通补1号对D-半乳糖衰老模型大肠菌群的影响1
作者：周丽珍 郝瑞福 姜良铎 杜怀棠 董建华 曹晋桂
单位：周丽珍 郝瑞福 姜良铎 杜怀棠 董建华(北京中医药大学东直门医院，北京 100700)；曹晋桂(空军总医院)
关键词：通补Ⅰ号；D-半乳糖模型鼠；衰老；大肠菌群
中国老年学杂志/990428 摘 要 目的 研究通补Ⅰ号对D-半乳糖衰老小鼠模型的大肠杆菌群的影响。方法 采用20±2 g ICR品系小鼠用D-半乳糖造模，同时用通补Ⅰ号治疗，采用滴注法检测衰老模型小鼠大肠杆菌、双歧杆菌及拟杆菌数量。结果 D-半乳糖衰老模型大肠杆菌群中大肠杆菌增多，拟杆菌、双歧杆菌变化不大，通补Ⅰ号具有防治此模型肠杆菌增多的作用。结论 通补Ⅰ号可通过抑制肠杆菌的产生，达到延缓衰老之功效。
国内外学者利用药物延缓衰老的研究甚多，并取得了一定的成绩。但利用通补法延缓衰老未见报道。我们根据“虚则补之”、“六腑以通为补”的中医理论，结合著名中医学家董建华教授延缓衰老的临床经验，以及临床调研结果，提出了脾肾两虚，胃肠郁滞，气血失和的中医衰老病理，并观察、探讨了具有补益脾肾，通腑降浊，调和气血作用的通补1号延缓衰老的临床疗效及主要作用机制，以期开辟出一条中医药延缓衰老的新的途径。
, 百拇医药
衰老“代谢失调学说”被公认为是一种衰老综合学说，据此有人研究出D-半乳糖亚急性衰老模型〔1〕。但此衰老模型大肠菌群是否存在衰老改变?抗衰药物对此模型大肠菌群有何影响?至今未见报道。本文成功地复制了D-半乳糖衰老模型，并观察了此模型的大肠菌群变化，以及通补1号对大肠菌群失调的预防治疗作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物 采用ICR品系小鼠，雌雄各半，体重20±2 g，均由中国医科院动物繁殖中心提供。
1.2 实验试剂及药品 D-半乳糖由上海试剂二厂生产，通补1号由人参叶、肉苁蓉、酒军等药物组成，由我院制剂室提供，配成每ml含生药2.6 g；乳酸菌素片：由黑龙江省阎家岗制药厂生产，1.2 g/片。
1.3 实验方法
1.3.1 模型的制备 D-半乳糖用0.9%生理盐水稀释成10 mg/ml浓度，然后按每天每公斤体重80 mg剂量，给小鼠颈部皮下注射，连续1个月。
, 百拇医药
1.3.2 实验分组 随机分为正常对照组、模型组、预防实验组和治疗组四组。正常对照组给小鼠每天颈部皮下注射0.9%生理盐水0.2 ml，连续一个月，模型组造模方法同前，预防实验组从造模之日开始灌药，直至造模时间结束，通补Ⅰ号大剂量组每日每只灌服0.4 ml，中剂量组每日每只灌服0.2 ml，小剂量组每日每只灌服0.1 ml，乳酸菌素预防组每日每只灌服0.2 ml，治疗实验组统一成模后开始灌药，连续1个月，通补Ⅰ号治疗组：每日每只灌服0.2 ml。(根据预防实验，选择疗效最佳-中剂量)，乳酸菌素治疗组每日每只灌服0.2 ml，自然恢复组每日每只灌服0.9%生理盐水0.2 ml。
上述药物给药剂量均按动物与人给药剂量的常规换算方法制定。大、中、小剂量分别为人的20倍、10倍和5倍。
1.3.3 粪便培养 于取材前从小鼠肛门处取大便，用无菌消毒玻璃纸称其重量，后迅速装入内有厌氧液小瓶中，充分振摇后放入冰箱冷藏待测。根据不同细菌采取不同稀释度，用滴注法接种于选择性培养基上〔2〕，大肠杆菌置37℃培养箱内，24～48 h后观察结果并计数。双歧杆菌、拟杆菌采用Gas Park厌氧法，置37℃培养箱内，3 d后计数。所得粪便细菌结果以每克粪便量的IgN表示。
, http://www.100md.com
2 结果与讨论
2.1 预防实验 衰老模型小鼠双歧杆菌、拟杆菌变化不大，但肠杆菌增多。通补Ⅰ号中剂量组具有预防模型组肠杆菌增多的作用，且与正常对照组相比无显著性差异(见表1)。
2.2 治疗实验 通补Ⅰ号、乳酸菌素均有治疗衰老模型肠杆菌增多的作用(见表2)。
表1 通补Ⅰ号对衰老模型大肠菌群的影响(
±s) 组别
n
粪便菌群
双歧杆菌
拟杆菌
, http://www.100md.com 肠杆菌
模型组
5
8.17±0.90
10.42±0.42
8.64±0.811)2)
对照组
5
9.20±0.76
8.65±1.97
7.60±0.48
大剂量组
, 百拇医药
5
8.75±0.78
9.21±1.18
7.45±0.97
中剂量组
5
8.59±0.54
9.56±1.03
7.57±0.41
小剂量组
5
7.63±1.04
, http://www.100md.com
10.71±1.08
8.75±0.15
乳酸菌素组
5
7.75±0.14
9.85±2.02
8.64±0.21
1)P<0.05与对照组、通补Ⅰ号中剂量组相比，2)P>0.05与通补Ⅰ号大、小剂量组及乳酸菌素组相比表2 通补Ⅰ号和乳酸菌素对衰老模型大肠菌群的影响(±s)
n
, http://www.100md.com 肠杆菌
通补Ⅰ号组
5
8.02±0.47
乳酸菌素组
5
8.24±0.50
自然恢复组
5
8.56±0.041)2)
正常对照组
5
7.50±0.92
, http://www.100md.com
1)P<0.05与通补Ⅰ号治疗组、正常对照组相比，2)P<0.01与乳酸菌素治疗组相比
2.3 老年微生态学说认为，随着增龄，人体内的双歧杆菌越来越少，老年人肠菌群中双歧杆菌明显减少，甚至消失，而产气荚膜杆菌、拟杆菌和肠杆菌增多。这种菌群的组成变化是一种衰老表现，该变化的发生又促进衰老，形成恶性循环〔3〕。本文对D-半乳糖衰老小鼠模型粪便进行了双歧杆菌、拟杆菌、肠杆菌三种细菌的培养，结果发现模型小鼠肠杆菌增多，而双歧杆菌、拟杆菌变化不大，其原因可能是动物样本数量不多，也可能是该模型未能出现典型的大肠菌群变化表现，这还有待于以后的进一步研究。
2.4 本文观察到通补Ⅰ号具有预防或治疗衰老模型肠杆菌增多的作用，说明通补Ⅰ号延缓衰老机理之一，可能是通过抑制肠杆菌的产生，减少如吲哚、吲哚乙酸等毒素的吸收，减缓机体慢性中毒。
1 原国家科委重点科技项目(010)
作者简介：周丽珍，女，32岁，主治医师，博士，从事老年病研究
参考文献
1 龚国清，徐黻本.小鼠衰老模型的研究.中国药科大学学报，1991；22(2)：101
2 魏 曦.正常菌群与健康.第1版.上海：上海科学技术出版社，1985：62
3 贾辅忠.老年消化道常在菌群与自源性感染.实用老年医学，1990；4(3)：102
〔1998-06-23收稿 1998-08-10修回〕, 百拇医药
单位：周丽珍 郝瑞福 姜良铎 杜怀棠 董建华(北京中医药大学东直门医院，北京 100700)；曹晋桂(空军总医院)
关键词：通补Ⅰ号；D-半乳糖模型鼠；衰老；大肠菌群
中国老年学杂志/990428 摘 要 目的 研究通补Ⅰ号对D-半乳糖衰老小鼠模型的大肠杆菌群的影响。方法 采用20±2 g ICR品系小鼠用D-半乳糖造模，同时用通补Ⅰ号治疗，采用滴注法检测衰老模型小鼠大肠杆菌、双歧杆菌及拟杆菌数量。结果 D-半乳糖衰老模型大肠杆菌群中大肠杆菌增多，拟杆菌、双歧杆菌变化不大，通补Ⅰ号具有防治此模型肠杆菌增多的作用。结论 通补Ⅰ号可通过抑制肠杆菌的产生，达到延缓衰老之功效。
国内外学者利用药物延缓衰老的研究甚多，并取得了一定的成绩。但利用通补法延缓衰老未见报道。我们根据“虚则补之”、“六腑以通为补”的中医理论，结合著名中医学家董建华教授延缓衰老的临床经验，以及临床调研结果，提出了脾肾两虚，胃肠郁滞，气血失和的中医衰老病理，并观察、探讨了具有补益脾肾，通腑降浊，调和气血作用的通补1号延缓衰老的临床疗效及主要作用机制，以期开辟出一条中医药延缓衰老的新的途径。
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衰老“代谢失调学说”被公认为是一种衰老综合学说，据此有人研究出D-半乳糖亚急性衰老模型〔1〕。但此衰老模型大肠菌群是否存在衰老改变?抗衰药物对此模型大肠菌群有何影响?至今未见报道。本文成功地复制了D-半乳糖衰老模型，并观察了此模型的大肠菌群变化，以及通补1号对大肠菌群失调的预防治疗作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物 采用ICR品系小鼠，雌雄各半，体重20±2 g，均由中国医科院动物繁殖中心提供。
1.2 实验试剂及药品 D-半乳糖由上海试剂二厂生产，通补1号由人参叶、肉苁蓉、酒军等药物组成，由我院制剂室提供，配成每ml含生药2.6 g；乳酸菌素片：由黑龙江省阎家岗制药厂生产，1.2 g/片。
1.3 实验方法
1.3.1 模型的制备 D-半乳糖用0.9%生理盐水稀释成10 mg/ml浓度，然后按每天每公斤体重80 mg剂量，给小鼠颈部皮下注射，连续1个月。
, 百拇医药
1.3.2 实验分组 随机分为正常对照组、模型组、预防实验组和治疗组四组。正常对照组给小鼠每天颈部皮下注射0.9%生理盐水0.2 ml，连续一个月，模型组造模方法同前，预防实验组从造模之日开始灌药，直至造模时间结束，通补Ⅰ号大剂量组每日每只灌服0.4 ml，中剂量组每日每只灌服0.2 ml，小剂量组每日每只灌服0.1 ml，乳酸菌素预防组每日每只灌服0.2 ml，治疗实验组统一成模后开始灌药，连续1个月，通补Ⅰ号治疗组：每日每只灌服0.2 ml。(根据预防实验，选择疗效最佳-中剂量)，乳酸菌素治疗组每日每只灌服0.2 ml，自然恢复组每日每只灌服0.9%生理盐水0.2 ml。
上述药物给药剂量均按动物与人给药剂量的常规换算方法制定。大、中、小剂量分别为人的20倍、10倍和5倍。
1.3.3 粪便培养 于取材前从小鼠肛门处取大便，用无菌消毒玻璃纸称其重量，后迅速装入内有厌氧液小瓶中，充分振摇后放入冰箱冷藏待测。根据不同细菌采取不同稀释度，用滴注法接种于选择性培养基上〔2〕，大肠杆菌置37℃培养箱内，24～48 h后观察结果并计数。双歧杆菌、拟杆菌采用Gas Park厌氧法，置37℃培养箱内，3 d后计数。所得粪便细菌结果以每克粪便量的IgN表示。
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2 结果与讨论
2.1 预防实验 衰老模型小鼠双歧杆菌、拟杆菌变化不大，但肠杆菌增多。通补Ⅰ号中剂量组具有预防模型组肠杆菌增多的作用，且与正常对照组相比无显著性差异(见表1)。
2.2 治疗实验 通补Ⅰ号、乳酸菌素均有治疗衰老模型肠杆菌增多的作用(见表2)。
表1 通补Ⅰ号对衰老模型大肠菌群的影响(
±s) 组别n
粪便菌群
双歧杆菌
拟杆菌
, http://www.100md.com 肠杆菌
模型组
5
8.17±0.90
10.42±0.42
8.64±0.811)2)
对照组
5
9.20±0.76
8.65±1.97
7.60±0.48
大剂量组
, 百拇医药
5
8.75±0.78
9.21±1.18
7.45±0.97
中剂量组
5
8.59±0.54
9.56±1.03
7.57±0.41
小剂量组
5
7.63±1.04
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10.71±1.08
8.75±0.15
乳酸菌素组
5
7.75±0.14
9.85±2.02
8.64±0.21
1)P<0.05与对照组、通补Ⅰ号中剂量组相比，2)P>0.05与通补Ⅰ号大、小剂量组及乳酸菌素组相比表2 通补Ⅰ号和乳酸菌素对衰老模型大肠菌群的影响(
±s)n
, http://www.100md.com 肠杆菌
通补Ⅰ号组
5
8.02±0.47
乳酸菌素组
5
8.24±0.50
自然恢复组
5
8.56±0.041)2)
正常对照组
5
7.50±0.92
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1)P<0.05与通补Ⅰ号治疗组、正常对照组相比，2)P<0.01与乳酸菌素治疗组相比
2.3 老年微生态学说认为，随着增龄，人体内的双歧杆菌越来越少，老年人肠菌群中双歧杆菌明显减少，甚至消失，而产气荚膜杆菌、拟杆菌和肠杆菌增多。这种菌群的组成变化是一种衰老表现，该变化的发生又促进衰老，形成恶性循环〔3〕。本文对D-半乳糖衰老小鼠模型粪便进行了双歧杆菌、拟杆菌、肠杆菌三种细菌的培养，结果发现模型小鼠肠杆菌增多，而双歧杆菌、拟杆菌变化不大，其原因可能是动物样本数量不多，也可能是该模型未能出现典型的大肠菌群变化表现，这还有待于以后的进一步研究。
2.4 本文观察到通补Ⅰ号具有预防或治疗衰老模型肠杆菌增多的作用，说明通补Ⅰ号延缓衰老机理之一，可能是通过抑制肠杆菌的产生，减少如吲哚、吲哚乙酸等毒素的吸收，减缓机体慢性中毒。
1 原国家科委重点科技项目(010)
作者简介：周丽珍，女，32岁，主治医师，博士，从事老年病研究
参考文献
1 龚国清，徐黻本.小鼠衰老模型的研究.中国药科大学学报，1991；22(2)：101
2 魏 曦.正常菌群与健康.第1版.上海：上海科学技术出版社，1985：62
3 贾辅忠.老年消化道常在菌群与自源性感染.实用老年医学，1990；4(3)：102
〔1998-06-23收稿 1998-08-10修回〕, 百拇医药