用大孔吸附树脂分离川芎总提物
作者：邓少伟 马双成
单位：邓少伟，国家中药品种保护审评委员会(北京 100021)；马双成，中国药品生物制品检定所
关键词：川芎总提物；提取分离；大孔树脂
中草药/990111 摘 要 川芎以乙醇回流提取减压浓缩，过大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩得川芎总提物，其中川芎嗪和阿魏酸的含量约占本品的25%～29%以上，收率为0.6%。
川芎为伞形科植物川芎Ligusticum wallichii Franch.的根茎〔1〕。川芎化学成分相当复杂，主要含具特殊臭味易挥发的油状生物碱、阿魏酸、酚性物质、挥发油及中性物质、△α、β、γ-不饱和内酯。此外，还含维生素A、叶酸、甾醇、蔗糖、脂肪酸等。文献报道：川芎的总生物碱和酚性成分有较明显的扩张冠脉，增加冠脉血流量，降低心肌耗氧量，抑制ADP诱导的血小板的凝集，对已凝集的血小板有解聚作用，降低血小板的表面活性等药理作用〔2〕。
, 百拇医药
有较强生理活性的川芎嗪在川芎中含量为0.01%～0.02%，阿魏酸在川芎中的含量约为0.02%〔2〕。
川芎嗪和阿魏酸总提物的提取方法多用乙醇提取，酸碱处理以及柱层析分离，但不适用于工业化生产。作者结合生产实际，对提取物中保留总生物碱以及酚类化合物的提取工艺做了大量的研究工作，以求得到质量和收率稳定的产品。经多方面的试验研究，最终选用乙醇回流，减压浓缩，而后用大孔吸附树脂分离的方法，以提取物中川芎嗪和阿魏酸为控制指标，采用反相高效液相色谱法进行检测，可得到质量和收率稳定的川芎总提物，收率为0.06%，其中川芎嗪约占5%～7%，阿魏酸约占20%～22%，川芎嗪和阿魏酸二者共占25%～29%，试验如下。
1 大孔吸附树脂的预处理及再生
1.1 预处理：取市售大孔吸附树脂，用乙醇加热回流洗脱(或用改良索氏提取器加热洗脱)，洗至洗脱液蒸干后无残留物。经乙醇洗净的树脂挥去溶剂后保存备用。
, 百拇医药
1.2 装柱：以乙醇湿法装柱，继续用乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出的乙醇，至与水混合不呈白色混浊为止(取1 mL乙醇液加5 mL水)。然后以大量的蒸馏水洗去乙醇，备用。少量乙醇存在将会大大降低树脂的吸附力。
1.3 再生：将样品溶于少量水中加至柱的上端，也可以将样品先溶于少量乙醇中，拌入适量树脂，挥去乙醇后，再将拌有样品的树脂加到柱上。先用水，继而以乙醇-水洗脱，逐步加大醇的浓度，同时配合高效液相色谱法作指导。一般用95%的乙醇洗脱至无色时，树脂柱即已再生，然后以大量水洗去醇，即可进行下一次的提取分离。经反复使用后，吸附树脂颜色变深，吸附效果下降时，可用0.01%～1 mol/L NaOH(或HCl)洗涤或浸泡适当时间，至树脂接近原颜色为宜，继用蒸馏水洗至中性即可再用。如果柱上方沉积有悬浮物，影响流速，可用水从柱上进行反洗，以便把悬浮物顶出。经多次使用后，有时柱床挤压过紧，或树脂颗粒部分破碎而影响流速，可从柱中取出树脂，盛于一个较大容器中用水漂洗除去小颗粒和悬浮杂质，再重新装柱。大孔吸附树脂应湿态保存，若部分颗粒暴露在空气中失水，在进行水溶性杂质分离时，失水后被空气填充的颗粒会浮于水面，此时将上浮树脂用乙醇处理，将树脂内部的空气排出后使用。
, http://www.100md.com
2 川芎总提取物的分离
取川芎饮片，略破碎，用95%乙醇回流提取9次，每次1.5 h，溶媒用量为8～10倍，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至干，再加适量水加热使溶解，抽滤，滤液加到已处理好的大孔吸附树脂柱(干膏和树脂的比例为1∶15～20，或药材和树脂的比例为1∶2～3)上，慢慢滴加完后，先用水洗至还原糖反应呈阴性(Molish反应)，改用30%乙醇洗至阿魏酸和川芎嗪全部洗脱完全(Rp-HPLC法检测，检测液中无阿魏酸和川芎嗪的色谱峰)，合并30%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至干，低温真空干燥，呈淡黄色粉末，即为川芎总提取物(含川芎生物碱类和酚类化合物)，其中川芎嗪和阿魏酸二者约占本品的25%～29%，收率为0.6%。
*Address:Deng Shaowei,National Committee on the Assessment of the Protected Traditional Chinese Medicine Products, Beijing
作者简介：邓少伟 女，31岁，1989年毕业于北京中医药大学中药学院。曾在北京市东风制药厂工作，主要负责生产工艺及产品质量。现在国家中药保护品种审评委员会审评部工作。主要成就为组织研制中药四类新药：“玄麦甘桔含片”已获得卫生部批准生产。
参 考 文 献
[1] 中华人民共和国药典.(一部).1995：30
[2] 阴 健主编：中药现代研究与临床应用.北京：学苑出版社，1994
(1998-01-19 收稿), 百拇医药
单位：邓少伟，国家中药品种保护审评委员会(北京 100021)；马双成，中国药品生物制品检定所
关键词：川芎总提物；提取分离；大孔树脂
中草药/990111 摘 要 川芎以乙醇回流提取减压浓缩，过大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩得川芎总提物，其中川芎嗪和阿魏酸的含量约占本品的25%～29%以上，收率为0.6%。
川芎为伞形科植物川芎Ligusticum wallichii Franch.的根茎〔1〕。川芎化学成分相当复杂，主要含具特殊臭味易挥发的油状生物碱、阿魏酸、酚性物质、挥发油及中性物质、△α、β、γ-不饱和内酯。此外，还含维生素A、叶酸、甾醇、蔗糖、脂肪酸等。文献报道：川芎的总生物碱和酚性成分有较明显的扩张冠脉，增加冠脉血流量，降低心肌耗氧量，抑制ADP诱导的血小板的凝集，对已凝集的血小板有解聚作用，降低血小板的表面活性等药理作用〔2〕。
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有较强生理活性的川芎嗪在川芎中含量为0.01%～0.02%，阿魏酸在川芎中的含量约为0.02%〔2〕。
川芎嗪和阿魏酸总提物的提取方法多用乙醇提取，酸碱处理以及柱层析分离，但不适用于工业化生产。作者结合生产实际，对提取物中保留总生物碱以及酚类化合物的提取工艺做了大量的研究工作，以求得到质量和收率稳定的产品。经多方面的试验研究，最终选用乙醇回流，减压浓缩，而后用大孔吸附树脂分离的方法，以提取物中川芎嗪和阿魏酸为控制指标，采用反相高效液相色谱法进行检测，可得到质量和收率稳定的川芎总提物，收率为0.06%，其中川芎嗪约占5%～7%，阿魏酸约占20%～22%，川芎嗪和阿魏酸二者共占25%～29%，试验如下。
1 大孔吸附树脂的预处理及再生
1.1 预处理：取市售大孔吸附树脂，用乙醇加热回流洗脱(或用改良索氏提取器加热洗脱)，洗至洗脱液蒸干后无残留物。经乙醇洗净的树脂挥去溶剂后保存备用。
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1.2 装柱：以乙醇湿法装柱，继续用乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出的乙醇，至与水混合不呈白色混浊为止(取1 mL乙醇液加5 mL水)。然后以大量的蒸馏水洗去乙醇，备用。少量乙醇存在将会大大降低树脂的吸附力。
1.3 再生：将样品溶于少量水中加至柱的上端，也可以将样品先溶于少量乙醇中，拌入适量树脂，挥去乙醇后，再将拌有样品的树脂加到柱上。先用水，继而以乙醇-水洗脱，逐步加大醇的浓度，同时配合高效液相色谱法作指导。一般用95%的乙醇洗脱至无色时，树脂柱即已再生，然后以大量水洗去醇，即可进行下一次的提取分离。经反复使用后，吸附树脂颜色变深，吸附效果下降时，可用0.01%～1 mol/L NaOH(或HCl)洗涤或浸泡适当时间，至树脂接近原颜色为宜，继用蒸馏水洗至中性即可再用。如果柱上方沉积有悬浮物，影响流速，可用水从柱上进行反洗，以便把悬浮物顶出。经多次使用后，有时柱床挤压过紧，或树脂颗粒部分破碎而影响流速，可从柱中取出树脂，盛于一个较大容器中用水漂洗除去小颗粒和悬浮杂质，再重新装柱。大孔吸附树脂应湿态保存，若部分颗粒暴露在空气中失水，在进行水溶性杂质分离时，失水后被空气填充的颗粒会浮于水面，此时将上浮树脂用乙醇处理，将树脂内部的空气排出后使用。
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2 川芎总提取物的分离
取川芎饮片，略破碎，用95%乙醇回流提取9次，每次1.5 h，溶媒用量为8～10倍，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至干，再加适量水加热使溶解，抽滤，滤液加到已处理好的大孔吸附树脂柱(干膏和树脂的比例为1∶15～20，或药材和树脂的比例为1∶2～3)上，慢慢滴加完后，先用水洗至还原糖反应呈阴性(Molish反应)，改用30%乙醇洗至阿魏酸和川芎嗪全部洗脱完全(Rp-HPLC法检测，检测液中无阿魏酸和川芎嗪的色谱峰)，合并30%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至干，低温真空干燥，呈淡黄色粉末，即为川芎总提取物(含川芎生物碱类和酚类化合物)，其中川芎嗪和阿魏酸二者约占本品的25%～29%，收率为0.6%。
*Address:Deng Shaowei,National Committee on the Assessment of the Protected Traditional Chinese Medicine Products, Beijing
作者简介：邓少伟 女，31岁，1989年毕业于北京中医药大学中药学院。曾在北京市东风制药厂工作，主要负责生产工艺及产品质量。现在国家中药保护品种审评委员会审评部工作。主要成就为组织研制中药四类新药：“玄麦甘桔含片”已获得卫生部批准生产。
参 考 文 献
[1] 中华人民共和国药典.(一部).1995：30
[2] 阴 健主编：中药现代研究与临床应用.北京：学苑出版社，1994
(1998-01-19 收稿), 百拇医药