胶质瘤微血管定量和nm23表达的临床意义
作者：步星耀 章 翔 郑颂国 罗建民 沈兆忠
单位：步星耀 章 翔(第四军医大学西京医院神经外科(西安710032)；郑颂国 罗建民 沈兆忠(上海医科大学肿瘤医院)
关键词：胶质瘤；肿瘤血管组织；基因表达；免疫组化
肿瘤990110 肿瘤组织微血管计数(micro blood vessel countation,MVC)可反映肿瘤的血管生成情况，在判断预后、筛选高危复发或转移病人及指导治疗方面有较大应用价值[1]。nm23是一种新的与肿瘤转移抑制有关的基因，其表达在多种人类肿瘤发生、发展中的作用日益受到重视[2]。本文用免疫组化方法显示人脑胶质瘤组织内微血管(MV)和nm23染色，探讨胶质瘤MVC和nm23基因表达的临床意义。
材料与方法
, 百拇医药
1.临床资料 54例(男29，女25)脑胶质瘤，年龄2～65岁，经手术和病理检查确诊，按WHO标准进行组织学分类及恶性度分级。良性和亚良性胶质瘤(BG)18例；恶性胶质瘤(MG)22例；高度恶性胶质瘤(HMG)14例。复发组21例，未复发组33例。
2.MVC 参照Maeda等[3]方法，低倍镜下选取肿瘤微血管富集区，高倍镜(10×20)下随机选择5个瘤组织视野计数MV，求其平均值。
3.nm23免疫组化染色 采用常规SP免疫组化方法进行。TBS代替一抗作为阴性对照。结果判定：每张切片至少应有5个具代表性的高倍视野，观察细胞不少于500个。当阳性染色的脑胶质细胞<30%时定为阴性，即低表达；≥31%时为阳性，即正常表达(见插页2图5)。
4.水肿程度分类 瘤周水肿以肿瘤直径较大且瘤周水肿明显的CT平面上所测到的水肿带宽度进行分类。无水肿指未见水肿带，水肿带宽度≤2 cm者为轻度水肿；2～4 cm为中度水肿；>4cm为重度水肿。
, 百拇医药
5.统计学处理 采用t检验和卡方检验。
结 果
1.MVC和脑胶质瘤临床病理学特征 MV呈棕黄色(见插页2图4)，在脑胶质瘤组织内分布呈异质性，MG、HMG组的MVC较BG组明显增加(P<0.01，P<0.001)；轻、中、重度瘤周水肿的瘤组织MVC显著高于无瘤周水肿的瘤组织(P值分别小于0.01、0.01和0.005)。复发组胶质瘤MVC明显高于未复发组(P<0.001)(见表1)。
图4 Ⅳ因子相关抗原LSAB免疫组化染色，胶质瘤组织中微血管呈棕黄色(×200)
图5 SP免疫组化染色(苏木素复染)胶质瘤nm 23阳性表达、表现为细胞浆染色呈 棕黄色(×400)
, http://www.100md.com
表1 MVC和nm23低表达与脑胶质瘤临床病理 临床病理
例数
MVC
±s
P值
nm23染色
P值
-
+
恶性度分级
BG
18
, 百拇医药 19.9±7.4
9
9
<0.05
MG
22
34.0±20.5
<0.01*
18
4
HMG
14
44.1±21.8
, 百拇医药
<0.001*
12
2
水肿度分类
无水肿
7
14.2±3.7
3
4
<0.05
轻度水肿
12
22.8±7.1
, 百拇医药
<0.01△
7
5
中度水肿
19
33.3±19.7
<0.01△
15
4
重度水肿
16
44.9±21.8
, http://www.100md.com <0.005△
14
2
临床表现
复发
21
48.0±21.6
<0.001
20
1
<0.05
未复发
33
, 百拇医药
21.7±8.9
19
14
注：*为MG、HMG分别与BG相比；△为不同水肿度与无水肿相比
2.nm23低表达和脑胶质瘤临床病理学特征 54例脑胶质瘤nm23低表达39例(72%)。nm23低表达与脑胶质瘤恶性度、水肿程度呈显著正相关(Pearson相关系数分别为P=0.33，P<0.05和P=0.39，P<0.05)。复发组nm23低表达率显著高于未复发组(P<0.05)(表1)。
3.由表2可见，nm23低表达胶质瘤MVC显著高于nm23正常表达胶质瘤(P<0.001)。
表2 脑胶质瘤MVC和nm23表达的关系 nm23表达
, 百拇医药
例数
MVC(±s)
P值
+
15
19.7±6.1
<0.001
-
39
36.6±21.2
讨 论
肿瘤发展过程必然伴随血管异常增生，恶性程度越高，新生血管越活跃。毛细血管芽顶部的内皮细胞，受化学趋化剂诱导，分泌胶原酶、尿激酶和血浆酶原激活物，通过蛋白酶降解作用促进肿瘤细胞向临近纤维蛋白凝胶基质和结缔组织间播散[1]。肿瘤细胞本身可产生某些血管生成因子(如VEGF、bFGF等)促进肿瘤血管的生成[4]。本研究中MVC随脑胶质瘤恶性度增加而增多，MG、HMG组的MVC较BG组明显增多(P<0.01，P<0.001)。提示MVC增加导致的血液供应增加在脑胶质瘤恶性倾向发展中起重要作用，并与其侵袭性行为有关。
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影响颅内肿瘤瘤周水肿严重程度的主要因素是肿瘤恶性度[5]。对星形细胞瘤瘤体及水肿组织的连续切片发现，水肿区可见瘤细胞浸润，水肿越明显，浸润越明显，水肿区是瘤细胞侵袭扩散实际范围的病理表现[6]。本研究中MVC随胶质瘤瘤周水肿的瘤组织(P分别小于0.01、0.001和0.005)。表明MVC可反映脑胶质瘤瘤周水肿的严重程度。
Toits[7]报道，MVC是乳腺癌患者的一个独立预后因素。本研究发现复发组胶质瘤MVC显著高于未复发组(P<0.001)，提示MVC是脑胶质瘤患者复发的有用预测指标。胶质瘤侵袭性生长，手术全切困难，化疗又不敏感，残存浸润瘤细胞可能是肿瘤原位复发的重要原因，而肿瘤血管的大量增生无疑促进了肿瘤的复发。
nm23基因编码产物核苷二磷酸激酶(NDPK)参与体内三磷酸核苷的生成，通过影响微管聚合状态及G蛋白介导的信号转导通路而调节细胞代谢，在肿瘤细胞的增殖、分化及侵袭和转移过程起重要作用。本研究nm23低表达与脑胶质瘤恶性度、瘤周水肿呈显著正相关(Pearson列联系数分别为P=0.33和0.39，P<0.05)，且复发组nm23低表达显著高于未复发组(P<0.05)。表明nm23基因表达对人脑胶质瘤生物学行为有重要影响。尽管nm23低表达组胶质瘤MVC显著高于nm23正常表达组(P<0.001)，但nm23基因表达影响脑胶质瘤血管生成的确切机制尚不清楚。
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参 考 文 献
1 Weidner N.Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer.Am J Pathol,1995,147:9
2 Takino H,Herman V,Weiss M,et al. Purine-binding factor (nm23) gene expression in pituitary tumors:marker of adenoma invasiveness.J Clin Endocrinol Metab,1995,80:1733
3 Maeda K,Chung YS,Takatsuka S, et al. Tumor angiogenesis and tumor cell proliferation as prognostic indicators in gastric carcinoma.Br J Cancer,1995,72:319
, http://www.100md.com
4 Samoto K,Ikezaki K,Ono M, et al. Expression of vascular endothelial growth factor and its possible relation with neovascularization in human brain tumors.Cancer Res,1995,55:1189
5 腾良珠，浦佩玉，薛庆澄等.脑膜瘤的病理学表现与瘤周水肿.中国肿瘤临床，1996，23：486
6 林志雄，张鹏飞，吴翊钦等.星形细胞瘤生物学行为特征及机理探讨.微侵袭神经外科杂志，1997，2：44
7 Toi M,Kashitani J,Jominaga T.Tumor angiogenesis is an inde-pendent prognostic indicatior in primary breast carcinoma.Int J Cancer,1993,55:371
(收稿：1998-04-03 修回：1998-08-07), 百拇医药
单位：步星耀 章 翔(第四军医大学西京医院神经外科(西安710032)；郑颂国 罗建民 沈兆忠(上海医科大学肿瘤医院)
关键词：胶质瘤；肿瘤血管组织；基因表达；免疫组化
肿瘤990110 肿瘤组织微血管计数(micro blood vessel countation,MVC)可反映肿瘤的血管生成情况，在判断预后、筛选高危复发或转移病人及指导治疗方面有较大应用价值[1]。nm23是一种新的与肿瘤转移抑制有关的基因，其表达在多种人类肿瘤发生、发展中的作用日益受到重视[2]。本文用免疫组化方法显示人脑胶质瘤组织内微血管(MV)和nm23染色，探讨胶质瘤MVC和nm23基因表达的临床意义。
材料与方法
, 百拇医药
1.临床资料 54例(男29，女25)脑胶质瘤，年龄2～65岁，经手术和病理检查确诊，按WHO标准进行组织学分类及恶性度分级。良性和亚良性胶质瘤(BG)18例；恶性胶质瘤(MG)22例；高度恶性胶质瘤(HMG)14例。复发组21例，未复发组33例。
2.MVC 参照Maeda等[3]方法，低倍镜下选取肿瘤微血管富集区，高倍镜(10×20)下随机选择5个瘤组织视野计数MV，求其平均值。
3.nm23免疫组化染色 采用常规SP免疫组化方法进行。TBS代替一抗作为阴性对照。结果判定：每张切片至少应有5个具代表性的高倍视野，观察细胞不少于500个。当阳性染色的脑胶质细胞<30%时定为阴性，即低表达；≥31%时为阳性，即正常表达(见插页2图5)。
4.水肿程度分类 瘤周水肿以肿瘤直径较大且瘤周水肿明显的CT平面上所测到的水肿带宽度进行分类。无水肿指未见水肿带，水肿带宽度≤2 cm者为轻度水肿；2～4 cm为中度水肿；>4cm为重度水肿。
, 百拇医药
5.统计学处理 采用t检验和卡方检验。
结 果
1.MVC和脑胶质瘤临床病理学特征 MV呈棕黄色(见插页2图4)，在脑胶质瘤组织内分布呈异质性，MG、HMG组的MVC较BG组明显增加(P<0.01，P<0.001)；轻、中、重度瘤周水肿的瘤组织MVC显著高于无瘤周水肿的瘤组织(P值分别小于0.01、0.01和0.005)。复发组胶质瘤MVC明显高于未复发组(P<0.001)(见表1)。
图4 Ⅳ因子相关抗原LSAB免疫组化染色，胶质瘤组织中微血管呈棕黄色(×200)
图5 SP免疫组化染色(苏木素复染)胶质瘤nm 23阳性表达、表现为细胞浆染色呈 棕黄色(×400)
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表1 MVC和nm23低表达与脑胶质瘤临床病理 临床病理
例数
MVC
±sP值
nm23染色
P值
-
+
恶性度分级
BG
18
, 百拇医药 19.9±7.4
9
9
<0.05
MG
22
34.0±20.5
<0.01*
18
4
HMG
14
44.1±21.8
, 百拇医药
<0.001*
12
2
水肿度分类
无水肿
7
14.2±3.7
3
4
<0.05
轻度水肿
12
22.8±7.1
, 百拇医药
<0.01△
7
5
中度水肿
19
33.3±19.7
<0.01△
15
4
重度水肿
16
44.9±21.8
, http://www.100md.com <0.005△
14
2
临床表现
复发
21
48.0±21.6
<0.001
20
1
<0.05
未复发
33
, 百拇医药
21.7±8.9
19
14
注：*为MG、HMG分别与BG相比；△为不同水肿度与无水肿相比
2.nm23低表达和脑胶质瘤临床病理学特征 54例脑胶质瘤nm23低表达39例(72%)。nm23低表达与脑胶质瘤恶性度、水肿程度呈显著正相关(Pearson相关系数分别为P=0.33，P<0.05和P=0.39，P<0.05)。复发组nm23低表达率显著高于未复发组(P<0.05)(表1)。
3.由表2可见，nm23低表达胶质瘤MVC显著高于nm23正常表达胶质瘤(P<0.001)。
表2 脑胶质瘤MVC和nm23表达的关系 nm23表达
, 百拇医药
例数
MVC(
±s)P值
+
15
19.7±6.1
<0.001
-
39
36.6±21.2
讨 论
肿瘤发展过程必然伴随血管异常增生，恶性程度越高，新生血管越活跃。毛细血管芽顶部的内皮细胞，受化学趋化剂诱导，分泌胶原酶、尿激酶和血浆酶原激活物，通过蛋白酶降解作用促进肿瘤细胞向临近纤维蛋白凝胶基质和结缔组织间播散[1]。肿瘤细胞本身可产生某些血管生成因子(如VEGF、bFGF等)促进肿瘤血管的生成[4]。本研究中MVC随脑胶质瘤恶性度增加而增多，MG、HMG组的MVC较BG组明显增多(P<0.01，P<0.001)。提示MVC增加导致的血液供应增加在脑胶质瘤恶性倾向发展中起重要作用，并与其侵袭性行为有关。
, http://www.100md.com
影响颅内肿瘤瘤周水肿严重程度的主要因素是肿瘤恶性度[5]。对星形细胞瘤瘤体及水肿组织的连续切片发现，水肿区可见瘤细胞浸润，水肿越明显，浸润越明显，水肿区是瘤细胞侵袭扩散实际范围的病理表现[6]。本研究中MVC随胶质瘤瘤周水肿的瘤组织(P分别小于0.01、0.001和0.005)。表明MVC可反映脑胶质瘤瘤周水肿的严重程度。
Toits[7]报道，MVC是乳腺癌患者的一个独立预后因素。本研究发现复发组胶质瘤MVC显著高于未复发组(P<0.001)，提示MVC是脑胶质瘤患者复发的有用预测指标。胶质瘤侵袭性生长，手术全切困难，化疗又不敏感，残存浸润瘤细胞可能是肿瘤原位复发的重要原因，而肿瘤血管的大量增生无疑促进了肿瘤的复发。
nm23基因编码产物核苷二磷酸激酶(NDPK)参与体内三磷酸核苷的生成，通过影响微管聚合状态及G蛋白介导的信号转导通路而调节细胞代谢，在肿瘤细胞的增殖、分化及侵袭和转移过程起重要作用。本研究nm23低表达与脑胶质瘤恶性度、瘤周水肿呈显著正相关(Pearson列联系数分别为P=0.33和0.39，P<0.05)，且复发组nm23低表达显著高于未复发组(P<0.05)。表明nm23基因表达对人脑胶质瘤生物学行为有重要影响。尽管nm23低表达组胶质瘤MVC显著高于nm23正常表达组(P<0.001)，但nm23基因表达影响脑胶质瘤血管生成的确切机制尚不清楚。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
1 Weidner N.Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer.Am J Pathol,1995,147:9
2 Takino H,Herman V,Weiss M,et al. Purine-binding factor (nm23) gene expression in pituitary tumors:marker of adenoma invasiveness.J Clin Endocrinol Metab,1995,80:1733
3 Maeda K,Chung YS,Takatsuka S, et al. Tumor angiogenesis and tumor cell proliferation as prognostic indicators in gastric carcinoma.Br J Cancer,1995,72:319
, http://www.100md.com
4 Samoto K,Ikezaki K,Ono M, et al. Expression of vascular endothelial growth factor and its possible relation with neovascularization in human brain tumors.Cancer Res,1995,55:1189
5 腾良珠，浦佩玉，薛庆澄等.脑膜瘤的病理学表现与瘤周水肿.中国肿瘤临床，1996，23：486
6 林志雄，张鹏飞，吴翊钦等.星形细胞瘤生物学行为特征及机理探讨.微侵袭神经外科杂志，1997，2：44
7 Toi M,Kashitani J,Jominaga T.Tumor angiogenesis is an inde-pendent prognostic indicatior in primary breast carcinoma.Int J Cancer,1993,55:371
(收稿：1998-04-03 修回：1998-08-07), 百拇医药