家蚕细胞基因工程人α1干扰素在离体培养的HL60，KB细胞上与其它化疗药物间的相互作用
作者：王秋娟 李放 王旻 吴梧桐 高建
单位：李放 王旻(中国药科大学生理教研室 南京 210009)；高建(中国药科大学生理教研室)
关键词：HL60细胞；KB细胞；人α1干扰素；环磷酰胺；5-氟尿嘧啶
中国药师990102 摘 要 探讨了离体细胞中家蚕细胞基因工程人α1干扰素(rhIFN-α1)与某些肿瘤药物的相互作用。这些药物包括环磷酰胺8.3 μgml-1，盐酸阿霉素0.008 μg.ml-1和5-氟尿嘧啶6.2 μg.ml-1。 现察它们与rhIFN-α1在HL60以及KB细胞中的作用。研究发现rhIFN-α1以及3个化学药物单独使用能明显降低细胞的增殖数目及活细胞数(P<0.01)，但是，它们相互合用不表现为协同作用，而表现为亚相加或相加作用，甚至在HL60细胞中，150 IU.ml-1的rhIFN-α1与5-氟尿嘧啶6.0 μg.ml-1合用呈拮抗作用。
, 百拇医药
Interaction Between Chinese Silkworm Cell Gene Recombinant
Human Interferon-α1 with Other Antineoplastic Agents on HL60 and KB Cells in Vitro
Wang Qiujuan, Li Fang, Wang Ming , Wu Wutong, Gao Jian
Department of Physiology, Research Division of Biochemistry, China pharmaceutical University, Nanjing 210009, P.R.China
ABSTRACT Interaction between Chinese Silkworm cell gene recombinant human interferon-α1 (rhIFN-α1) with other antineoplastic agents (including cyclophosphamide 8.3 μg。ml-1, 5-fluorouracil 6.2μg。ml-1, and doxorubicin hydrochloride 0.008 μg。ml-1) on HL60 and KB cells in vitro were researched. The investigative result showed that the cell's proliferating number and living cells number could be significantly decreased in the use of rhIFN-α1 or other antineoplastic agents alone ; however, the synergism had not been showed when rhIFN-α1 was combined with any one of three antineoplastic agents, and manifestated as additive subadditive actions, even if it had showed antagonism when rhIFN-α1 150 IU。ml-1 was combined with 5-fluorouracil 6.2μg。ml-1 on HL60 cells.
, 百拇医药
KEY WORDS Human interferon-α1；HL60 cell；KB cell；Cyclophosphamide；5-Fluorouracil
干扰素(IFN)是一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的细胞因子。应用重组DNA技术可以大量生产提纯人白细胞干扰素。中国家蚕细胞基因高效表达人α1-干扰素(rhIFN-α1)， rhIFN-α1对疱疹病毒具有潜在的抑制作用[1]。最近，临床研究表明人IFN与细胞毒药物如顺铂和5-氟尿嘧啶(5-FU)对食管癌和肝细胞型肝癌有协同治疗作用[2，3]。另外，离体实验发现IFN与各种化疗药物合并用药能加强肿瘤细胞的细胞毒性[4，7]。rhIFN-α1是一种新药，其单独应用或与其它细胞毒药物合用的抗肿瘤作用还未见报道，本文研究的目的是探讨rhIFN-α1的合成及疗效。
, http://www.100md.com
关于IFN与这些药物合用的抗肿瘤作用，过去也有一些报道，分别用很多不同的方法学来评价其潜在的协同作用。我们改良HTCA[5，6]，采用噻唑兰(MTT)来评价其作用效果[8，9]。
1 原料和方法
1.1 细胞
HL60细胞和KB细胞由上海细胞所提供。
1.2 试剂
家蚕细胞基因工程人α1-干扰素(rhIFN-α1 1.5×106 IU.ml-1)由南京军区军事医学研究所提供。
, 百拇医药
MTT(噻唑兰)是Serva公司进口分装。
注射用盐酸阿霉素为上海华联制药公司生产。
环磷酰胺和5-Fu购于南京肿瘤研究所。
所有试剂都用RPMI1 640培养液稀释。
1.3 HL60和KB细胞增殖速率的测定
HL60和KB细胞放在RPMI1 640培养液中生长，培养液内含10 %小牛血清，105 IU.L-1的青链霉素，另含有葡萄糖300 mg.L-1，维生素C 500 g.L-1，HEPES 1～2 g.L-1，CaCl2 4 ml.L-1, NaHCO3 1 000 mg.L-1，放于37 ℃CO2培养箱中，每2～3 d传代一次。经两次传代以后，KB细胞用胰蛋白酶消化，而HL60细胞混匀，然后把这两种细胞离心，用培养液稀释成悬液，记数细胞， 分别以5×103和1×103个/孔细胞数接种于96孔培养板上，培养24 h，培养液中各含有rhIFN-α1(150，15 000 IU.ml-1)，环磷酰胺(CTX)8.3 μg.ml-1，盐酸阿霉素(ADM)0.008 μg.ml-1和5-FU 6.2 μg.ml-1。 ADM0.008 μg.ml-1和5-FU6.2 μg.ml-1合用，使每孔终体积为200 μl。
, 百拇医药
药物与细胞共同孵育72 h，从培养箱中取出96孔培养板，小心移去100 μl培养液(注意不要吸出细胞)， 加入100 μl.g.L-1的MTT。 使MTT的最终浓度为0.5 g.ml-1，混匀，培养板放在CO2培养液中， 再培养4 h[8，10]，取出，轻吸上清液100 μl，加100 μl酸化异丙醇以溶解蓝色颗粒，用DG3022型酶联免疫测定仪测定570nm的吸光度。
加入MTT之前， 每组任选3孔细胞加入台酚兰染色，记死细胞数。
以上实验重复两次。
1.4 统计学处理
用t-检验和χ2分析对实验结果进行统计学处理[6]。
, http://www.100md.com
2 结 果
2.1 rhIFN-α1单用的抗肿瘤作用
实验用两个浓度(150，15 000IU.ml-1)的rhIFN-α1研究其对HL60及KB细胞生长的抑制作用。 结果，低浓度的rhIFN-α1(150 IU.ml-1)对KB细胞的抗增殖作用很微弱(P>0.05)，而高浓度的rhIFN-α1(15 000 IU.ml-1)，具有明显抑制KB细胞增殖的作用，rhIFN-α1对HL60细胞抑制增殖的作用很明显。结果见表1。
表1 在离体培养HL60及KB细胞中rhIFN-α1和其它抗肿瘤药物之间的相互作用 (n=9) 药 物
, 百拇医药
剂量(μg.ml-1)
rhIFN-α1(IU.ml-1)
实验号
HL60OD值(
±s)
KB细胞OD值(±s)
相互效应
P值
对照
, 百拇医药
-
1
2.15±0.25
1.02±0.12……
2
2.20±0.22
1.20±0.18
3
2.18±0.15
1.18±0.15
-
150
1
, http://www.100md.com
1.43±0.05*
1.00±0.13……
2
1.38±0.15*
1.08±0.15
3
1.47±0.10*
1.27±0.17
-
15 000
1
1.16±0.05*
, 百拇医药
0.68±0.07*……
2
1.00±0.08*
0.75±0.12*
3
1.20±0.13*
0.81±0.09*
阿霉素
0.008
-
1
, http://www.100md.com
1.30±0.06△
0.42±0.03△……
2
1.28±0.15△
0.45±0.05△
3
1.36±0.09△
0.51±0.09△
阿霉素
0.008
150
, 百拇医药
1
0.98±0.03*
0.54±0.13
亚相加
P>0.05
2
0.87±0.09*
0.57±0.09
3
1.00±0.10*
0.46±0.11
阿霉素
, http://www.100md.com
0.008
15 000
1
0.69±0.06*
0.35±0.06**
亚相加
P>0.05
2
0.50±0.14*
0.32±0.10**
3
, 百拇医药
0.62±0.11*
0.28±0.07**
环磷酰胺
8.3
-
1
1.30±0.07△
0.44±0.08△……
2
1.38±0.12△
0.38±0.10△
, http://www.100md.com
3
1.45±0.20△
0.45±0.12△
环磷酰胺
8.3
150
1
1.02±0.17*
0.84±0.06*
亚相加
P>0.05
, http://www.100md.com 2
1.10±0.11*
0.57±0.08*
3
1.09±0.10*
0.71±0.10*
环磷酰胺
8.3
15 000
1
0.87±0.12*
, http://www.100md.com
0.32±0.06*
亚相加
P>0.05
2
1.00±0.13*
0.22±0.08*
3
0.92±0.10*
0.32±0.05*
5-氟尿嘧啶
6.2
, 百拇医药
-
1
1.07±0.08△
0.39±0.05△……
2
0.98±0.12△
0.38±0.06△
3
1.10±0.09△
0.50±0.09△
5-氟尿嘧啶
, 百拇医药
6.2
150
1
1.91±0.05*
0.37±0.03
拮抗
P<0.05
2
1.78±0.11*
0.30±0.12
3
1.67±0.17*
, 百拇医药
0.04±0.07
5-氟尿嘧啶
6.2
15 000
1
1.14±0.06
0.31±0.03*
亚相加
P>0.05
2
1.09±0.15
0.29±0.05*
, 百拇医药
3
1.05±0.13
0.33±0.08*
*P<0.01；**P<0.05(与相应对照组比，分别为：对照，阿霉素，环磷酰胺，5-氟尿啶啶单独使用)。
阿霉素，环磷酰胺，5-氟尿嘧啶与对照组相比有显著性差别(△P<0.001)2.2 CTX、 5-FU和ADM的抗肿瘤作用
3种不同化疗药物(CTX8.3 μg.ml-1， 5-FU6.2 μg.ml-1， ADM0.008 μg.ml-1)的抗肿瘤实验结果表明，它们对HL60细胞和KB细胞有很大的细胞毒作用(P<0.001)，结果见表1。
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2.3 rhIFN-α1与化疗药物合用的抗肿瘤作用
本实验分别验证了rhIFN-α1和其它化疗药物合用对HL60和KB细胞的抑制作用。
如表1所示，rhIFN-α1和CTX、5-FU、ADM合用对HL60和KB细胞的作用，大多呈现亚相加作用。 rhIFN-α1150 IU.ml-1与5-FU6.2 μg.ml-1合并用药对HL60细胞呈拮抗作用，即 rhIFN-α1150 IU.ml-1促进了HL60细胞的生长，而单独用5-FU对HL60细胞起抑制生长的作用。5-FU6.2 μg.ml-1与rhIFN-α1150 IU.ml-1合用对KB细胞呈相加作用。表2显示了台酚蓝染色法得到的死亡细胞与活细胞之比，其结果与MTT法类似。
, 百拇医药
表2 rhIFN-α1、5-FU、 ADM单独或联合用药作用于
培养的KB和HL60细胞中所得死亡细胞数与
活细胞数的比值(n=3， 平均值) 药 物
剂量(μg.ml-1)
rhIFN-α1(IU.ml-1)
实验号
HL60
KB
, 百拇医药
对照
-
1
0.285
0.493
2
0.332
0.402
3
0.265
0.413
-
150
, http://www.100md.com
1
0.354
0.522
2
0.346
0.423
3
0.402
0.312
-
15 000
1
0.712
, 百拇医药
0.952
2
0.689
0.940
3
0.778
0.870
阿霉素
0.008
-
1
0.302
0.843
, 百拇医药
2
0.339
0.873
3
0.423
0.684
阿霉素
0.008
150
1
0.592
0.889
2
, http://www.100md.com
0.605
0.884
3
0.490
0.824
阿霉素
0.008
15 000
1
0.726
0.935
2
0.765
, 百拇医药
0.902
3
0.660
0.788
环磷酰胺
8.3
-
1
0.669
0.895
2
0.557
0.902
, http://www.100md.com
3
0.680
0.805
环磷酰胺
8.3
150
1
0.432
0.956
2
0.406
0.900
3
, 百拇医药
0.400
0.861
环磷酰胺
8.3
15 000
1
0.729
0.929
2
0.776
0.882
3
0.842
, 百拇医药
0.788
5-氟尿嘧啶
6.2
-
1
0.737
0.874
2
0.777
0.706
3
0.688
0.762
, http://www.100md.com
5-氟尿嘧啶
6.2
150
1
0.746
0.892
2
0.750
0.921
3
0.821
0.802
5-氟尿嘧啶
, 百拇医药
6.2
15 000
1
0.790
0.912
2
0.884
0.864
3
0.685
0.900
3 讨 论
研究表明IFN与其它化疗药物合用的药效是很复杂的，这些影响因素包括化疗药物的种类、合用药的剂量。本研究发现，rhIFN-α1具有一定的抗肿瘤作用。rhIFN-α1与CTX、ADM、5-FU合用具有相加或亚相加作用，从而可以降低药物的毒性。此外，rhIFN-α115 000IU.ml-1与5-FU6.2 μg.ml-1有拮抗作用，但是α-IFN与其它药物的合用是经验性的，缺少临床数据，作用机理不明[1，2]，IFN与其它化合物之间的相互作用的特性不太清楚[13]。
, 百拇医药
Charles等认为重组IFNα2与ADM0.006 μg.ml-1对BG-1细胞株相互之间是协同作用[6]。这与本实验的结果不同，可能是由于肿瘤细胞和IFN的种类不同造成的。这也进一步证明离体情况下， 各种药物之间的相互作用是很复杂的。因此，应进一步研究重组IFNα1对离体培养肿瘤细胞的作用及其作用机制，从而确定rhIFN-α1与其它化疗药物之间的相互作用。
参 考 文 献
[1] 王秋娟，李运曼，王旻，等. 家蚕细胞基因工程人α干扰素注射液抗Ⅱ型单纯疱疹病毒作用. 中国药科大学学报，1996，27(9)：557～561.
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, 百拇医药
[3] Wadler S, Haynes H. Phase Ⅱclinical trial with 5-fluorouracil, recombinant IFN α-2b,and cisplatin for patients with metastatic or regionally advanced carcinoma of the esophagus.Cancer，1996,78(1):30～34.
[4] Brostrom LA.The combined effect of interferon and methotrexate on human osteosarcoma and lymphemia cell lines. Cancer Lett，1980,10(1):83～90.
[5] Yamamoto S,Tanaka H,Kanamoti T,et al.In vitro studies on potentiation of cytotoxic effects of anticancer drugs by interferon on human neoplastic cell line(Hela).Cancer Lett，1983,20(2):131～138.
, 百拇医药
[6] Charles E,Fimothy M,Howard D,et al.Combined Recombinant Human Interferon α2 and Cytotoxic Agents Studied in a Clonogenic Assay.Int J Cancer，1985,35:721～729.
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[8] Francois D,Rita L.Rapid colorimetric assay for cell growth and survival modifications to the tetrazolium dye procedure giving improved sensitivity and reliability.J of immunological Methods，1986,89(2):271～272.
, 百拇医药
[9] 朱敏生，虞冠华，丁树标，等.N-IL2对S180实体瘤抑制作用的实验研究.江苏医药，1989， 10：526～528.
[10] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.第二版.北京：人民卫生出版社.1994，1141.
[11] Salmon S,Durie B,Young L,et al.Effects of human leukocyte interferons in the human tumor stem cell assay.J Clin Oncol,1983,217～225.
[12] 刘海峰.干扰素在肿瘤治疗中的应用现状.医学研究通讯，1994，23(3)：6～12.
[13] Hofmockel G,Langer W. Immunochemotherapy for metastatic renal cell carcinoma using a 3 regimen of IL-2,IFN-α and 5-fluorouracil.J Urol,1996,156(1):18～21.
(19981207收稿), 百拇医药
单位：李放 王旻(中国药科大学生理教研室 南京 210009)；高建(中国药科大学生理教研室)
关键词：HL60细胞；KB细胞；人α1干扰素；环磷酰胺；5-氟尿嘧啶
中国药师990102 摘 要 探讨了离体细胞中家蚕细胞基因工程人α1干扰素(rhIFN-α1)与某些肿瘤药物的相互作用。这些药物包括环磷酰胺8.3 μgml-1，盐酸阿霉素0.008 μg.ml-1和5-氟尿嘧啶6.2 μg.ml-1。 现察它们与rhIFN-α1在HL60以及KB细胞中的作用。研究发现rhIFN-α1以及3个化学药物单独使用能明显降低细胞的增殖数目及活细胞数(P<0.01)，但是，它们相互合用不表现为协同作用，而表现为亚相加或相加作用，甚至在HL60细胞中，150 IU.ml-1的rhIFN-α1与5-氟尿嘧啶6.0 μg.ml-1合用呈拮抗作用。
, 百拇医药
Interaction Between Chinese Silkworm Cell Gene Recombinant
Human Interferon-α1 with Other Antineoplastic Agents on HL60 and KB Cells in Vitro
Wang Qiujuan, Li Fang, Wang Ming , Wu Wutong, Gao Jian
Department of Physiology, Research Division of Biochemistry, China pharmaceutical University, Nanjing 210009, P.R.China
ABSTRACT Interaction between Chinese Silkworm cell gene recombinant human interferon-α1 (rhIFN-α1) with other antineoplastic agents (including cyclophosphamide 8.3 μg。ml-1, 5-fluorouracil 6.2μg。ml-1, and doxorubicin hydrochloride 0.008 μg。ml-1) on HL60 and KB cells in vitro were researched. The investigative result showed that the cell's proliferating number and living cells number could be significantly decreased in the use of rhIFN-α1 or other antineoplastic agents alone ; however, the synergism had not been showed when rhIFN-α1 was combined with any one of three antineoplastic agents, and manifestated as additive subadditive actions, even if it had showed antagonism when rhIFN-α1 150 IU。ml-1 was combined with 5-fluorouracil 6.2μg。ml-1 on HL60 cells.
, 百拇医药
KEY WORDS Human interferon-α1；HL60 cell；KB cell；Cyclophosphamide；5-Fluorouracil
干扰素(IFN)是一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的细胞因子。应用重组DNA技术可以大量生产提纯人白细胞干扰素。中国家蚕细胞基因高效表达人α1-干扰素(rhIFN-α1)， rhIFN-α1对疱疹病毒具有潜在的抑制作用[1]。最近，临床研究表明人IFN与细胞毒药物如顺铂和5-氟尿嘧啶(5-FU)对食管癌和肝细胞型肝癌有协同治疗作用[2，3]。另外，离体实验发现IFN与各种化疗药物合并用药能加强肿瘤细胞的细胞毒性[4，7]。rhIFN-α1是一种新药，其单独应用或与其它细胞毒药物合用的抗肿瘤作用还未见报道，本文研究的目的是探讨rhIFN-α1的合成及疗效。
, http://www.100md.com
关于IFN与这些药物合用的抗肿瘤作用，过去也有一些报道，分别用很多不同的方法学来评价其潜在的协同作用。我们改良HTCA[5，6]，采用噻唑兰(MTT)来评价其作用效果[8，9]。
1 原料和方法
1.1 细胞
HL60细胞和KB细胞由上海细胞所提供。
1.2 试剂
家蚕细胞基因工程人α1-干扰素(rhIFN-α1 1.5×106 IU.ml-1)由南京军区军事医学研究所提供。
, 百拇医药
MTT(噻唑兰)是Serva公司进口分装。
注射用盐酸阿霉素为上海华联制药公司生产。
环磷酰胺和5-Fu购于南京肿瘤研究所。
所有试剂都用RPMI1 640培养液稀释。
1.3 HL60和KB细胞增殖速率的测定
HL60和KB细胞放在RPMI1 640培养液中生长，培养液内含10 %小牛血清，105 IU.L-1的青链霉素，另含有葡萄糖300 mg.L-1，维生素C 500 g.L-1，HEPES 1～2 g.L-1，CaCl2 4 ml.L-1, NaHCO3 1 000 mg.L-1，放于37 ℃CO2培养箱中，每2～3 d传代一次。经两次传代以后，KB细胞用胰蛋白酶消化，而HL60细胞混匀，然后把这两种细胞离心，用培养液稀释成悬液，记数细胞， 分别以5×103和1×103个/孔细胞数接种于96孔培养板上，培养24 h，培养液中各含有rhIFN-α1(150，15 000 IU.ml-1)，环磷酰胺(CTX)8.3 μg.ml-1，盐酸阿霉素(ADM)0.008 μg.ml-1和5-FU 6.2 μg.ml-1。 ADM0.008 μg.ml-1和5-FU6.2 μg.ml-1合用，使每孔终体积为200 μl。
, 百拇医药
药物与细胞共同孵育72 h，从培养箱中取出96孔培养板，小心移去100 μl培养液(注意不要吸出细胞)， 加入100 μl.g.L-1的MTT。 使MTT的最终浓度为0.5 g.ml-1，混匀，培养板放在CO2培养液中， 再培养4 h[8，10]，取出，轻吸上清液100 μl，加100 μl酸化异丙醇以溶解蓝色颗粒，用DG3022型酶联免疫测定仪测定570nm的吸光度。
加入MTT之前， 每组任选3孔细胞加入台酚兰染色，记死细胞数。
以上实验重复两次。
1.4 统计学处理
用t-检验和χ2分析对实验结果进行统计学处理[6]。
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2 结 果
2.1 rhIFN-α1单用的抗肿瘤作用
实验用两个浓度(150，15 000IU.ml-1)的rhIFN-α1研究其对HL60及KB细胞生长的抑制作用。 结果，低浓度的rhIFN-α1(150 IU.ml-1)对KB细胞的抗增殖作用很微弱(P>0.05)，而高浓度的rhIFN-α1(15 000 IU.ml-1)，具有明显抑制KB细胞增殖的作用，rhIFN-α1对HL60细胞抑制增殖的作用很明显。结果见表1。
表1 在离体培养HL60及KB细胞中rhIFN-α1和其它抗肿瘤药物之间的相互作用 (n=9) 药 物
, 百拇医药
剂量(μg.ml-1)
rhIFN-α1(IU.ml-1)
实验号
HL60OD值(
±s)KB细胞OD值(
±s)相互效应
P值
对照
, 百拇医药
-
1
2.15±0.25
1.02±0.12……
2
2.20±0.22
1.20±0.18
3
2.18±0.15
1.18±0.15
-
150
1
, http://www.100md.com
1.43±0.05*
1.00±0.13……
2
1.38±0.15*
1.08±0.15
3
1.47±0.10*
1.27±0.17
-
15 000
1
1.16±0.05*
, 百拇医药
0.68±0.07*……
2
1.00±0.08*
0.75±0.12*
3
1.20±0.13*
0.81±0.09*
阿霉素
0.008
-
1
, http://www.100md.com
1.30±0.06△
0.42±0.03△……
2
1.28±0.15△
0.45±0.05△
3
1.36±0.09△
0.51±0.09△
阿霉素
0.008
150
, 百拇医药
1
0.98±0.03*
0.54±0.13
亚相加
P>0.05
2
0.87±0.09*
0.57±0.09
3
1.00±0.10*
0.46±0.11
阿霉素
, http://www.100md.com
0.008
15 000
1
0.69±0.06*
0.35±0.06**
亚相加
P>0.05
2
0.50±0.14*
0.32±0.10**
3
, 百拇医药
0.62±0.11*
0.28±0.07**
环磷酰胺
8.3
-
1
1.30±0.07△
0.44±0.08△……
2
1.38±0.12△
0.38±0.10△
, http://www.100md.com
3
1.45±0.20△
0.45±0.12△
环磷酰胺
8.3
150
1
1.02±0.17*
0.84±0.06*
亚相加
P>0.05
, http://www.100md.com 2
1.10±0.11*
0.57±0.08*
3
1.09±0.10*
0.71±0.10*
环磷酰胺
8.3
15 000
1
0.87±0.12*
, http://www.100md.com
0.32±0.06*
亚相加
P>0.05
2
1.00±0.13*
0.22±0.08*
3
0.92±0.10*
0.32±0.05*
5-氟尿嘧啶
6.2
, 百拇医药
-
1
1.07±0.08△
0.39±0.05△……
2
0.98±0.12△
0.38±0.06△
3
1.10±0.09△
0.50±0.09△
5-氟尿嘧啶
, 百拇医药
6.2
150
1
1.91±0.05*
0.37±0.03
拮抗
P<0.05
2
1.78±0.11*
0.30±0.12
3
1.67±0.17*
, 百拇医药
0.04±0.07
5-氟尿嘧啶
6.2
15 000
1
1.14±0.06
0.31±0.03*
亚相加
P>0.05
2
1.09±0.15
0.29±0.05*
, 百拇医药
3
1.05±0.13
0.33±0.08*
*P<0.01；**P<0.05(与相应对照组比，分别为：对照，阿霉素，环磷酰胺，5-氟尿啶啶单独使用)。
阿霉素，环磷酰胺，5-氟尿嘧啶与对照组相比有显著性差别(△P<0.001)2.2 CTX、 5-FU和ADM的抗肿瘤作用
3种不同化疗药物(CTX8.3 μg.ml-1， 5-FU6.2 μg.ml-1， ADM0.008 μg.ml-1)的抗肿瘤实验结果表明，它们对HL60细胞和KB细胞有很大的细胞毒作用(P<0.001)，结果见表1。
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2.3 rhIFN-α1与化疗药物合用的抗肿瘤作用
本实验分别验证了rhIFN-α1和其它化疗药物合用对HL60和KB细胞的抑制作用。
如表1所示，rhIFN-α1和CTX、5-FU、ADM合用对HL60和KB细胞的作用，大多呈现亚相加作用。 rhIFN-α1150 IU.ml-1与5-FU6.2 μg.ml-1合并用药对HL60细胞呈拮抗作用，即 rhIFN-α1150 IU.ml-1促进了HL60细胞的生长，而单独用5-FU对HL60细胞起抑制生长的作用。5-FU6.2 μg.ml-1与rhIFN-α1150 IU.ml-1合用对KB细胞呈相加作用。表2显示了台酚蓝染色法得到的死亡细胞与活细胞之比，其结果与MTT法类似。
, 百拇医药
表2 rhIFN-α1、5-FU、 ADM单独或联合用药作用于
培养的KB和HL60细胞中所得死亡细胞数与
活细胞数的比值(n=3， 平均值
) 药 物剂量(μg.ml-1)
rhIFN-α1(IU.ml-1)
实验号
HL60
KB
, 百拇医药
对照
-
1
0.285
0.493
2
0.332
0.402
3
0.265
0.413
-
150
, http://www.100md.com
1
0.354
0.522
2
0.346
0.423
3
0.402
0.312
-
15 000
1
0.712
, 百拇医药
0.952
2
0.689
0.940
3
0.778
0.870
阿霉素
0.008
-
1
0.302
0.843
, 百拇医药
2
0.339
0.873
3
0.423
0.684
阿霉素
0.008
150
1
0.592
0.889
2
, http://www.100md.com
0.605
0.884
3
0.490
0.824
阿霉素
0.008
15 000
1
0.726
0.935
2
0.765
, 百拇医药
0.902
3
0.660
0.788
环磷酰胺
8.3
-
1
0.669
0.895
2
0.557
0.902
, http://www.100md.com
3
0.680
0.805
环磷酰胺
8.3
150
1
0.432
0.956
2
0.406
0.900
3
, 百拇医药
0.400
0.861
环磷酰胺
8.3
15 000
1
0.729
0.929
2
0.776
0.882
3
0.842
, 百拇医药
0.788
5-氟尿嘧啶
6.2
-
1
0.737
0.874
2
0.777
0.706
3
0.688
0.762
, http://www.100md.com
5-氟尿嘧啶
6.2
150
1
0.746
0.892
2
0.750
0.921
3
0.821
0.802
5-氟尿嘧啶
, 百拇医药
6.2
15 000
1
0.790
0.912
2
0.884
0.864
3
0.685
0.900
3 讨 论
研究表明IFN与其它化疗药物合用的药效是很复杂的，这些影响因素包括化疗药物的种类、合用药的剂量。本研究发现，rhIFN-α1具有一定的抗肿瘤作用。rhIFN-α1与CTX、ADM、5-FU合用具有相加或亚相加作用，从而可以降低药物的毒性。此外，rhIFN-α115 000IU.ml-1与5-FU6.2 μg.ml-1有拮抗作用，但是α-IFN与其它药物的合用是经验性的，缺少临床数据，作用机理不明[1，2]，IFN与其它化合物之间的相互作用的特性不太清楚[13]。
, 百拇医药
Charles等认为重组IFNα2与ADM0.006 μg.ml-1对BG-1细胞株相互之间是协同作用[6]。这与本实验的结果不同，可能是由于肿瘤细胞和IFN的种类不同造成的。这也进一步证明离体情况下， 各种药物之间的相互作用是很复杂的。因此，应进一步研究重组IFNα1对离体培养肿瘤细胞的作用及其作用机制，从而确定rhIFN-α1与其它化疗药物之间的相互作用。
参 考 文 献
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(19981207收稿), 百拇医药