连翘提取物的抗炎镇痛作用
作者：芮菁 尾崎幸** 唐元泰
单位：芮菁 尾崎幸** 唐元泰天津市药品检验所(300070)
关键词：连翘；抗炎；镇痛
中草药/990121 摘 要 对连翘70%甲醇提取物的消炎镇痛作用及其活性部位进行了研究。将连翘干燥果实的甲醇提取液、正己烷萃取甲醇提取液后所得到的正己烷可溶物和水可溶物分别进行真空冷冻干燥，得到3种棕色粉末状物质。通过小鼠毛细血管通透性、扭体反应、足趾肿胀和肉芽肿实验表明，连翘甲醇提取物和正己烷可溶物具有消炎和镇痛作用，而水溶物则无上述效果。证明甲醇提取物中的消炎镇痛活性物质转移到正己烷液中，即极性较低的脂溶性物质为其活性部位。
连翘是传统的中草药，为清热解毒要药，具有抗菌〔1〕、抗病毒、消炎、镇痛等作用。国内外经常把连翘和其它的中草药配伍，制成复方制剂应用于临床〔2，3〕。目前，对于连翘单味药的研究多集中于连翘子〔6〕和叶〔5〕等所含的化学成分及结构定性定量的测定，而对连翘在抗炎镇痛方面药理作用及其活性部位的研究尚未见报道。因此，我们对这方面进行了探讨。
, 百拇医药
1 材料
1.1 连翘：购自天津中药饮片厂，经天津药品检验所鉴定为连翘Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl的果实。
1.2 连翘甲醇提取物的制备：将连翘干燥果实粉碎，用70%甲醇在80℃水浴上回流提取2次，每次6 h，用纱布过滤，得到连翘的甲醇提取液，减压蒸馏除去甲醇，再冷冻干燥处理得棕色粉末状的甲醇提取物。临用时用1%吐温-80溶液配成所需浓度备用。
1.3 正己烷可溶物的制备：取以1.2法所得到的甲醇提取液，用正己烷以1∶1进一步萃取精制，得到可溶于正己烷层的棕色粉末状提取物，即为正己烷可溶物。临用时按70%甲醇提取物3 g/kg剂量为基准，用1%吐温-80溶液配成所需浓度备用。
1.4 水可溶物的制备：正己烷提取后溶于水层的部分经过同样的处理得到的物质为水可溶物。临用前按1.3法的操作，用1%吐温-80溶液配成所需浓度备用。
, 百拇医药
1.5 消炎痛：美国Sigma公司产品。临用时用1%吐温-80溶液配成所需浓度备用。
1.6 实验动物：ddY系雄性小鼠，体重(20±2) g；Wistar系雄性大鼠，体重(180±20) g，均由日本国立医药品食品卫生研究所提供。
2 实验方法〔6〕
2.1 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性实验：取雄性小鼠，随机分成对照组(1%吐温-80)，甲醇提取物1、3 g/kg剂量组，正己烷可溶物0.2 g/kg、水可溶物2.8 g/kg及消炎痛0.01 g/kg剂量组。按10 mL/kg ig给药40 min后，尾iv 4%滂胺蓝溶液0.1 mL/10 g，30 min后，ip 1%醋酸0.1 mL/10 g，20 min后脱颈椎处死小鼠，剪开腹部皮肤，用生理盐水冲洗腹腔，收集冲洗液，调整终体积至20 mL，离心取上清液于分光光度计590 nm处测吸收度，并于标准曲线上查出每只小鼠腹腔渗出的染料量，进行统计比较。
, 百拇医药
2.2 角叉菜致大鼠足跖肿胀实验：取雄性大鼠随机分成对照组、甲醇提取物1、3 g/kg剂量组及消炎痛0.01 g/kg剂量组。先用足肿测定仪测定每鼠右后肢的正常体积，ig给药。30 min后，分别于每组大鼠右后肢足跖sc 1%角叉菜致炎，注射后分别测定30、60、120、180、240、300和360 min时右后肢肿胀的体积，结果以致炎前所测右后肢体积值为基准，计算致炎后不同时间肿胀率。
2.3 棉球肉芽组织增生实验：取雄性大鼠，随机分成对照组、甲醇提取物1、3 g/kg剂量组及消炎痛0.01 g/kg剂量组。在乙醚浅麻醉下，将大鼠背部剃毛，用70%乙醇及0.2%利凡诺消毒后，切开皮肤，将灭菌干燥的20 mg左右的棉球埋入腋部皮下。于手术当日给药，每日1次，连续5 d后处死动物，剥离肉芽组织，用滤纸吸干，放入小瓶中，置干燥箱中干燥后称重。所得结果以埋入前棉球重量为基准，以实验结束后干燥棉球重量的增加率来表示。
2.4 醋酸致小鼠扭体反应实验：取雄性小鼠，随机分成对照组、甲醇提取物1、3 g/kg剂量组、正己烷可溶物0.2 g/kg、水可溶物2.8 g/kg及消炎痛0.01 g/kg剂量组。ig给药。85 min后，ip 0.7%醋酸溶液0.1 mL/10 g，5 min后，记录10 min内的小鼠扭体反应次数，进行统计比较。
, 百拇医药
3 结果
3.1 对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性作用：甲醇提取物3 g/kg和正己烷可溶物0.2 g/kg剂量组，ig给药，与对照组相比，能抑制醋酸致小鼠腹腔的染料渗出作用，其抑制率分别达到52.6%和51.0%，且此两剂量组的作用强度和消炎痛0.01 g/kg剂量组的作用强度相当；而水可溶物2.8 g/kg未显示此种作用(表1)。
表1 对醋酸所致小鼠毛细血管通透性影响 组 别
剂 量(g/kg)
动物数
(只)
染料渗出量
(
±s,μg/只)
, 百拇医药
抑制率
(%)
对照组
—
8
361.3±63.6
甲醇提取物
1
8
306.2±48.5
15.3
3
8
, 百拇医药
171.4±23.3**
52.6
正己烷可溶物
0.2
8
171.1±23.3**
51.0
水可溶物
2.8
8
324.2±42.2
10.3
, 百拇医药
消炎痛
0.01
8
161.3±28.0**
55.4
与对照组比较：**P<0.01
3.2 对角叉菜致大鼠足跖肿胀作用：甲醇提取物3 g/kg剂量组ig给药，与对照组相比，1～6 h内均具有不同程度地抑制大鼠足跖肿胀作用，其中1～4 h的抑制作用强度和消炎痛0.01 g/kg剂量组相比较大致相当，4 h后作用稍有减弱。另外，甲醇提取物1 g/kg剂量组与对照组相比，在3、5和6 h有明显抑制作用(表2)。
3.3 对棉球肉芽组织增生的作用：甲醇提取物3 g/kg剂量组连续5 d ig给药，与对照组相比，对棉球肉芽组织增生有一定程度的抑制作用，但体重的变化与对照组相比无显著性差异(表3)。
, 百拇医药
表2 对角叉菜所致足肿胀的影响(±s,n＝8) 组别
剂量(g/kg)
足肿胀增加百分率(%)
30 min
60 min
120 min
180 min
240 min
300 min
360 min
, 百拇医药 对照组
—
118.2±2.7
120.4±2.9
126.9±2.9
133.6±4.1
144.6±4.3
161.7±5.8
164.5±5.0
甲醇提取物
1
116.7±2.1
, http://www.100md.com
118.5±2.2
118.7±1.5
123.0±1.7*
139.1±4.2
141.9±4.3*
138.9±4.2*
3
112.7±3.5
109.8±3.2
108.7±2.4**
114.4±3.5**
, 百拇医药
122.6±4.4**
137.2±7.0**
138.7±6.8**
消炎痛
0.01
110.8±4.1
109.6±4.2*
109.1±4.8**
108.4±4.4**
112.0±5.1**
, http://www.100md.com
118.9±5.4**
118.1±5.5**
与对照组比较：*P<0.05 **P<0.01表3 对棉球肉芽组织增生的影响(±s) 组 别
剂量(g/kg)
动物
(只)
体重增长
(%)
干燥棉球增重
, 百拇医药
(%)
对照组
-
8
3.0±0.5
241.9±16.2
甲醇提取物
1
8
3.0±0.7
223.5±23.2
3
8
, 百拇医药
3.5±0.7
174.1±14.6*
消炎痛
0.01
8
2.7±0.5
124.4±16.0**
与对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
3.4 对醋酸引起扭体反应的作用：甲醇提取物3 g/kg和正己烷可溶物0.2 g/kg剂量组ig给药，与对照组相比，能抑制小鼠扭体反应次数，抑制率分别为49.5%和48.0%，且此两种剂量组的抑制作用强度和消炎痛0.01 g/kg剂量组的作用强度相近；水可溶物2.8 g/kg无此作用(表4)。
, 百拇医药
表4 对醋酸所致小鼠扭体反应的作用 组别
剂量(g/kg)
动物
(只)
10 min内扭体
反应数(±s)
抑制率
(%)
对照组
—
8
, 百拇医药 32.9±2.9
甲醇提取物
1
8
29.3±2.6
10.9
3
8
16.6±1.5**
49.5
正己烷可溶物
0.2
8
, 百拇医药
17.1±1.4**
48.0
水可溶物
2.8
8
30.2±2.5
8.2
消炎痛
0.01
8
12.3±2.7**
62.6
, http://www.100md.com
与对照组比较：**P<0.01
4 讨论
众所周知，由醋酸引起毛细血管通透性增加和由角叉菜引起的水肿是炎症过程中的早期病理变化〔7，8〕。实验发现，连翘70%甲醇提取物3 g/kg剂量组可显著抑制小鼠毛细血管通透性增高和大鼠足跖肿胀的功效，表明其对炎症早期有显著的预防作用。纤维组织增生和肉芽屏障的形成是晚期炎症的特征之一，实验证明该提取物显示了一定程度的抑制肉芽组织增生作用，表明其对炎症晚期有一定的治疗效果。在用正己烷萃取70%甲醇提取物所得到的正己烷可溶物和水可溶物进行毛细血管通透性实验，结果表明正己烷可溶物显示了与甲醇提取物同样的效果，而水可溶物则无此效果。可见连翘中抗炎活性物质可用甲醇提取，再用正己烷萃取提纯。另外，由醋酸致小鼠扭体反应实验表明，甲醇提取物和正己烷可溶物能明显降低扭体次数，具有镇痛作用。而水可溶物却无此作用。
综上所述，连翘甲醇提取物具有抗炎和镇痛作用，活性部位存在于正己烷可溶物中，为极性低的脂溶性成分。
, 百拇医药
*Address:Rui Jing,Tianjin Municipal Institute for Drug Control,Tianjin
**日本国立医药品食品卫生研究所生药部室长.
参 考 文 献
[1] 远藤胜也，他.国外医学-中医中药分册，1982，(5)：302
[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典.一部.1990：436、502、506、522
[3] 原田正敏.210处方汉方药物治疗学.东京：广川书店，1985：93、99、100、153
[4] 贺 铭，等.中药通报，1983，(5)：53
[5] 都恒青，等.中草药，1986，17(2)：7
[6] Ozaki Y,et al.Bio Pharm Bull,1996，19(8):1046
[7] Winter A C,et al.Proc Soc Exp,Biol Med,1962，111:544
[8] Whittle A B.Br J Pharmacol,1964，22:246
(1998-02-25 收稿), 百拇医药(芮菁 尾崎幸** 唐元泰)
单位：芮菁 尾崎幸** 唐元泰天津市药品检验所(300070)
关键词：连翘；抗炎；镇痛
中草药/990121 摘 要 对连翘70%甲醇提取物的消炎镇痛作用及其活性部位进行了研究。将连翘干燥果实的甲醇提取液、正己烷萃取甲醇提取液后所得到的正己烷可溶物和水可溶物分别进行真空冷冻干燥，得到3种棕色粉末状物质。通过小鼠毛细血管通透性、扭体反应、足趾肿胀和肉芽肿实验表明，连翘甲醇提取物和正己烷可溶物具有消炎和镇痛作用，而水溶物则无上述效果。证明甲醇提取物中的消炎镇痛活性物质转移到正己烷液中，即极性较低的脂溶性物质为其活性部位。
连翘是传统的中草药，为清热解毒要药，具有抗菌〔1〕、抗病毒、消炎、镇痛等作用。国内外经常把连翘和其它的中草药配伍，制成复方制剂应用于临床〔2，3〕。目前，对于连翘单味药的研究多集中于连翘子〔6〕和叶〔5〕等所含的化学成分及结构定性定量的测定，而对连翘在抗炎镇痛方面药理作用及其活性部位的研究尚未见报道。因此，我们对这方面进行了探讨。
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1 材料
1.1 连翘：购自天津中药饮片厂，经天津药品检验所鉴定为连翘Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl的果实。
1.2 连翘甲醇提取物的制备：将连翘干燥果实粉碎，用70%甲醇在80℃水浴上回流提取2次，每次6 h，用纱布过滤，得到连翘的甲醇提取液，减压蒸馏除去甲醇，再冷冻干燥处理得棕色粉末状的甲醇提取物。临用时用1%吐温-80溶液配成所需浓度备用。
1.3 正己烷可溶物的制备：取以1.2法所得到的甲醇提取液，用正己烷以1∶1进一步萃取精制，得到可溶于正己烷层的棕色粉末状提取物，即为正己烷可溶物。临用时按70%甲醇提取物3 g/kg剂量为基准，用1%吐温-80溶液配成所需浓度备用。
1.4 水可溶物的制备：正己烷提取后溶于水层的部分经过同样的处理得到的物质为水可溶物。临用前按1.3法的操作，用1%吐温-80溶液配成所需浓度备用。
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1.5 消炎痛：美国Sigma公司产品。临用时用1%吐温-80溶液配成所需浓度备用。
1.6 实验动物：ddY系雄性小鼠，体重(20±2) g；Wistar系雄性大鼠，体重(180±20) g，均由日本国立医药品食品卫生研究所提供。
2 实验方法〔6〕
2.1 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性实验：取雄性小鼠，随机分成对照组(1%吐温-80)，甲醇提取物1、3 g/kg剂量组，正己烷可溶物0.2 g/kg、水可溶物2.8 g/kg及消炎痛0.01 g/kg剂量组。按10 mL/kg ig给药40 min后，尾iv 4%滂胺蓝溶液0.1 mL/10 g，30 min后，ip 1%醋酸0.1 mL/10 g，20 min后脱颈椎处死小鼠，剪开腹部皮肤，用生理盐水冲洗腹腔，收集冲洗液，调整终体积至20 mL，离心取上清液于分光光度计590 nm处测吸收度，并于标准曲线上查出每只小鼠腹腔渗出的染料量，进行统计比较。
, 百拇医药
2.2 角叉菜致大鼠足跖肿胀实验：取雄性大鼠随机分成对照组、甲醇提取物1、3 g/kg剂量组及消炎痛0.01 g/kg剂量组。先用足肿测定仪测定每鼠右后肢的正常体积，ig给药。30 min后，分别于每组大鼠右后肢足跖sc 1%角叉菜致炎，注射后分别测定30、60、120、180、240、300和360 min时右后肢肿胀的体积，结果以致炎前所测右后肢体积值为基准，计算致炎后不同时间肿胀率。
2.3 棉球肉芽组织增生实验：取雄性大鼠，随机分成对照组、甲醇提取物1、3 g/kg剂量组及消炎痛0.01 g/kg剂量组。在乙醚浅麻醉下，将大鼠背部剃毛，用70%乙醇及0.2%利凡诺消毒后，切开皮肤，将灭菌干燥的20 mg左右的棉球埋入腋部皮下。于手术当日给药，每日1次，连续5 d后处死动物，剥离肉芽组织，用滤纸吸干，放入小瓶中，置干燥箱中干燥后称重。所得结果以埋入前棉球重量为基准，以实验结束后干燥棉球重量的增加率来表示。
2.4 醋酸致小鼠扭体反应实验：取雄性小鼠，随机分成对照组、甲醇提取物1、3 g/kg剂量组、正己烷可溶物0.2 g/kg、水可溶物2.8 g/kg及消炎痛0.01 g/kg剂量组。ig给药。85 min后，ip 0.7%醋酸溶液0.1 mL/10 g，5 min后，记录10 min内的小鼠扭体反应次数，进行统计比较。
, 百拇医药
3 结果
3.1 对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性作用：甲醇提取物3 g/kg和正己烷可溶物0.2 g/kg剂量组，ig给药，与对照组相比，能抑制醋酸致小鼠腹腔的染料渗出作用，其抑制率分别达到52.6%和51.0%，且此两剂量组的作用强度和消炎痛0.01 g/kg剂量组的作用强度相当；而水可溶物2.8 g/kg未显示此种作用(表1)。
表1 对醋酸所致小鼠毛细血管通透性影响 组 别
剂 量(g/kg)
动物数
(只)
染料渗出量
(
±s,μg/只), 百拇医药
抑制率
(%)
对照组
—
8
361.3±63.6
甲醇提取物
1
8
306.2±48.5
15.3
3
8
, 百拇医药
171.4±23.3**
52.6
正己烷可溶物
0.2
8
171.1±23.3**
51.0
水可溶物
2.8
8
324.2±42.2
10.3
, 百拇医药
消炎痛
0.01
8
161.3±28.0**
55.4
与对照组比较：**P<0.01
3.2 对角叉菜致大鼠足跖肿胀作用：甲醇提取物3 g/kg剂量组ig给药，与对照组相比，1～6 h内均具有不同程度地抑制大鼠足跖肿胀作用，其中1～4 h的抑制作用强度和消炎痛0.01 g/kg剂量组相比较大致相当，4 h后作用稍有减弱。另外，甲醇提取物1 g/kg剂量组与对照组相比，在3、5和6 h有明显抑制作用(表2)。
3.3 对棉球肉芽组织增生的作用：甲醇提取物3 g/kg剂量组连续5 d ig给药，与对照组相比，对棉球肉芽组织增生有一定程度的抑制作用，但体重的变化与对照组相比无显著性差异(表3)。
, 百拇医药
表2 对角叉菜所致足肿胀的影响(
±s,n＝8) 组别剂量(g/kg)
足肿胀增加百分率(%)
30 min
60 min
120 min
180 min
240 min
300 min
360 min
, 百拇医药 对照组
—
118.2±2.7
120.4±2.9
126.9±2.9
133.6±4.1
144.6±4.3
161.7±5.8
164.5±5.0
甲醇提取物
1
116.7±2.1
, http://www.100md.com
118.5±2.2
118.7±1.5
123.0±1.7*
139.1±4.2
141.9±4.3*
138.9±4.2*
3
112.7±3.5
109.8±3.2
108.7±2.4**
114.4±3.5**
, 百拇医药
122.6±4.4**
137.2±7.0**
138.7±6.8**
消炎痛
0.01
110.8±4.1
109.6±4.2*
109.1±4.8**
108.4±4.4**
112.0±5.1**
, http://www.100md.com
118.9±5.4**
118.1±5.5**
与对照组比较：*P<0.05 **P<0.01表3 对棉球肉芽组织增生的影响(
±s) 组 别剂量(g/kg)
动物
(只)
体重增长
(%)
干燥棉球增重
, 百拇医药
(%)
对照组
-
8
3.0±0.5
241.9±16.2
甲醇提取物
1
8
3.0±0.7
223.5±23.2
3
8
, 百拇医药
3.5±0.7
174.1±14.6*
消炎痛
0.01
8
2.7±0.5
124.4±16.0**
与对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
3.4 对醋酸引起扭体反应的作用：甲醇提取物3 g/kg和正己烷可溶物0.2 g/kg剂量组ig给药，与对照组相比，能抑制小鼠扭体反应次数，抑制率分别为49.5%和48.0%，且此两种剂量组的抑制作用强度和消炎痛0.01 g/kg剂量组的作用强度相近；水可溶物2.8 g/kg无此作用(表4)。
, 百拇医药
表4 对醋酸所致小鼠扭体反应的作用 组别
剂量(g/kg)
动物
(只)
10 min内扭体
反应数(
±s)抑制率
(%)
对照组
—
8
, 百拇医药 32.9±2.9
甲醇提取物
1
8
29.3±2.6
10.9
3
8
16.6±1.5**
49.5
正己烷可溶物
0.2
8
, 百拇医药
17.1±1.4**
48.0
水可溶物
2.8
8
30.2±2.5
8.2
消炎痛
0.01
8
12.3±2.7**
62.6
, http://www.100md.com
与对照组比较：**P<0.01
4 讨论
众所周知，由醋酸引起毛细血管通透性增加和由角叉菜引起的水肿是炎症过程中的早期病理变化〔7，8〕。实验发现，连翘70%甲醇提取物3 g/kg剂量组可显著抑制小鼠毛细血管通透性增高和大鼠足跖肿胀的功效，表明其对炎症早期有显著的预防作用。纤维组织增生和肉芽屏障的形成是晚期炎症的特征之一，实验证明该提取物显示了一定程度的抑制肉芽组织增生作用，表明其对炎症晚期有一定的治疗效果。在用正己烷萃取70%甲醇提取物所得到的正己烷可溶物和水可溶物进行毛细血管通透性实验，结果表明正己烷可溶物显示了与甲醇提取物同样的效果，而水可溶物则无此效果。可见连翘中抗炎活性物质可用甲醇提取，再用正己烷萃取提纯。另外，由醋酸致小鼠扭体反应实验表明，甲醇提取物和正己烷可溶物能明显降低扭体次数，具有镇痛作用。而水可溶物却无此作用。
综上所述，连翘甲醇提取物具有抗炎和镇痛作用，活性部位存在于正己烷可溶物中，为极性低的脂溶性成分。
, 百拇医药
*Address:Rui Jing,Tianjin Municipal Institute for Drug Control,Tianjin
**日本国立医药品食品卫生研究所生药部室长.
参 考 文 献
[1] 远藤胜也，他.国外医学-中医中药分册，1982，(5)：302
[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典.一部.1990：436、502、506、522
[3] 原田正敏.210处方汉方药物治疗学.东京：广川书店，1985：93、99、100、153
[4] 贺 铭，等.中药通报，1983，(5)：53
[5] 都恒青，等.中草药，1986，17(2)：7
[6] Ozaki Y,et al.Bio Pharm Bull,1996，19(8):1046
[7] Winter A C,et al.Proc Soc Exp,Biol Med,1962，111:544
[8] Whittle A B.Br J Pharmacol,1964，22:246
(1998-02-25 收稿), 百拇医药(芮菁 尾崎幸** 唐元泰)