不一致。Atai等[7]使用RT-PCR检测甲状腺癌中nm23-H1和nm23-H2的mRNA表达水平，发现转移淋巴结中nm23-H1 mRNA不表达或低表达，而nm23-H2 mRNA则高表达，使用多克隆抗体检测，则发现癌组织均有nm23-H1及nm23-H2蛋白反应，且nm23-H1与甲癌转移密切相关。
, 百拇医药
nm23蛋白与二磷酸核苷酸酶(NDPK)高度同源。有观点认为nm23基因产物就是NDPK，nm23基因的作用是通过NDPK活性。NDPK介导的转磷酸作用提供GTP，若GTP不足，既可使微管聚合异常而导致细胞非整倍体染色体形成，又通过影响细胞骨架而影响细胞运动，从而促进肿瘤细胞浸润转移。另方面，NDPK在信号传导进程中使GDP还原为GTP，从而激活G蛋白，引发一系列G蛋白介导的细胞内信号传导反应，参与调节发育和肿瘤发展。但是nm23蛋白的抑制转移作用还不能与NDPK作用等同起来。某些肿瘤，如神经母细胞瘤中nm23基因表达反与肿瘤恶性程度成正相关。这与nm23基因蛋白在鼻咽癌组织表达结果不尽一致是相符的。因此，nm23基因在肿瘤侵袭转移中的作用仍不明确，有待于进一步研究。
作者简介：黄光武：指导老师
参考文献
1 Steeg PS,Bevilacyua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with tumor metastatic potential.J Natl Cancer Inst,1988,80:200
, http://www.100md.com
2 Tokunaya Y,Vrano T,Furukaua K,et al.Reduced expression of nm23-H1,But not of nm23-H2 is concordant with the frequency of lymph-node metastasis of human breast cancer.Int J Cancer,1993,55:66
3 Kodera Y,Isobe KI,Yamauchi M,et al.Expression of nm23-H1 RNA levels in human gastric cancer tissues:a negative correlation with nodol metastasis.Cancer,1994,73:259
4 Nakayama T,Ohtsuru A,Nakao K,et al.Expression in hepatocellular carcinoma of nucleoside diphosphate kinase,a homolog of the nm23 gene product.J Natl Cancer Inst,1992,84:1 349
, 百拇医药
5 郑天荣，谢佐福，林贤东，等.nm23蛋白在人鼻咽癌中的表达.中华病理学杂志，1997，26(2)：118
6 郭 翔，闵华庆，邵建永，等.nm23-H1基因产物在人鼻咽癌中的表达及其临床意义.癌症，1997，16(2)：119
7 Arai T,Watanabe M,Onodera M,et al.Reduced nm23-H1 messenger RNA expression in metastatic lymph nodes patients with papillary carcinoma of the thyroid.Am J Pathol,1993,142:1938
收稿日期：1998-03-10, 百拇医药(莫武宁 黄光武 邝国乾*)