再生障碍性贫血病人外周血T淋巴细胞亚群的检测
作者：宋如俊 董增义 孙秀芳 刘 毅
单位：宋如俊 董增义 刘 毅(青岛医学院(青岛 266021)儿科研究所)；孙秀芳(附属医院儿科)
关键词：贫血，再生障碍性；淋巴细胞亚群；显微镜检查，荧光
齐鲁医学杂志990104 【摘要】 ①目的 探讨T淋巴细胞亚群的变化在再生障碍性贫血发病机制中的作用。②方法 用间接免疫荧光法检测103例再生障碍性贫血病人外周血T淋巴细胞亚群。③结果 再生障碍性贫血病人CD+3,CD+4比例与正常对照组比较无明显差异(t=0.54～1.39, P>0.05);CD+8比例较对照组明显升高(t=5.99,P<0.001)；CD+4/CD+8比值较对照组明显降低(t=3.58,P<0.001)。将再生障碍性贫血病人的T淋巴细胞亚群结果以对照组CD+4/CD+8低界(1.160∶1.000)为标准分成两组时，则比值≥1.160∶1.000组各指标与对照组比较均无明显差异(t=1.38～1.47,P均>0.05)；而比值<1.160∶1.000组除CD+3比值与对照组比较无明显差异外(t=0.28,P>0.05)，其他各指标均较对照组有明显差异(t=5.29～13.37,P<0.001)。④结论 T淋巴细胞免疫功能异常与再生障碍性贫血的发生、发展有密切关系。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R775.5
STUDY OF PERIPHERAL T CELL SUBGROUP OF APLASTIC ANEMIA PATIENTS
Song Rujun, Dong Zengyi, Sun Xiufang, et al
Institute of Pediatrics, Qingdao Medical College, Qingdao 266003
【ABSTRACT】 Objective To investigate the effect of T cell subgroup changes in the etiology of aplastic anemia. Methods Peripheral T cell subgroups of 103 aplastic anemia patients were studied with indirect immunofluorescence assay. Results The amount of CD+3 and CD+4 in aplastic anemia patients showed no significant difference compared with that of the control group(t=0.54-1.39, P<0.05), while CD+8 increased significantly(t=5.99, P<0.001) and CD+4/CD+8 decreased significantly(t=3.58, P<0.001). If all the patients were divided into two groups according to the lowest value of CD+4/CD+8 of the control group. in the group with CD+4/CD+8 value>1.160∶1, CD+3, CD+4, CD+8 and CD+4/CD+8 showed no significant differences compared with that of the control group(t=1.38-1.47, P>0.05), while in the second group with CD+4/CD+8<1.160∶1, all the items showed significant differences compared with that of the control group except for CD+3(t=5.29-13.37, P<0.001).Conclusion The abnormality of cell immunology had close relationship with the development and progress of aplastic anemia.
, 百拇医药
【KEY WORDS】 anemia, aplastic; lymphocyte subsets; microscopy, fluorescence
再生障碍性贫血(再障)是由造血干细胞损伤所致的一组异质性疾病，对其发病机制尚无满意的解释。已有研究表明，部分再障病人的发病与抑制性T淋巴细胞的免疫介入，从而抑制造血有关，表现为外周血CD+8淋巴细胞比例升高；某些再障病人的淋巴细胞能抑制正常造血细胞克隆的生长。我们对103例再障病人外周血T淋巴细胞亚群进行检测，并探讨其在再障发病中的作用。
1 材料和方法
1.1 研究对象
1.1.1 观察组 103例，均为再障病人，男64例,女39例；年龄1～13岁，平均年龄(8.26±3.53)岁。所有病人均经临床表现及实验室检查确诊。病人诊断均符合1987年全国再生障碍性贫血会议制订的标准〔1〕 。
, 百拇医药
1.1.2 对照组 35例，男21例，女14例；年龄1～13岁，平均年龄(6.14±2.51)岁。
1.2 检测方法
采用间接免疫荧光法进行检测。分别采取静脉血2.0mL,肝素抗凝后，用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，利用CD+3,CD+4,CD+8单克隆抗体及荧光抗体作用后，在荧光显微镜下观察各T淋巴细胞亚群的比例。单克隆抗体及荧光抗体药盒由卫生部武汉生物制品研究所提供。
1.3 统计学处理
采用两样本均数差别的t检验。
2 结 果
再障病人外周血T淋巴细胞CD+3,CD+4亚群比例与对照组比较，差异均无显著性(t=0.54～1.39,P>0.05)；CD+8所占比例较对照组明显升高(t=5.99,P<0.001)，CD+4/CD+8比值则较对照组明显降低(t=3.58,P<0.001)。以对照组CD+4/CD+8比值低界(1.160∶1)为标准，将上述再障病人T淋巴细胞亚群结果分为两组,CD+4/CD+8比值≥1.160∶1组(Ⅰ组),CD+4/CD+8比值<1.160∶1(Ⅱ组)。 Ⅰ 组 CD+3，CD+4，CD+8比例及CD+4/CD+8比值与对照组比较，差异均无显著意义(t=1.38～1.47, P均>0.05)。Ⅱ组CD+3比例与对照组比较，差异无显著意义(t=0.28,P>0.05)；CD+4比例较对照组明显降低，差异有极显著性(t=5.29，P<0.001)；CD+8比例较对照组明显升高，差异有极显著性(t=10.19，P<0.001)；CD+4/CD+8比值较对照组明显降低，差异有极显著性(t=13.37,P<0.001)。见表1.
, 百拇医药
表1 再障病人外周血T淋巴细胞亚群检测结果(
±s) 组别
n
CD+3
CD+4
CD+8
CD+4/CD+8
对照组
35
, 百拇医药 63.70±5.70
42.10±6.80
29.70±3.50
1.440±0.280
再障组
103
64.37±6.44
39.88±8.52
38.63±8.49*
1.114±0.508*
Ⅰ组
, 百拇医药
35
66.34±9.42
45.17±9.85
32.34±9.98
1.600±0.598
Ⅱ组
68
63.35±6.26
35.70±5.29*
42.03±6.75*
0.865±0.162*
, 百拇医药
与对照组比较,* t=3.58～13.37 ,P<0.0013 讨 论
再障的发生机制现在尚不清楚，一般认为有如下3种机制：①造血干细胞缺乏；②骨髓微环境的缺陷；③免疫机制异常而导致的骨髓衰竭。Lave等〔2〕 对细胞培养的结果显示，再障的CD+8细胞在体外能抑制自身及正常人粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)和红细胞系集落(CFU-E)的生长〔2,3〕，并且能抑制骨髓CD+34细胞形成CFU-GM与CFU-E的能力〔4〕。此类细胞一般认为是活化的T淋巴细胞，活化T淋巴细胞表达的抗原及其释放的IL-2,γ-干扰素等造血抑制性淋巴因子，抑制造血细胞的增殖和分化，从而导致骨髓衰竭。再障病人T淋巴细胞亚群的变化及活化T淋巴细胞分泌的抑制性淋巴因子与再障发病的关系日益受到重视。
本文结果表明，再障病人外周血T淋巴细胞亚群中的CD8+细胞升高，致使CD+4/CD+8比值下降，由于T淋巴细胞的免疫调节作用主要取决于CD+4细胞与CD+8细胞之间的协调作用，故本文中以CD+4/CD+8为标准将再障病人分为CD+4/CD+8下降组与不降组进行统计分析时，发现CD+4/CD+8比值下降组病人CD+4下降，CD+8上升，因而CD+4/CD+8比值下降；而CD+4/CD+8比值不降组的各项指标均与对照组无明显差异。这说明，再障病人免疫机制异常，主要是CD+8 T淋巴细胞即抑制性作用过强。表现为再障病人全体CD+8上升，CD+4/CD+8比值下降，这与国外文献报道一致〔5～7〕。同时，我们进行分组统计分析发现，CD+4/CD+8不降低组T淋巴细胞亚群无明显异常，这一点表明再障发病机制的不同，从而支持了某些再障病人发病并非免疫功能紊乱所致的观点〔8〕；而CD+4/CD+8比值下降组不仅CD+8上升，且CD+4下降，这一点表示免疫功能紊乱所致再障发病机制中，辅助性T淋巴细胞功能下降也是一不可忽视的因素。
, 百拇医药
总之，通过再障病人T淋巴细胞亚群的分析，可以进一步了解再障发病机制，指导临床合理治疗。
参考文献
1 再障诊断标准与疗效标准.中华血液学杂志,1987,8(8):封四
2 Lave T,Castro-malaspina H,Kernan NA,et al. In vitro interferon gamma production by cultured T-cells in severe AA: correlation with granulomonopoietix inhibition in patients who respond to antithymocyte globulin. Br J Haematol,1988,69:545
3 Miura A,Endo K,Sugawara T, et al. T cell-mediated inhibition of erythropoiesis in aplastic anaemia:the possible role of IFN-gamma and TNF-alpha.Br J Haematol,1991,78:442
, 百拇医药
4 Teramura M,Saito H,Kobayashi S,et al. Mechanism of immunosuppressive therapy for aplastic anemia.Rinsho-Ketsueki,1993,34:273
5 Marsh JCW, Gordon-Smith E. Treatment of aplastic anemia with antilymphocyte globin and cyclosporin.Int J Hematol,1995,62:133
6 Frickhofen N,Liu JM,Yong NS. Etiologic mechanisms of hematopoietic failure.Am J Pediatric Hematol Oncol,1990,12:385
7 Torok-Storb B.Etiological mechanisms in immune-mediated aplastic anemia. Am J Pediatr Hematol Oncol,1990,12：396
8 李灏珠主编.内科学.北京：人民卫生出版社,1989.530～532
(1998-03-26收稿 1998-11-24修回), http://www.100md.com
单位：宋如俊 董增义 刘 毅(青岛医学院(青岛 266021)儿科研究所)；孙秀芳(附属医院儿科)
关键词：贫血，再生障碍性；淋巴细胞亚群；显微镜检查，荧光
齐鲁医学杂志990104 【摘要】 ①目的 探讨T淋巴细胞亚群的变化在再生障碍性贫血发病机制中的作用。②方法 用间接免疫荧光法检测103例再生障碍性贫血病人外周血T淋巴细胞亚群。③结果 再生障碍性贫血病人CD+3,CD+4比例与正常对照组比较无明显差异(t=0.54～1.39, P>0.05);CD+8比例较对照组明显升高(t=5.99,P<0.001)；CD+4/CD+8比值较对照组明显降低(t=3.58,P<0.001)。将再生障碍性贫血病人的T淋巴细胞亚群结果以对照组CD+4/CD+8低界(1.160∶1.000)为标准分成两组时，则比值≥1.160∶1.000组各指标与对照组比较均无明显差异(t=1.38～1.47,P均>0.05)；而比值<1.160∶1.000组除CD+3比值与对照组比较无明显差异外(t=0.28,P>0.05)，其他各指标均较对照组有明显差异(t=5.29～13.37,P<0.001)。④结论 T淋巴细胞免疫功能异常与再生障碍性贫血的发生、发展有密切关系。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R775.5
STUDY OF PERIPHERAL T CELL SUBGROUP OF APLASTIC ANEMIA PATIENTS
Song Rujun, Dong Zengyi, Sun Xiufang, et al
Institute of Pediatrics, Qingdao Medical College, Qingdao 266003
【ABSTRACT】 Objective To investigate the effect of T cell subgroup changes in the etiology of aplastic anemia. Methods Peripheral T cell subgroups of 103 aplastic anemia patients were studied with indirect immunofluorescence assay. Results The amount of CD+3 and CD+4 in aplastic anemia patients showed no significant difference compared with that of the control group(t=0.54-1.39, P<0.05), while CD+8 increased significantly(t=5.99, P<0.001) and CD+4/CD+8 decreased significantly(t=3.58, P<0.001). If all the patients were divided into two groups according to the lowest value of CD+4/CD+8 of the control group. in the group with CD+4/CD+8 value>1.160∶1, CD+3, CD+4, CD+8 and CD+4/CD+8 showed no significant differences compared with that of the control group(t=1.38-1.47, P>0.05), while in the second group with CD+4/CD+8<1.160∶1, all the items showed significant differences compared with that of the control group except for CD+3(t=5.29-13.37, P<0.001).Conclusion The abnormality of cell immunology had close relationship with the development and progress of aplastic anemia.
, 百拇医药
【KEY WORDS】 anemia, aplastic; lymphocyte subsets; microscopy, fluorescence
再生障碍性贫血(再障)是由造血干细胞损伤所致的一组异质性疾病，对其发病机制尚无满意的解释。已有研究表明，部分再障病人的发病与抑制性T淋巴细胞的免疫介入，从而抑制造血有关，表现为外周血CD+8淋巴细胞比例升高；某些再障病人的淋巴细胞能抑制正常造血细胞克隆的生长。我们对103例再障病人外周血T淋巴细胞亚群进行检测，并探讨其在再障发病中的作用。
1 材料和方法
1.1 研究对象
1.1.1 观察组 103例，均为再障病人，男64例,女39例；年龄1～13岁，平均年龄(8.26±3.53)岁。所有病人均经临床表现及实验室检查确诊。病人诊断均符合1987年全国再生障碍性贫血会议制订的标准〔1〕 。
, 百拇医药
1.1.2 对照组 35例，男21例，女14例；年龄1～13岁，平均年龄(6.14±2.51)岁。
1.2 检测方法
采用间接免疫荧光法进行检测。分别采取静脉血2.0mL,肝素抗凝后，用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，利用CD+3,CD+4,CD+8单克隆抗体及荧光抗体作用后，在荧光显微镜下观察各T淋巴细胞亚群的比例。单克隆抗体及荧光抗体药盒由卫生部武汉生物制品研究所提供。
1.3 统计学处理
采用两样本均数差别的t检验。
2 结 果
再障病人外周血T淋巴细胞CD+3,CD+4亚群比例与对照组比较，差异均无显著性(t=0.54～1.39,P>0.05)；CD+8所占比例较对照组明显升高(t=5.99,P<0.001)，CD+4/CD+8比值则较对照组明显降低(t=3.58,P<0.001)。以对照组CD+4/CD+8比值低界(1.160∶1)为标准，将上述再障病人T淋巴细胞亚群结果分为两组,CD+4/CD+8比值≥1.160∶1组(Ⅰ组),CD+4/CD+8比值<1.160∶1(Ⅱ组)。 Ⅰ 组 CD+3，CD+4，CD+8比例及CD+4/CD+8比值与对照组比较，差异均无显著意义(t=1.38～1.47, P均>0.05)。Ⅱ组CD+3比例与对照组比较，差异无显著意义(t=0.28,P>0.05)；CD+4比例较对照组明显降低，差异有极显著性(t=5.29，P<0.001)；CD+8比例较对照组明显升高，差异有极显著性(t=10.19，P<0.001)；CD+4/CD+8比值较对照组明显降低，差异有极显著性(t=13.37,P<0.001)。见表1.
, 百拇医药
表1 再障病人外周血T淋巴细胞亚群检测结果(
±s) 组别n
CD+3
CD+4
CD+8
CD+4/CD+8
对照组
35
, 百拇医药 63.70±5.70
42.10±6.80
29.70±3.50
1.440±0.280
再障组
103
64.37±6.44
39.88±8.52
38.63±8.49*
1.114±0.508*
Ⅰ组
, 百拇医药
35
66.34±9.42
45.17±9.85
32.34±9.98
1.600±0.598
Ⅱ组
68
63.35±6.26
35.70±5.29*
42.03±6.75*
0.865±0.162*
, 百拇医药
与对照组比较,* t=3.58～13.37 ,P<0.0013 讨 论
再障的发生机制现在尚不清楚，一般认为有如下3种机制：①造血干细胞缺乏；②骨髓微环境的缺陷；③免疫机制异常而导致的骨髓衰竭。Lave等〔2〕 对细胞培养的结果显示，再障的CD+8细胞在体外能抑制自身及正常人粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)和红细胞系集落(CFU-E)的生长〔2,3〕，并且能抑制骨髓CD+34细胞形成CFU-GM与CFU-E的能力〔4〕。此类细胞一般认为是活化的T淋巴细胞，活化T淋巴细胞表达的抗原及其释放的IL-2,γ-干扰素等造血抑制性淋巴因子，抑制造血细胞的增殖和分化，从而导致骨髓衰竭。再障病人T淋巴细胞亚群的变化及活化T淋巴细胞分泌的抑制性淋巴因子与再障发病的关系日益受到重视。
本文结果表明，再障病人外周血T淋巴细胞亚群中的CD8+细胞升高，致使CD+4/CD+8比值下降，由于T淋巴细胞的免疫调节作用主要取决于CD+4细胞与CD+8细胞之间的协调作用，故本文中以CD+4/CD+8为标准将再障病人分为CD+4/CD+8下降组与不降组进行统计分析时，发现CD+4/CD+8比值下降组病人CD+4下降，CD+8上升，因而CD+4/CD+8比值下降；而CD+4/CD+8比值不降组的各项指标均与对照组无明显差异。这说明，再障病人免疫机制异常，主要是CD+8 T淋巴细胞即抑制性作用过强。表现为再障病人全体CD+8上升，CD+4/CD+8比值下降，这与国外文献报道一致〔5～7〕。同时，我们进行分组统计分析发现，CD+4/CD+8不降低组T淋巴细胞亚群无明显异常，这一点表明再障发病机制的不同，从而支持了某些再障病人发病并非免疫功能紊乱所致的观点〔8〕；而CD+4/CD+8比值下降组不仅CD+8上升，且CD+4下降，这一点表示免疫功能紊乱所致再障发病机制中，辅助性T淋巴细胞功能下降也是一不可忽视的因素。
, 百拇医药
总之，通过再障病人T淋巴细胞亚群的分析，可以进一步了解再障发病机制，指导临床合理治疗。
参考文献
1 再障诊断标准与疗效标准.中华血液学杂志,1987,8(8):封四
2 Lave T,Castro-malaspina H,Kernan NA,et al. In vitro interferon gamma production by cultured T-cells in severe AA: correlation with granulomonopoietix inhibition in patients who respond to antithymocyte globulin. Br J Haematol,1988,69:545
3 Miura A,Endo K,Sugawara T, et al. T cell-mediated inhibition of erythropoiesis in aplastic anaemia:the possible role of IFN-gamma and TNF-alpha.Br J Haematol,1991,78:442
, 百拇医药
4 Teramura M,Saito H,Kobayashi S,et al. Mechanism of immunosuppressive therapy for aplastic anemia.Rinsho-Ketsueki,1993,34:273
5 Marsh JCW, Gordon-Smith E. Treatment of aplastic anemia with antilymphocyte globin and cyclosporin.Int J Hematol,1995,62:133
6 Frickhofen N,Liu JM,Yong NS. Etiologic mechanisms of hematopoietic failure.Am J Pediatric Hematol Oncol,1990,12:385
7 Torok-Storb B.Etiological mechanisms in immune-mediated aplastic anemia. Am J Pediatr Hematol Oncol,1990,12：396
8 李灏珠主编.内科学.北京：人民卫生出版社,1989.530～532
(1998-03-26收稿 1998-11-24修回), http://www.100md.com