胆红素对磷钨酸镁沉淀法测定HDL-C的影响及消除方法探讨
作者：刘素兰 梁 华
单位：刘素兰(川北医学院附属医院检验科 637000)；梁 华(解放军51医院)
关键词：
川北医学院学报/990174 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的测定作为血脂测定中的一项重要指标已被广泛应用于心血管疾病的研究与临床，大量研究表明，HDL-C水平与动脉粥样硬化呈负相关，并将HDL-C下降作为冠心病危险因素指标之一。HDL-C的检测方法较多，作为常规方法的化学沉淀由于操作简单，不需昂贵设备且费用较低，适用于普通实验室[1]。其中磷钨酸—镁沉淀法即为其中之一，但笔者在临床应用中发现在对黄疸病人血清采用此法测定时，血清胆红素会产生干扰，使测定结果不准确。为了解胆红素的干扰情况及其消除干扰的方法，笔者采用铁氰化物氧化法去除胆红素，对黄疸标本在去除胆红素前后进行HDL-C测定，并把结果进行比较，以了解胆红素的影响及其消除情况，现将结果报告如下。
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1 材料与方法
1.1 材料 1.5mmol/L高铁氰化钾生理盐水溶液(自配)；HDL-C测定试剂(迈克公司)；HDL-C标准液：1.58mmol/L、1.30mmol/L(迈克公司)；Beckman Synchron CX7型全自动生化分析仪。黄疸标本：均来自本院门诊及住院病人。
1.2 方法 每份标本均分为两份，一份按说明书用磷钨酸—镁沉淀离心后取上清液待测；另一份标本在沉淀前先加入高铁氰化钾处理，然后沉淀离心取上清液待测，同时每份标本均测定其胆红素浓度。
2 结果
2.1 标本胆红素浓度范围为(37.4～443)μmol/L；胆红素去除前后HDL-C测定结果见表1
表1 不同浓度胆红素去除前后HDL-C测定结果比较 胆红素浓度
, 百拇医药
(μmol/L)
去除前HDL-C浓度
(mmol/L)
去除后HDL-C浓度
(mmol/L)
HDL-C增加
(%)
37.4
1.07
1.08
0.93
47.8
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0.52
0.61
17.0
86.0
0.29
0.39
34.0
155
0.79
1.43
81.0
271
0.12
, 百拇医药
0.22
83.0
344
0.20
0.19
-5.0
443
0.83
0.62
-25.0
2.2 回收试验 在标本中加入已知浓度的HDL-C标准液，然后分别采用两种方法测定，比较回收率。原方法回收率为48%～89%；加入高铁氰化钾后回收率为88%～119%，回收率明显提高。
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2.3 批内及批间精密度 分别取两份高、低浓度的胆红素标本，作去胆红素方法的批内及批间重复性实验，其批内变异系数为1.06%～2.9%，批间变异系数为2.1%～4.1%。
2.4 高铁氰化钾浓度选择 分别用1.0mmol/L、1.5mmol/L、2.0mmol/L三种浓度高铁氰化钾，作三种浓度胆红素标本的回收实验，结果见表2。表2 不同浓度高铁氰化钾回收率比较 胆红素浓度(μmol/L)
不同浓度高铁氰化钾HDL-C的回收率(%)
1.0mmol/L
1.5mmol/L
2.0mmol/L
37.4
69.1
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90.2
122.4
86.0
67.3
94.6
121.2
271.0
70.8
98.7
123.6
3 讨论
3.1 胆红素对直接法测定HDL-C的影响已有报道[2]，而笔者的实验结果表明，胆红素对磷钨酸—镁沉淀法测定HDL-C也有干扰，从表1中可以看出，胆红素使HDL-C测定结果偏低，且胆红素浓度越高，影响越大，考虑此干扰主要是胆红素在520nm处有较强的吸光度，使测定结果偏低。笔者利用高铁氰化钾氧化性，将胆红素氧化转化成胆绿素，从而达到消除干扰的作用，有较好的效果。
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3.2 对于高铁氰化钾浓度，笔者经比较认为以1.5mmol/L浓度效果较好。
3.3 对于胆红素浓度太高的标本(TB>340μmol/L)在采用此方法后，HDL-C浓度并未增加反而下降，考虑其因重度黄疸病人血清中成份较为复杂，如某些蛋白成份或药物对此方法产生影响，尚需进一步研究。 参考文献
[1] 鄢盛恺，林其燧.高密脂蛋白胆固醇的检测方法及标准化研究进展.中华医学检验杂志，1998：21(1)：19～11
[2] 卢志明.一种新的血清中的高密度胆固醇的直接检测法.国外医学临床生物化学与检验学分册，1996；17(5)：238
(收稿日期：1998-09-25), 百拇医药
单位：刘素兰(川北医学院附属医院检验科 637000)；梁 华(解放军51医院)
关键词：
川北医学院学报/990174 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的测定作为血脂测定中的一项重要指标已被广泛应用于心血管疾病的研究与临床，大量研究表明，HDL-C水平与动脉粥样硬化呈负相关，并将HDL-C下降作为冠心病危险因素指标之一。HDL-C的检测方法较多，作为常规方法的化学沉淀由于操作简单，不需昂贵设备且费用较低，适用于普通实验室[1]。其中磷钨酸—镁沉淀法即为其中之一，但笔者在临床应用中发现在对黄疸病人血清采用此法测定时，血清胆红素会产生干扰，使测定结果不准确。为了解胆红素的干扰情况及其消除干扰的方法，笔者采用铁氰化物氧化法去除胆红素，对黄疸标本在去除胆红素前后进行HDL-C测定，并把结果进行比较，以了解胆红素的影响及其消除情况，现将结果报告如下。
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1 材料与方法
1.1 材料 1.5mmol/L高铁氰化钾生理盐水溶液(自配)；HDL-C测定试剂(迈克公司)；HDL-C标准液：1.58mmol/L、1.30mmol/L(迈克公司)；Beckman Synchron CX7型全自动生化分析仪。黄疸标本：均来自本院门诊及住院病人。
1.2 方法 每份标本均分为两份，一份按说明书用磷钨酸—镁沉淀离心后取上清液待测；另一份标本在沉淀前先加入高铁氰化钾处理，然后沉淀离心取上清液待测，同时每份标本均测定其胆红素浓度。
2 结果
2.1 标本胆红素浓度范围为(37.4～443)μmol/L；胆红素去除前后HDL-C测定结果见表1
表1 不同浓度胆红素去除前后HDL-C测定结果比较 胆红素浓度
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(μmol/L)
去除前HDL-C浓度
(mmol/L)
去除后HDL-C浓度
(mmol/L)
HDL-C增加
(%)
37.4
1.07
1.08
0.93
47.8
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0.52
0.61
17.0
86.0
0.29
0.39
34.0
155
0.79
1.43
81.0
271
0.12
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0.22
83.0
344
0.20
0.19
-5.0
443
0.83
0.62
-25.0
2.2 回收试验 在标本中加入已知浓度的HDL-C标准液，然后分别采用两种方法测定，比较回收率。原方法回收率为48%～89%；加入高铁氰化钾后回收率为88%～119%，回收率明显提高。
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2.3 批内及批间精密度 分别取两份高、低浓度的胆红素标本，作去胆红素方法的批内及批间重复性实验，其批内变异系数为1.06%～2.9%，批间变异系数为2.1%～4.1%。
2.4 高铁氰化钾浓度选择 分别用1.0mmol/L、1.5mmol/L、2.0mmol/L三种浓度高铁氰化钾，作三种浓度胆红素标本的回收实验，结果见表2。表2 不同浓度高铁氰化钾回收率比较 胆红素浓度(μmol/L)
不同浓度高铁氰化钾HDL-C的回收率(%)
1.0mmol/L
1.5mmol/L
2.0mmol/L
37.4
69.1
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90.2
122.4
86.0
67.3
94.6
121.2
271.0
70.8
98.7
123.6
3 讨论
3.1 胆红素对直接法测定HDL-C的影响已有报道[2]，而笔者的实验结果表明，胆红素对磷钨酸—镁沉淀法测定HDL-C也有干扰，从表1中可以看出，胆红素使HDL-C测定结果偏低，且胆红素浓度越高，影响越大，考虑此干扰主要是胆红素在520nm处有较强的吸光度，使测定结果偏低。笔者利用高铁氰化钾氧化性，将胆红素氧化转化成胆绿素，从而达到消除干扰的作用，有较好的效果。
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3.2 对于高铁氰化钾浓度，笔者经比较认为以1.5mmol/L浓度效果较好。
3.3 对于胆红素浓度太高的标本(TB>340μmol/L)在采用此方法后，HDL-C浓度并未增加反而下降，考虑其因重度黄疸病人血清中成份较为复杂，如某些蛋白成份或药物对此方法产生影响，尚需进一步研究。 参考文献
[1] 鄢盛恺，林其燧.高密脂蛋白胆固醇的检测方法及标准化研究进展.中华医学检验杂志，1998：21(1)：19～11
[2] 卢志明.一种新的血清中的高密度胆固醇的直接检测法.国外医学临床生物化学与检验学分册，1996；17(5)：238
(收稿日期：1998-09-25), 百拇医药